高温和甲基睾酮联合处理对尼罗罗非鱼性别分化的影响研究
发布时间：2020-12-06 20:38
尼罗罗非鱼是世界上第三大养殖鱼类,具有重要的经济价值。由于尼罗罗非鱼的雄性生长速度比雌性快30%以上,且繁殖周期短,繁殖后代会极大影响其生长速度,进行单雄性养殖可以提高养殖效益。通过外源雄激素处理可以有效诱导雌性尼罗罗非鱼性逆转成雄性,然而雄激素是环境内分泌干扰物质,会对生态环境产生极大的危害。另外,尼罗罗非鱼的性别分化还受温度变化控制,高温会使一部分雌性发生性逆转变为雄性,我们推测高温处理可以减少雄激素的使用量。为了探究高温处理可以补偿多少雄激素的使用量,弄清高温及甲基睾酮联合处理对尼罗罗非鱼性别分化过程的影响,我们在尼罗罗非鱼性别决定与分化的关键时期,通过高温和添加浓度梯度外源雄激素的饲料共同处理尼罗罗非鱼,统计分析了各组的雄性率,筛选出了高温协助处理下外源雄激素添加的最低浓度;分析了在性逆转过程中,尼罗罗非鱼体内雌雄激素水平变化情况;明确了高温和外源雄激素处理下,参与尼罗罗非鱼性别分化的关键基因Cyp19a1a与Dmrt1的mRNA和蛋白表达水平变化趋势,为尼罗罗非鱼的全雄养殖实践提供了科学依据,为罗非鱼的性别控制提供了理论基础。具体结果如下:1.高温和甲基睾酮（MT）联合处理下...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
dpf性腺组织学观察Fig.1Histologicalobservationofgonadsat91dpf
山东农业大学硕士专业学位论文19温条件有效减少了激素使用量。.图2尼罗罗非鱼雄性率统计Fig.2NiletilapiamaleratestatisticsC+0MT，C+2MT，C+10MT，C+20MT分别代表在9dpf时，尼罗罗非鱼使用含不同浓度（0mg/kg，2mg/kg，10mg/kg，20mg/kg）甲基睾酮的饲料在28°C水体中饲喂12天。T+0MT，T+2MT，T+10MT，T+20MT分别代表在9dpf时，尼罗罗非鱼使用含不同浓度（0mg/kg，2mg/kg，10mg/kg，20mg/kg）甲基睾酮的饲料在36°C水体中饲喂12天。数据以平均值±标准差表示。（P<0.05）C+0MT,C+2MT,C+10MT,C+20MTrespectivelyrepresentat9dpf,Niletilapiawasfedinwaterat28°Cfor12dayswithdifferentconcentrationsofMT（0mg/kg，2mg/kg，10mg/kg，20mg/kg），T+0MT,T+2MT,T+10MT,T+20MTrespectivelyrepresentat9dpf,Niletilapiawasfedinwaterat36°Cfor12dayswithdifferentconcentrationsofMT（0mg/kg，2mg/kg，10mg/kg，20mg/kg），Dataareexpressedasthemean±SD.(P<0.05)3.2高温和甲基睾酮联合处理后内源性雌、雄激素水平的检测结果3.2.1尼罗罗非鱼仔鱼遗传性别的鉴定对于21dpf的尼罗罗非鱼仔鱼，无法直接分辨雌雄，需要利用性别特异分子标记引物SCAR进行普通PCR扩增来鉴别各组雌雄鱼的遗传性别。PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳进行检测，结果如图3所示，遗传性别为雌性的罗非鱼只有一条带，长度为1151bp；遗传性别为雄性的罗非鱼则有两条带，长度分别为1151bp、711bp。
