东北地区甜瓜枯萎病菌遗传多样性及血清学检测分析

发布时间：2018-04-03 21:57

本文选题：尖孢镰孢菌　切入点：致病性　出处：《沈阳农业大学》2017年硕士论文

【摘要】：甜瓜枯萎病是由尖孢镰孢菌引起的一种甜瓜病害,其流行和传播对我国甜瓜生产造成了不同程度的经济损失。本文在传统形态学的基础上,结合了分子生物学的方法,对甜瓜枯萎病的致病菌尖孢镰孢菌的种群结构、致病力和不同品种甜瓜的抗病性进行了分析、研究;采用酶联免疫反应(ELISA),对尖孢镰孢菌进行了检测,并建立了检测方法。1.对东北地区甜瓜枯萎病菌致病力进行了测定从辽宁省、吉林省、黑龙江省及内蒙古自治区采集的甜瓜枯萎病标样中分离纯化获得62株致病菌,在传统形态学分析的基础上,采用尖孢镰孢菌特异性引物FOF1/FOR1对供试菌株的基因组DNA进行扩增,确定44株菌株为尖孢镰孢菌。致病性测定结果表明,44株尖孢镰孢菌对甜瓜均有一定的侵染能力,病情指数在31.7-83.3之间,致病力较强。对不同品种的甜瓜抗病力的测定结果表明,供试的21种甜瓜种子中,有2种为高感(S)品种,12种为感病(MS)品种,6种为中抗(MR),1种为抗病(R)品种,供试的21种甜瓜种子中未发现高抗(HR)品种。2.对44株东北地区甜瓜枯萎病菌遗传多样性进行了分析采用SRAP分子标记技术对44株来自东北不同地区甜瓜枯萎病株的尖孢镰孢菌进行遗传多样性分析,探究其遗传多样性与地理来源的关系。研究结果表明:从100对SRAP引物中筛选出对多态性强、重复性好的8组SRAP引物组合,共扩增出53条条带,其中多态性条带53条,多态性比率为100%,平均每对引物扩增得到6.63条多态性条带。通过聚类分析,44株供试菌株相似系数为0.47～0.98之间,不同菌株之间的亲缘关系较近,遗传多样性较为丰富,但是仍存在遗传差异,且与地理来源没有明显的相关性。3.初步建立了甜瓜枯萎病血清学检测方法通过对尖孢镰孢菌菌丝蛋白的提取制备了多克隆抗体,抗体纯化后即可用作对尖孢镰孢菌的检测。通过间接ELISE法的测定,确定了所制备的多克隆抗体对甜瓜枯萎病的致病菌有特异性,并且测定了其效价为1:25600。同时对抗体和抗原的工作浓度进行了优化选择,最终确定抗体的最佳工作稀释倍数为1:1000;对酶标抗体的工作浓度也进行了选择,最终确定为1:1000,此浓度的确定既考虑了实验效果有考虑到了经济因素。甜瓜枯萎病初期的发病部位在根茎部,本试验对患病的甜瓜根茎部中的尖孢镰孢菌进行了 ELISA检测。试验结果证明,患病甜瓜检测结果为阳性,而健康的甜瓜根茎为阴性。甜瓜枯萎病为土传病害,在土中的致病菌是致使甜瓜罹病的重要原因,本试验同时对土壤中的尖孢镰孢菌进行了检测。试验证明,种植甜瓜一年和五年的土壤的检测结果均为阳性,且可以根据尖孢镰孢菌蛋白的标准曲线推算出这两种土壤的含菌量分别为2.28 μg/ml和4.43 μg/ml,灭菌后的土壤检测结果为阴性。此外,还对抗体的灵敏度进行了测定,当抗原稀释至0.0050 μg/ml时,P/N2.1。
[Abstract]:In this paper , the genetic diversity of Fusarium wilt of melon in Northeast China was analyzed and the relationship between genetic diversity and geographical origin was studied .

【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S436.5

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