鳗鲡人工繁殖过程中性腺与血液中类固醇激素含量变化的研究

发布时间：2018-03-15 03:05

本文选题：鳗鲡　切入点：人工催熟　出处：《上海海洋大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：鳗鲡经济价值高、营养丰富。目前,鳗鲡的人工繁育还未取得成功。深入开展鳗鲡繁殖生物学基础研究,从根本上解决鳗鲡人工繁殖技术难关,这才是解决问题的根本途径。本研究以捕捞的野生降海鳗鲡为材料,利用外源激素诱导鳗鲡卵巢发育成熟,对人工催熟过程中鳗鲡外部形态指标进行监测;对卵巢发育不同时期,鳗鲡血清及性腺中类固醇激素浓度的变化进行研究。应用超高效液相色谱串联质谱联用(ultra high performance liquid chromatographytandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)方法对样品进行测定分析,通过对质谱参数、液相参数及样品前处理方法进行优化,方法检测限及回收率等均达到残留检测的要求。应用本方法对鳗鲡血清及性腺内类固醇激素进行定量分析,具有灵敏、高回收率、准确、稳定的特点。对于实际样品的检测及研究,具体研究内容如下:1、采用多次肌肉注射外源激素CPE(鲤鱼脑垂体,20mg/kg·次)+h CG(人绒毛膜促性腺激素,300IU/kg·次)混合物匀浆液的方法,诱导雌性鳗鲡性腺发育成熟。其中,对照组雌性鳗鲡性腺成熟系数基本不变,最高时也只有(2.25±0.23)%,性腺基本不发育;实验组雌性鳗鲡性腺逐渐发育成熟,GSI显著升高,最高时高达(23.14±3.87)%,性腺发育良好,激素作用效果明显。2、利用UPLC-MS/MS方法测定分析雌性鳗鲡发育成熟过程中血清内六种类固醇激素:睾酮(Testosterone,T)、17α-羟基孕酮(17α-hydroxyprogesterone,17α-OHP)、17α,20β-二羟基-4-孕烯-3-酮(17α,20β-dihydroxy-4-pregnen-3-one,DHP)、雌酮(estrone,E1)、雌二醇(estradiol-17β,E2)、雌三醇(estriol,E3)的含量变化。结果表明,6种类固醇激素的线性范围为12.5~125 ng/mL,线性关系良好(r0.99);血清样品在25ng/mL添加水平下的平均回收率为86.9%~98%,相对标准偏差为1.7%~9.5%;方法检出限(S/N10)为0.1ng/mL。对样品进行测定,结果表明,随着注射次数的增加(产卵之前),实验组鳗鲡血清内6种类固醇激素的浓度均呈现逐步增加的趋势,其浓度均高于对照组(对照组E1、E3未检测到),实验组T、17α-羟基孕酮、DHP、E1、E2均在产卵期最高,E3在未产卵期最高。对照组鳗鲡血清中T、17α-羟孕酮、DHP、E2的含量均处于一个较低水平,平均浓度分别为(3.65±0.63)、(2.53±0.49)、(2.27±0.24)、(2.46±0.47)ng/mL。3、利用UPLC-MS/MS方法测定分析雌性鳗鲡发育成熟过程中性腺内四种类固醇激素(T、DHP、E2、E3)含量变化。结果显示,4种类固醇激素的线性范围为25~250 ng/mL,线性关系良好(r0.99);性腺样品在25ng/mL添加水平下的平均回收率为73.6%~88.1%,相对标准偏差为1.9%~9.7%;方法检出限(S/N10)为0.1ng/g。随着注射次数的增加,实验组鳗鲡性腺内4种类固醇激素均呈现增加的趋势,其浓度均高于对照组(对照组E2、E3未检测到)。对照组鳗鲡性腺中T、DHP的含量均处于一个较低水平,且整个周期中未检测到E2和E3。实验组鳗鲡性腺中T含量的增加趋势较缓慢,产卵时浓度最高(7.25±1.88)ng/g,显著高于对照组(p0.05)。实验组DHP含量总体呈升高的趋势,未产卵组DHP含量达最高(17.79±4.69)ng/g。E3在整个发育过程呈无规则变化。4、利用酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定分析性腺中类固醇激素的水平。结果显示,与实验组相比,对照组雌性鳗鲡性腺中P、17α-OHP含量相对较高(含量分别为2.83±0.28、19.07±3.03ng/g),对照组T、DHP、E3、E1、E2较低(含量分别为1.07±0.14、0.35±0.08、0.33±0.08 ng/g,33.45±3.46 pmol/L,55.2±4.69 ng/L);实验组T、P、17α-OHP及DHP呈现逐渐增加的趋势,而E2水平逐渐降低,E1呈现先升高后降低的变化趋势,E3在整个实验周期内变化幅度不大。其中,P、DHP及E3水平在未产卵组最高,值分别为3.76±0.25、2.41±0.14、1.69±0.23 ng/g;T水平在产卵组最高,含量为3.26±0.45 ng/g;E2、E1及17α-OHP分别在第3、7、11次激素注射后激素水平达到峰值,含量分别为60.09±2.26 ng/L、46.37±4.37 pmol/L、27.17±1.53 ng/g。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：上海海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S917.4

【参考文献】