不同底物诱导下桦剥管菌纤维素酶活和蛋白质组学研究
发布时间：2020-12-23 23:00
木材褐腐菌可以分泌纤维素酶和半纤维素酶,在自然界纤维素循环中起到重要作用。桦剥管菌是一种典型的褐腐菌,但对桦剥管菌降解木材的研究较少。为了探讨桦剥管菌在降解木材纤维素过程中相关酶和蛋白表达量变化以及调控方式,对不同木屑（白桦、云杉）诱导培养的桦剥管菌的纤维素酶活性和胞内蛋白质表达进行比较研究,并对胞外分泌蛋白质表达进行初探。分别在23℃和28℃培养桦剥管菌,每24 h测量一次菌落直径。在23℃培养下平均生长速度为8.9 mm/d,28℃平均生长速度为13 mm/d。结果表明桦剥管菌更适合在28℃下培养。分别以白桦木屑、云杉木屑和麦麸为诱导物,以不加木屑的马铃薯液体培养基为对照,测定桦剥管菌在12d内的纤维素酶活变化。总体而言,内切纤维素酶最大,外切纤维素酶活次之,β-葡萄糖苷酶活性最小。内切纤维素酶活在前9d都表现出上升趋势,而外切纤维素酶培养初期酶活很高,随着时间增长酶活水平开始下降,在培养9d后酶活又开始增长。β-葡萄糖苷酶分泌时间较晚,在第12d才明显检测到酶活。通过蛋白质组双向电泳和Image Master分析,检测桦剥管菌在不同树种木屑诱导下的菌体胞内蛋白质组变化。与对照组（...
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３－４胞外分泌蛋白??Ｆｉｇ．?３－４?Ａｎａｌｙｓｉｓ?ａｎｄ?ｉｄｅｎｔｉ円ｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ??
维素酶活的测定结果及枠剥管菌的生长速度规律，选择提取培养第１５?ｄ及胞外分泌蛋白，由于真菌多糖含量较高，造成在等点聚焦过程中蛋白质ＳＤＳ聚丙帰酷胺凝胶电泳中出现拖尾现象，因此在蛋白沉淀过程中加入１附多糖，提取效果较好。在一向等点聚焦过程中，胞内蛋白种类比较丰富，??｜ａｇ蛋白最后得到的蛋白图谱效果很好，适用于Ｉｍａｇｅ?Ｍａｓｔｅｒ软件分析蛋白胞外分泌蛋白种类很少，上样４００＾３得到的蛋白图谱比较清晰。??沮中差向异构酶、苹果酸脱氨酶、磯酸蹄醇丙丽酸蛋白稱酸转移酶、ＮＩＭ关蛋白、ＧＴＰ结合蛋白表达量上调，这几种酶参与到能量和物质代谢、氮讯、蛋白质合成、有丝分裂等过程，而转酵醇酶、热休克蛋白表达量下调，??及到糖代谢和刺激响应等过程。云杉组中ＳＡＭ依赖性甲基转移酶、无机基转移酶、３－微管蛋白和４０Ｓ－核糖体蛋白表这量上调，这些酶参与到物转导、染色体表达调控、脂类代谢、蛋白合成修饰等方面。而蛋氨酸氨基调，该酶在组织修复和蛋白质降解的过程中起到关键作用。在木屑诱导组，吸此
?枠剥管菌接种到马铃曹液体培养基１５?ｄ后，进行胞外蛋白提取，将得到的蛋白质样??品进行双向电泳。等点聚焦选用ＰＨ３－１０范围的ＩＰＧ胶条，第二向分离选用１２．５％的??犯Ｓ－ＰＡ畑凝胶。如图３－３所示，蛋白上样量均为４００帖。??＾?：３。—：皆；??，通Ｌ??＇丐‘?＊、－某?ｆ?叛＾４?毫友一．二．?＊！＇＊家?３?；?，盛占??图３－４胞外分泌蛋白??Ｆｉｇ．?３－４?Ａｎａｌｙｓｉｓ?ａｎｄ?ｉｄｅｎｔｉ円ｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ??３－４．２．１胞外分泌蛋白质组分析??共选取２４个点进行ＭＡＬＤＩ?ＴＯＦ／ＴＯＦ质谱鉴定，利用ＧＰＳ?Ｅｘｐｌｏｒｅ软件进行分??化ＭＡＳＣＯＴ检索ＮＣＢＩ化蛋白质数据库
【参考文献】：
期刊论文
