三色堇热激转录因子基因VtHSFB2b的克隆及遗传转化
发布时间：2020-12-08 07:54
三色堇（Viola tricolor）是世界上著名的草本花卉,被誉为“花坛皇后”,耐寒喜凉爽气候,适宜的生长温度在1425℃,夏季高温对三色堇生长发育产生不利影响,导致观赏价值降低,较长时间高温胁迫甚至会导致植株死亡。非生物胁迫耐受的分子调控机制依赖于特定相关基因的激活和调控。植物热激转录因子（Heat stress transcription factor,HSF）在高温胁迫响应和赋予胁迫耐受性中起着至关重要的作用。本试验利用耐热性较好的三色堇自交系DFM-16和热敏感自交系08H作为研究材料,利用RACE技术从叶片中分离了VtHSFB2b基因,比较分析了这两个材料中该基因的序列结构及高温应答表达水平的特征,并通过亚细胞定位及拟南芥遗传转化方法研究该基因的功能。主要研究结果如下:1.DFM-16材料中VtHSFB2b基因cDNA序列是1439 bp,08H材料中VtHSFB2b基因cDNA序列是1397 bp,两个材料中VtHSFB2b基因的开放阅读框长度相同均为975 bp,但存在24个碱基的差异,两者预测编码的324个氨基酸中也相应存在6个氨基酸差异,其氨基...
【文章来源】：河南科技学院河南省
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HSF基本结构
三色堇热激转录因子基因VtHSFB2b的克隆及遗传转化12图2-1两个材料的田间表型图注：a.DFM-16四月中旬b.DFM-16六月上旬c.08H四月中旬d.08H六月上旬Fig.2-1FieldphenotypesofthetwomaterialsNote:a.DFM-16inmid-Aprilb.DFM-16inearlyJunec.08Hinmid-Aprild.08Hinearly-June2.1.2菌株和质粒大肠杆菌(Escherichiacoli）DH5α(CodeNo：9057)及载体pMD18-T(CodeNo：6011)均从TaKaRa生物公司购买。2.1.3主要试剂植物总RNA提取试剂盒(CodeNo：DP432)购自天根生化公司、反转录试剂盒(CodeNo：RR047A)、小量质粒提取试剂盒(CodeNo：9760)、凝胶回收试剂盒（CodeNo：9762）、Taq酶、dNTP购自TaKaRa公司；2×EsTaqMasterMix(CodeNo：CW0690S)购自康为世纪公司；DNAmarker、Loadingbuffer、安苄青霉素(Amp)、X-Gal和IPTG购自索莱宝adbc
第二章三色堇热激转录因子基因VtHSFB2b的克隆和序列分析21图2-2三色堇叶片总RNA电泳图注：1-2.DFM-16材料RNA3-4.08H材料RNAFig.2-2TotalRNAelectrophoresisofpansyleavesNote：1-2.DFM-16RNA3-4.08HRNA2.3.2DFM-16材料中VtHSFB2b基因3"和5"序列扩增根据己经获得的VtHSFB2b基因的保守区核苷酸序列，利用巢式PCR引物，一对外引物和一对内引物，以反转录合成的三色堇cDNA为模板，分别对DFM-16材料和08H材料中VtHSFB2b基因的3"和5"末端进行两轮PCR的扩增，结果显示DFM-16材料中VtHSFB2b基因扩增产物3"端约是700bp，5"端约是1200bp（图2-3a）。08H材料中VtHSFB2b基因扩增产物3"端约是700bp左右，5"端约是1200bp左右（图2-3b）。b
【参考文献】：
期刊论文
[1]高温干旱胁迫对黄薇抗氧化防御系统的影响[J]. 顾帆,季梦成,顾翠花,郑钢,郑绍宇. 浙江农林大学学报. 2019(05)
