百合体胚发生过程中miR166及其靶基因的鉴定与表达分析

发布时间：2017-12-30 04:10

本文关键词：百合体胚发生过程中miR166及其靶基因的鉴定与表达分析　出处：《沈阳农业大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：百合体细胞胚具有发生数量多、繁殖率高、易萌发成苗等优点,但同时也面临着胚性能力不易保存,繁殖速率慢等难题。研究百合体细胞胚的发生机制,能够为百合工厂化快繁、转基因育种、突变体筛选、人工种子研制等研究提供理论依据与实践意义。蛋白质的合成过程实际上就是基因表达的过程,而miRNA能够通过引导靶基因mRNA降解、抑制翻译等途径负向调控植物基因的表达。因此,研究百合体胚发生过程中miRNA与靶基因的表达模式,有助于揭示百合体胚发生的分子调控机制,从而解决体胚生产过程中出现的一系列难题,本试验对百合体胚发生过程中的miR166及其靶基因进行了鉴定与表达分析,并得出以下主要结论:1.lpu-miR166a/b/c和lda-miR166a/b/c的克隆及其靶基因预测采用特异的茎环引物反转录方法(Stem-1oop RT PCR),克隆得到了细叶百合(Lilium pumilumDC.Fisch.)lpu-miR166a、lpu-miR166b、lpu-miR166c 以及兰州百合(Lilium davidii var.unicolor)lda-miR166a、lda-miR166b、lda-miR166c 成熟体序列并预测得到了相应的靶基因,lpu-miR166a/lda-miR166a 的靶基因为 LMBR1,lpu-miR166b/lpu-miR166c的靶基因为 LpIDD1,lda-miR166b/lda-miR166c 的靶基因为LdHD-ZIP Ⅲ。2.鉴定miR166及其靶基因的作用位点通过RLM-5'RACE技术鉴定miR166及其靶基因的作用位点,结果表明lpu-miR1 66a/lda-miR 166a的切割位点有一个且在该位点的切割频率为10/10;lpu-miR166b/lpu-miR166c的切割位点有一个且在该位点切割频率为8/10;lda-miR166b/lda-miR166c的切割位点有一个且在该位点切割频率为10/10。3.miR166及其靶基因在百合体胚发生过程中的表达分析lpu-miR166a/lpu-miR166b/lpu-miR166c与其靶基因的表达模式整体呈负相关关系,其中lpu-miR166a在胚性保存阶段几乎不表达,在球形胚中的表达量出现峰值,随着体胚的成熟,lpu-miR166a的表达量逐渐下降,其靶基因LpLMBR1的表达量则显著上升;lpu-miR1 66b/lpu-miR1 66c在胚性保存阶段表达量很低,在球形胚中的表达量显著上升,随着体胚的成熟,lpu-miR166c的表达量呈现逐步上升趋势,lpu-miR166b的表达量呈现出先降低后升高的趋势,而其靶基因LpIDD1的表达量则呈现先升高后降低的趋势;lda-miR166a与其靶基因LdLMBR1的表达模式整体呈负相关关系,随着体胚的成熟,lda-miR166a的表达量呈逐步上升趋势,在子叶形胚时期达到峰值,而LdLMBR1的表达量没有明显变化;lda-miR166b/lda-miR166c在胚性保存时期表达量最低,随着体胚的发育,lda-miR166c的表达量逐渐升高,lda-miR166b的表达量先升后降再升,LdHD-ZIP Ⅲ的表达量先降后升再降,说明lda-miR166b对LdHD-ZIP Ⅲ起主要调控作用。
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【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S682.29

【参考文献】