病原弧菌与白斑综合征病毒共感染对养殖对虾生长与存活的影响

发布时间：2018-03-08 19:07

本文选题：凡纳滨对虾　切入点：副溶血弧菌　出处：《中国海洋大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：多年来,细菌性和病毒性疾病的发生和流行,给世界范围内的水产养殖业造成重大的经济损失。凡纳滨对虾因其耐高温、盐度适范围广“,且适宜高密度养殖等特点在世界范围内大规模的养殖,但是随着养殖规模的不断扩大,许多病害频繁的出现。白斑综合征病毒(white spot syndrome virus, WSSV)是感染养殖对虾的-种重要的病毒性病原,副溶血弧菌的感染对对虾养殖的危害也日益严重,病毒与细菌的交叉或叠加感染引起的对虾死亡可能更加严重：本论文研究包括三部分：(1)人工培育对虾苗种体内可r培养细菌的数量及组成分析；(2)副溶血弧菌和WSSV共感染对凡纳滨对虾的成活率的影响：(3)两株毒力不同的副溶血弧菌和WSSV共感染对凡纳滨对虾存活率的影响。1.人工培育对虾苗种体内可培养细菌的数量及组成分析：为调查研究不同养殖场携带WSSV、IHHNV病毒与不携带上述2种病毒的对虾苗种体内可培养细菌数量和组成,本章应用常规细菌分离、培养与纯化,细菌16SrDNA序列分析等方法调查分析了山东、天津、浙江部分苗种场凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)和中国明对虾(Fenneorpenaeus chinensis)苗种体内的可培养细菌总数以及优势菌的种类和数量,并用PCR的方法检测对虾携带病毒情况。结果显示,凡纳滨对虾和中国明对虾苗种体内的可培养细菌总数均在105～107CFU/g之间,分离出的细菌分属于弧菌属(Vibrio)、发光杆菌属(Photobacterium)、芽孢杆菌属(Bacillus)、盐单胞菌属(Halomonas)等8个属,弧菌属(Vibrio)在对虾苗种体内占绝对优势,达43.80%-90.23%。凡纳滨对虾和中国明对虾苗种部分样品检测为WSSV和IHHNV阳性,WSSV检出率为33.33%,IHHNV检出率为22.22%,同时携带两种病毒的检出率为11.11%。只携带WSSV病毒以及同时携带两种病毒的对虾苗种体内的总菌数在1.23×107-4.14×107CFU/g之间,显著高于其他批次的样品(P0.05),且弧菌数量在107CFU/g左右,品著高于其他批次的样品(P0.05)。只携带IHHNV以及不携带病毒的对虾苗种体内的弧菌数量为104-106CFU/g。研究表明,弧菌属在凡纳滨对虾和中国明对虾苗种体内普遍存在且为优势菌属,并且携带WSSV可能会引起对虾苗种体内的弧菌数量增长。2.副溶血弧菌和WSSV共感染对凡纳滨对虾的成活率的影响：本章通过投喂的方法使凡纳滨对虾感染自斑病,注射的方法使毒力较强的副溶血弧菌在凡纳滨对虾体内潜伏感染,并分为先投喂WSSV病料后注射副溶血弧菌,先注射副溶血弧菌后投喂WSSV病料两种情况进行实验。并统计各组凡纳滨对虾的累积死亡率,用TCBS平板涂布的方法检测凡纳滨对虾血淋巴中的弧菌数量,用绝对荧光定量PCR的方法检测凡纳滨对虾鳃部的WSSV的拷贝数,以及Real-TimePCR方法检测凡纳滨对虾鳃部的相关功能基因LvMyD88、LvTube和Lvakt的表达量。先投喂WSSV病料后注射副溶血弧菌组从开始投喂WSSV病料到实验第10d死亡率达到100%.而先投喂WSSV病料后注射PBS组从开始投喂WSSV病料到实验第13d死亡率达到100%。先注射副溶血弧菌,后投喂WSSV病料组在从开始投喂WSSV病料到实验的第lld时凡纳滨对虾的累积死亡率达到100%,只感染WSSV组在实验的第13d累积死亡率达到100%。只注射副溶血弧菌组,弧菌会在凡纳滨对虾的血淋巴中逐渐减少,而其它组的弧菌数量都显著的增加(P0.05)。先投喂WSSV病料后注射副溶血弧菌组、先注射副溶血弧菌后投喂WSSV和只投喂WSSV组在投喂WSSV病料后的WSSV拷贝数分别在72h、96h和144h时由105copies mg-1 tissue迅速升高到107 copies mg-1 tissue。本研究的结果提示：副溶血弧菌的感染能够加快WSSV在对虾体内的增殖,WSSV同时也能促进副溶血弧菌的繁殖,副溶血弧菌的快速繁殖结合WSSV的大量增殖导致对虾的大量死亡。3.两株毒力不同的副溶血弧菌和WSSV共感染对凡纳滨对虾存活率的影响：本章通过注射的方法用WSSV和两株毒力不同的副溶血弧菌感染凡纳滨对虾。并分为先注射WSSV粗提液后注射副溶血弧菌,先注射副溶血弧菌后注射WSSV粗提液两种情况进行试验。WSSV为主要病原,两株毒力不同的副溶血弧菌用较少的剂量在对虾体内潜在感染。并统计各组凡纳滨对虾的累积死亡率,用TCBS平板涂布的方法检测凡纳滨对虾血淋巴和肝胰腺中的弧菌数量,用绝对荧光定量PCR的方法检测凡纳滨对虾鳃部的WSSV的拷贝数。结果证明：(1)WSSV先行感染,副溶血弧菌的二次感染能够加快凡纳滨对虾的死亡,而副溶血弧菌的二次感染又与弧菌的浓度和菌株的毒力强弱有关。WSSV在凡纳滨对虾鳃部的复制与副溶血弧菌的毒力强弱也有关,而凡纳滨对虾体内的弧菌数量与弧菌的毒力强弱无关。(2)副溶血弧菌先行感染再有WSSV的叠加感染,弧菌毒力的强弱对凡纳滨对虾的死亡率以及WSSV在凡纳滨对虾体内的增殖均无较大的影响。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：中国海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S945.4

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