[2]不同耐热三色堇材料HSP70基因克隆及热胁迫下的表达分析[J]. 牛杨莉,朱小佩,杨亚萍,葛晓敏,杜晓华,刘会超. 河南农业科学. 2019(10)
[3]高温胁迫对5种牧草生理生化特性的影响[J]. 李龙兴,王志伟,陈莹. 草原与草坪. 2019(04)
[4]小麦热激转录因子基因TaHsfA2f生物学特性及耐热性调控作用[J]. 张园园,赵慧,张玉杰,段硕楠,李国良,郭秀林. 农业生物技术学报. 2019(05)
[5]根际高温对德钦苜蓿形态特征及水分状况的影响[J]. 李孟南,张誉稳,毕玉芬,赵雁. 西部林业科学. 2018(06)
[6]活性氧与植物抗氧化系统研究进展[J]. 白英俊,李国瑞,黄凤兰,李威,丛安琪,陈永胜. 安徽农业科学. 2017(36)
[7]小麦热激转录因子基因TaHsfB2d的克隆和特性及其对耐热性的调控[J]. 赵立娜,刘子会,段硕楠,张园园,李国良,郭秀林. 作物学报. 2018(01)
[8]高温胁迫对华石斛幼苗的形态和生理参数的影响[J]. 吴姝漪,孟千万,宋希强,丁琼,朱婕,余文刚,马豪治. 热带作物学报. 2017(04)
[9]大花三色堇和角堇对高温胁迫的生理响应[J]. 陈宏志,杜晓华,穆金艳,贾文庆,刘会超. 江苏农业科学. 2017(06)
[10]美容杜鹃RcHsfB3基因的克隆及表达分析[J]. 陈霞连,杨华侨,黎佳欣,陈可,曲绮雯,白洁. 四川大学学报(自然科学版). 2017(02)
硕士论文
[1]三色堇热激蛋白70（VtHSP70）基因克隆及热胁迫下应答分析[D]. 牛杨莉.河南科技学院 2019
[2]三色堇小分子热激蛋白基因克隆及表达分析[D]. 杨雅萍.河南科技学院 2019
[3]菠菜HsfA1和HsfBs基因的功能研究[D]. 董雪芳.上海师范大学 2019
[4]菊花热激转录因子CmHSFA4和CmHSFB1基因克隆及功能鉴定[D]. 张焕茹.南京农业大学 2017
[5]非洲狗牙根CtHsfA2b基因耐热功能研究[D]. 黄婉璐.南京农业大学 2016
[6]三色堇热激蛋白70（HSP70）基因的克隆及生物信息学分析[D]. 黄伶俐.河南科技学院 2014
[7]鹰嘴豆热激转录因子CarHSFB2的序列与功能分析[D]. 杨斌.南京农业大学 2012
[8]鹰嘴豆热激转录因子CarHSFB2的克隆与功能验证[D]. 成慧颖.南京农业大学 2010
本文编号：2904740
【文章来源】：河南科技学院河南省
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HSF基本结构
三色堇热激转录因子基因VtHSFB2b的克隆及遗传转化12图2-1两个材料的田间表型图注：a.DFM-16四月中旬b.DFM-16六月上旬c.08H四月中旬d.08H六月上旬Fig.2-1FieldphenotypesofthetwomaterialsNote:a.DFM-16inmid-Aprilb.DFM-16inearlyJunec.08Hinmid-Aprild.08Hinearly-June2.1.2菌株和质粒大肠杆菌(Escherichiacoli）DH5α(CodeNo：9057)及载体pMD18-T(CodeNo：6011)均从TaKaRa生物公司购买。2.1.3主要试剂植物总RNA提取试剂盒(CodeNo：DP432)购自天根生化公司、反转录试剂盒(CodeNo：RR047A)、小量质粒提取试剂盒(CodeNo：9760)、凝胶回收试剂盒（CodeNo：9762）、Taq酶、dNTP购自TaKaRa公司；2×EsTaqMasterMix(CodeNo：CW0690S)购自康为世纪公司；DNAmarker、Loadingbuffer、安苄青霉素(Amp)、X-Gal和IPTG购自索莱宝adbc