高温和甲基睾酮联合处理对尼罗罗非鱼性别分化的影响研究20图3尼罗罗非鱼遗传性别鉴定Fig.3Niletilapiageneticsexidentification.注：M：DL1000DNAMarker：XX：雌性尼罗罗非鱼；XY：雄性尼罗罗非鱼Note:M：DL1000DNAMarker：XX：FemaleNiletilapia；XY：MaleNiletilapia3.2.2高温和甲基睾酮联合处理对尼罗罗非鱼体内E2水平的影响使用ELISA法检测21dpf尼罗罗非鱼体内雌激素E2水平。除了XY组是检测对照雄鱼（28℃，0mg/kgMT）体内的E2水平，其他组均是检测不同处理组雌鱼体内的E2水平。以分析诱导雌性发生性逆转的过程中，高温和甲基睾酮处理对内源性雌激素E2水平的影响。体内E2水平检测结果如图4。由图4可见，所有雌鱼组E2水平都显著高于XY组。无甲基睾酮条件下，高温处理组（T+0MT）E2水平显著高于对照温度组（C+0MT），说明高温条件显著下调了罗非鱼体内的E2水平。无论高温组还是对照组，随着饲料中MT浓度的增加，E2水平皆呈下降趋势，但随着MT浓度的增加，E2水平下降趋势不明显。说明甲基睾酮处理会下调罗非鱼体内的E2水平。另外，高温对照组（0MT）的E2水平低于低温20MT组，说明高温下调E2水平的效果比甲基睾酮处理更显著。
【参考文献】：
期刊论文
[1]石斑鱼性逆转研究现状[J]. 邢晨光,金珊,袁思平. 水产科学. 2006(04)
[2]鱼类人工性别控制[J]. 郝汉舟,杨桂军,谢从新. 水产科学. 2004(07)
[3]脊椎动物性别决定和分化的分子机制研究进展[J]. 周林燕,张修月,王德寿. 动物学研究. 2004(01)
[4]提高奥尼罗非鱼雄性率的主要措施[J]. 赵永志. 水产养殖. 2001(04)
[5]鱼类性别决定及其机制的研究进展[J]. 王德寿,吴天利,张耀光. 西南师范大学学报(自然科学版). 2000(03)
[6]激素诱导罗非鱼雄性化的试验研究[J]. 钱晖,杨文. 淡水渔业. 1993(04)
硕士论文
[1]外源补偿高温下调的雌二醇水平对尼罗罗非鱼性比及表达的影响研究[D]. 许高朋.山东农业大学 2019
[2]高温下调雌二醇在尼罗罗非鱼基因—温度性别决定中的作用及机制研究[D]. 滕建.山东农业大学 2019
[3]雌、雄激素对罗非鱼性别分化和性腺基因表达的影响[D]. 陈立黎.西南大学 2016
[4]性类固醇激素在尼罗罗非鱼性别决定与分化中的作用[D]. 蒋小龙.西南大学 2014
本文编号：2901995
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
dpf性腺组织学观察Fig.1Histologicalobservationofgonadsat91dpf
山东农业大学硕士专业学位论文19温条件有效减少了激素使用量。.图2尼罗罗非鱼雄性率统计Fig.2NiletilapiamaleratestatisticsC+0MT，C+2MT，C+10MT，C+20MT分别代表在9dpf时，尼罗罗非鱼使用含不同浓度（0mg/kg，2mg/kg，10mg/kg，20mg/kg）甲基睾酮的饲料在28°C水体中饲喂12天。T+0MT，T+2MT，T+10MT，T+20MT分别代表在9dpf时，尼罗罗非鱼使用含不同浓度（0mg/kg，2mg/kg，10mg/kg，20mg/kg）甲基睾酮的饲料在36°C水体中饲喂12天。数据以平均值±标准差表示。