FGF23对鸡成骨细胞矿化的作用及其分子机理
发布时间：2020-12-08 17:29
磷对家禽生产至关重要,不仅能促进骨骼的正常生长发育,还能保证良好的蛋壳品质。作为骨源性激素,成纤维细胞生长因子23（Fibroblast growth factor 23,FGF23）能够抑制哺乳动物肾脏中磷酸盐的重吸收,促进磷酸盐的排出,是机体内调控磷代谢的关键因子。因此研究FGF23如何调控家禽磷代谢及其骨骼发育,对深入了解FGF23作用机制以及生产实践有重要意义。本论文研究了影响鸡成骨细胞FGF23 mRNA表达的因素以及过表达FGF23腺病毒对成骨细胞矿化的影响,初步确定了FGF23在调控鸡成骨细胞矿化的中的作用。1.调控鸡成骨细胞FGF23表达的因素分析体外培养鸡骨髓间充质干细胞（Bone marrow stem cells,BMSCs）,并诱导其分化为成骨细胞。在诱导细胞分化的第8天,使用茜素红S染色,可以观察到大量红色矿化结节,表明大多BMSCs已经被诱导分化为成骨细胞。为了探究影响成骨细胞FGF23表达的因素,使用β-甘油磷酸钠（β-glycerol phosphate disodium salt,β-Gly,5mM、10M、20mM）、氯化钙（Calcium chlo...
【文章来源】： 吕正天 山东农业大学
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
总RNA电泳图
FGF23对鸡成骨细胞矿化的作用及其分子机理20标准曲线：随机取对照组、不同处理组的cDNA混合，制作5个浓度梯度（依次进行5×倍比稀释）：1×、5×、25×、125×、625×。按照上述PCR步骤进行扩增，得到管家基因和个目的基因的标准曲线（本论文中管家基因为β-actin，如图2-3）。根据斜率（k）计算扩增效率，计算公式为：扩增效率e=101/(-k)-1。标准曲线中斜率k在-3至-3.5之间，RT-PCR的扩增效率在0.9-1.1之间时，说明引物扩增效果最佳。当目的基因的扩增效率和持家基因的扩增效率相同时（即二者的斜率相差不超过0.2），以β-actin的表达水平作为内参，采用“平均相对表达量=2-△△Ct”计算该基因的相对表达量。为了消除不同PCR板之间的差异，每个批次扩增目的基因的同时都会添加管家基因，而且每个样品作两个重复，即每个样品可得到两个Ct值，取两个Ct值计算平均值来作为该样品的Ct值进行分析统计。图2-2Real-TimePCR反应条件Fig2-2ThermalcyclerprotocolofReal-TimePCR图2-3β-actin扩增曲线Figure2-3Amplificationcurveofβ-actin
FGF23对鸡成骨细胞矿化的作用及其分子机理20标准曲线：随机取对照组、不同处理组的cDNA混合，制作5个浓度梯度（依次进行5×倍比稀释）：1×、5×、25×、125×、625×。按照上述PCR步骤进行扩增，得到管家基因和个目的基因的标准曲线（本论文中管家基因为β-actin，如图2-3）。根据斜率（k）计算扩增效率，计算公式为：扩增效率e=101/(-k)-1。标准曲线中斜率k在-3至-3.5之间，RT-PCR的扩增效率在0.9-1.1之间时，说明引物扩增效果最佳。当目的基因的扩增效率和持家基因的扩增效率相同时（即二者的斜率相差不超过0.2），以β-actin的表达水平作为内参，采用“平均相对表达量=2-△△Ct”计算该基因的相对表达量。为了消除不同PCR板之间的差异，每个批次扩增目的基因的同时都会添加管家基因，而且每个样品作两个重复，即每个样品可得到两个Ct值，取两个Ct值计算平均值来作为该样品的Ct值进行分析统计。图2-2Real-TimePCR反应条件Fig2-2ThermalcyclerprotocolofReal-TimePCR图2-3β-actin扩增曲线Figure2-3Amplificationcurveofβ-actin
【参考文献】：
期刊论文
[1]蛋鸡缺磷症的诱因、症状及治疗措施[J]. 贾飞. 中国畜禽种业. 2019(07)
[2]Decreased osteogenesis of adult mesenchymal stem cel s by reactive oxygen species under cyclic stretch: a possible mechanism of age related osteoporosis[J]. Jiali Tan,Xin Xu,Zhongchun Tong,Jiong lin,Qiujun Yu,Yao Lin,Wei Kuang. Bone Research. 2015(01)