第二章三色堇热激转录因子基因VtHSFB2b的克隆和序列分析21图2-2三色堇叶片总RNA电泳图注：1-2.DFM-16材料RNA3-4.08H材料RNAFig.2-2TotalRNAelectrophoresisofpansyleavesNote：1-2.DFM-16RNA3-4.08HRNA2.3.2DFM-16材料中VtHSFB2b基因3"和5"序列扩增根据己经获得的VtHSFB2b基因的保守区核苷酸序列，利用巢式PCR引物，一对外引物和一对内引物，以反转录合成的三色堇cDNA为模板，分别对DFM-16材料和08H材料中VtHSFB2b基因的3"和5"末端进行两轮PCR的扩增，结果显示DFM-16材料中VtHSFB2b基因扩增产物3"端约是700bp，5"端约是1200bp（图2-3a）。08H材料中VtHSFB2b基因扩增产物3"端约是700bp左右，5"端约是1200bp左右（图2-3b）。b
【参考文献】：
期刊论文
[1]高温干旱胁迫对黄薇抗氧化防御系统的影响[J]. 顾帆,季梦成,顾翠花,郑钢,郑绍宇. 浙江农林大学学报. 2019(05)
[2]不同耐热三色堇材料HSP70基因克隆及热胁迫下的表达分析[J]. 牛杨莉,朱小佩,杨亚萍,葛晓敏,杜晓华,刘会超. 河南农业科学. 2019(10)
[3]高温胁迫对5种牧草生理生化特性的影响[J]. 李龙兴,王志伟,陈莹. 草原与草坪. 2019(04)
[4]小麦热激转录因子基因TaHsfA2f生物学特性及耐热性调控作用[J]. 张园园,赵慧,张玉杰,段硕楠,李国良,郭秀林. 农业生物技术学报. 2019(05)
[5]根际高温对德钦苜蓿形态特征及水分状况的影响[J]. 李孟南,张誉稳,毕玉芬,赵雁. 西部林业科学. 2018(06)
[6]活性氧与植物抗氧化系统研究进展[J]. 白英俊,李国瑞,黄凤兰,李威,丛安琪,陈永胜. 安徽农业科学. 2017(36)
[7]小麦热激转录因子基因TaHsfB2d的克隆和特性及其对耐热性的调控[J]. 赵立娜,刘子会,段硕楠,张园园,李国良,郭秀林. 作物学报. 2018(01)
[8]高温胁迫对华石斛幼苗的形态和生理参数的影响[J]. 吴姝漪,孟千万,宋希强,丁琼,朱婕,余文刚,马豪治. 热带作物学报. 2017(04)
[9]大花三色堇和角堇对高温胁迫的生理响应[J]. 陈宏志,杜晓华,穆金艳,贾文庆,刘会超. 江苏农业科学. 2017(06)
[10]美容杜鹃RcHsfB3基因的克隆及表达分析[J]. 陈霞连,杨华侨,黎佳欣,陈可,曲绮雯,白洁. 四川大学学报(自然科学版). 2017(02)
硕士论文
[1]三色堇热激蛋白70（VtHSP70）基因克隆及热胁迫下应答分析[D]. 牛杨莉.河南科技学院 2019
[2]三色堇小分子热激蛋白基因克隆及表达分析[D]. 杨雅萍.河南科技学院 2019
[3]菠菜HsfA1和HsfBs基因的功能研究[D]. 董雪芳.上海师范大学 2019
[4]菊花热激转录因子CmHSFA4和CmHSFB1基因克隆及功能鉴定[D]. 张焕茹.南京农业大学 2017
[5]非洲狗牙根CtHsfA2b基因耐热功能研究[D]. 黄婉璐.南京农业大学 2016
[6]三色堇热激蛋白70（HSP70）基因的克隆及生物信息学分析[D]. 黄伶俐.河南科技学院 2014
[7]鹰嘴豆热激转录因子CarHSFB2的序列与功能分析[D]. 杨斌.南京农业大学 2012
[8]鹰嘴豆热激转录因子CarHSFB2的克隆与功能验证[D]. 成慧颖.南京农业大学 2010
本文编号：2904740
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