（P<0.05）C+0MT,C+2MT,C+10MT,C+20MTrespectivelyrepresentat9dpf,Niletilapiawasfedinwaterat28°Cfor12dayswithdifferentconcentrationsofMT（0mg/kg，2mg/kg，10mg/kg，20mg/kg），T+0MT,T+2MT,T+10MT,T+20MTrespectivelyrepresentat9dpf,Niletilapiawasfedinwaterat36°Cfor12dayswithdifferentconcentrationsofMT（0mg/kg，2mg/kg，10mg/kg，20mg/kg），Dataareexpressedasthemean±SD.(P<0.05)3.2高温和甲基睾酮联合处理后内源性雌、雄激素水平的检测结果3.2.1尼罗罗非鱼仔鱼遗传性别的鉴定对于21dpf的尼罗罗非鱼仔鱼，无法直接分辨雌雄，需要利用性别特异分子标记引物SCAR进行普通PCR扩增来鉴别各组雌雄鱼的遗传性别。PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳进行检测，结果如图3所示，遗传性别为雌性的罗非鱼只有一条带，长度为1151bp；遗传性别为雄性的罗非鱼则有两条带，长度分别为1151bp、711bp。
高温和甲基睾酮联合处理对尼罗罗非鱼性别分化的影响研究20图3尼罗罗非鱼遗传性别鉴定Fig.3Niletilapiageneticsexidentification.注：M：DL1000DNAMarker：XX：雌性尼罗罗非鱼；XY：雄性尼罗罗非鱼Note:M：DL1000DNAMarker：XX：FemaleNiletilapia；XY：MaleNiletilapia3.2.2高温和甲基睾酮联合处理对尼罗罗非鱼体内E2水平的影响使用ELISA法检测21dpf尼罗罗非鱼体内雌激素E2水平。除了XY组是检测对照雄鱼（28℃，0mg/kgMT）体内的E2水平，其他组均是检测不同处理组雌鱼体内的E2水平。以分析诱导雌性发生性逆转的过程中，高温和甲基睾酮处理对内源性雌激素E2水平的影响。体内E2水平检测结果如图4。由图4可见，所有雌鱼组E2水平都显著高于XY组。无甲基睾酮条件下，高温处理组（T+0MT）E2水平显著高于对照温度组（C+0MT），说明高温条件显著下调了罗非鱼体内的E2水平。无论高温组还是对照组，随着饲料中MT浓度的增加，E2水平皆呈下降趋势，但随着MT浓度的增加，E2水平下降趋势不明显。说明甲基睾酮处理会下调罗非鱼体内的E2水平。另外，高温对照组（0MT）的E2水平低于低温20MT组，说明高温下调E2水平的效果比甲基睾酮处理更显著。
【参考文献】：
期刊论文
[1]石斑鱼性逆转研究现状[J]. 邢晨光,金珊,袁思平. 水产科学. 2006(04)
[2]鱼类人工性别控制[J]. 郝汉舟,杨桂军,谢从新. 水产科学. 2004(07)
[3]脊椎动物性别决定和分化的分子机制研究进展[J]. 周林燕,张修月,王德寿. 动物学研究. 2004(01)
[4]提高奥尼罗非鱼雄性率的主要措施[J]. 赵永志. 水产养殖. 2001(04)
[5]鱼类性别决定及其机制的研究进展[J]. 王德寿,吴天利,张耀光. 西南师范大学学报(自然科学版). 2000(03)
[6]激素诱导罗非鱼雄性化的试验研究[J]. 钱晖,杨文. 淡水渔业. 1993(04)
硕士论文
[1]外源补偿高温下调的雌二醇水平对尼罗罗非鱼性比及表达的影响研究[D]. 许高朋.山东农业大学 2019
[2]高温下调雌二醇在尼罗罗非鱼基因—温度性别决定中的作用及机制研究[D]. 滕建.山东农业大学 2019
[3]雌、雄激素对罗非鱼性别分化和性腺基因表达的影响[D]. 陈立黎.西南大学 2016
[4]性类固醇激素在尼罗罗非鱼性别决定与分化中的作用[D]. 蒋小龙.西南大学 2014
本文编号：2901995
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