[3]家禽磷营养研究进展与应用[J]. 韩进诚,王玉玲,王家庆,施传信,姚军虎. 饲料工业. 2009(15)
[4]植酸磷和植酸酶研究进展[J]. 贺建华. 动物营养学报. 2005(01)
本文编号：2905416
【文章来源】： 吕正天 山东农业大学
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
总RNA电泳图
FGF23对鸡成骨细胞矿化的作用及其分子机理20标准曲线：随机取对照组、不同处理组的cDNA混合，制作5个浓度梯度（依次进行5×倍比稀释）：1×、5×、25×、125×、625×。按照上述PCR步骤进行扩增，得到管家基因和个目的基因的标准曲线（本论文中管家基因为β-actin，如图2-3）。根据斜率（k）计算扩增效率，计算公式为：扩增效率e=101/(-k)-1。标准曲线中斜率k在-3至-3.5之间，RT-PCR的扩增效率在0.9-1.1之间时，说明引物扩增效果最佳。当目的基因的扩增效率和持家基因的扩增效率相同时（即二者的斜率相差不超过0.2），以β-actin的表达水平作为内参，采用“平均相对表达量=2-△△Ct”计算该基因的相对表达量。为了消除不同PCR板之间的差异，每个批次扩增目的基因的同时都会添加管家基因，而且每个样品作两个重复，即每个样品可得到两个Ct值，取两个Ct值计算平均值来作为该样品的Ct值进行分析统计。图2-2Real-TimePCR反应条件Fig2-2ThermalcyclerprotocolofReal-TimePCR图2-3β-actin扩增曲线Figure2-3Amplificationcurveofβ-actin
FGF23对鸡成骨细胞矿化的作用及其分子机理20标准曲线：随机取对照组、不同处理组的cDNA混合，制作5个浓度梯度（依次进行5×倍比稀释）：1×、5×、25×、125×、625×。按照上述PCR步骤进行扩增，得到管家基因和个目的基因的标准曲线（本论文中管家基因为β-actin，如图2-3）。根据斜率（k）计算扩增效率，计算公式为：扩增效率e=101/(-k)-1。标准曲线中斜率k在-3至-3.5之间，RT-PCR的扩增效率在0.9-1.1之间时，说明引物扩增效果最佳。当目的基因的扩增效率和持家基因的扩增效率相同时（即二者的斜率相差不超过0.2），以β-actin的表达水平作为内参，采用“平均相对表达量=2-△△Ct”计算该基因的相对表达量。为了消除不同PCR板之间的差异，每个批次扩增目的基因的同时都会添加管家基因，而且每个样品作两个重复，即每个样品可得到两个Ct值，取两个Ct值计算平均值来作为该样品的Ct值进行分析统计。图2-2Real-TimePCR反应条件Fig2-2ThermalcyclerprotocolofReal-TimePCR图2-3β-actin扩增曲线Figure2-3Amplificationcurveofβ-actin
【参考文献】：
期刊论文
[1]蛋鸡缺磷症的诱因、症状及治疗措施[J]. 贾飞. 中国畜禽种业. 2019(07)
[2]Decreased osteogenesis of adult mesenchymal stem cel s by reactive oxygen species under cyclic stretch: a possible mechanism of age related osteoporosis[J]. Jiali Tan,Xin Xu,Zhongchun Tong,Jiong lin,Qiujun Yu,Yao Lin,Wei Kuang. Bone Research. 2015(01)
[3]家禽磷营养研究进展与应用[J]. 韩进诚,王玉玲,王家庆,施传信,姚军虎. 饲料工业. 2009(15)
[4]植酸磷和植酸酶研究进展[J]. 贺建华. 动物营养学报. 2005(01)
本文编号：2905416
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/zaizhiyanjiusheng/2905416.html
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