[1]褐腐菌在木质纤维素降解中的研究进展[J]. 彭木,王秋玉,訾晓雪. 中国农学通报. 2014(10)
[2]无色杆菌JA81基因组中多个假定短链脱氢酶的克隆表达及其在4-苯基-3-丁炔-2-酮还原中的应用[J]. 田小亮,裴小琼,刘艳,吴中柳. 应用与环境生物学报. 2013(06)
[3]纤维素酶以及应用行业的研究进展[J]. 武林芝. 安徽农业科学. 2013(26)
[4]SMA胞外分泌蛋白抑制小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ的研究[J]. 邹珂珂,邹强,李丽梅,杨平,沈小旭,陈自敏,宋丽萍,蒋洪娇,李敏惠. 中国病原生物学杂志. 2013(06)
[5]流产布鲁氏菌ATP/GTP结合蛋白基因缺失株保护力及安全性研究[J]. 王真,欧齐星,王双山,吕艳丽,吴清民. 中国农业大学学报. 2013(03)
[6]功能性低聚糖合成中糖基转移酶研究进展[J]. 李玉,路福平,王正祥. 食品科学. 2013(09)
[7]有关蛋白质组学概述[J]. 姜丽丽,郝欣霞,张东泽. 内蒙古科技与经济. 2013(03)
[8]中空纤维渗透汽化复合膜及组件研究进展[J]. 王乃鑫,张国俊,纪树兰. 化工进展. 2013(02)
[9]微生物糖苷类抗生素糖基转移酶的体外研究进展[J]. 林钦恒,肖吉,陈瑞东,张长生. 中国抗生素杂志. 2012(12)
[10]混菌发酵中与普通生酮基古龙酸菌产2-酮基-L-古龙酸相关功能蛋白的研究[J]. 麻浩,李野,张磊,张海宏,蔺新峰,周凯,易绍琼,李冠霖,陈薇,张怡轩. 生物技术通讯. 2012(05)
博士论文
[1]白桦木材耐腐能力差异和木腐菌腐朽木材基因差异表达[D]. 刘欣.东北林业大学 2009
[2]梅林青霉对纤维素降解特性及机制的研究[D]. 王希国.哈尔滨工业大学 2007
[3]罗布麻纤维结构、针织加工与性能研究[D]. 韩光亭.东华大学 2006
硕士论文
[1]改性PVA/壳聚糖复合小球的合成及其用于固定化过氧化氢酶[D]. 臧金金.天津大学 2013
[2]海绵状白腐菌木质纤维素酶活性及其基因的遗传变异研究[D]. 曹宇.东北林业大学 2013
[3]红曲菌氨肽酶的研究[D]. 李滨.中南林业科技大学 2012
[4]β-葡萄糖苷酶高产菌株的选育及玉米芯的诱导作用研究[D]. 王春丽.北京化工大学 2010
[5]堆肥系统中木质素关键降解酶的作用规律及其在堆肥基质中的吸附特性研究[D]. 赵美花.湖南大学 2010
[6]三种木腐菌木材降解相关酶以及相关基因TRAP标记的变异[D]. 吕世翔.东北林业大学 2010
[7]新信号分子SH2A相互作用的蛋白质筛选[D]. 李伟.中国医科大学 2007
[8]亲水性卟啉及金属卟啉的合成及化学模拟[D]. 乔利英.山西大学 2006
[9]高活性纤维素降解菌产酶条件和酶的性质及应用研究[D]. 李英.四川师范大学 2005
本文编号：2934490
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３－４胞外分泌蛋白??Ｆｉｇ．?３－４?Ａｎａｌｙｓｉｓ?ａｎｄ?ｉｄｅｎｔｉ円ｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ??
维素酶活的测定结果及枠剥管菌的生长速度规律，选择提取培养第１５?ｄ及胞外分泌蛋白，由于真菌多糖含量较高，造成在等点聚焦过程中蛋白质ＳＤＳ聚丙帰酷胺凝胶电泳中出现拖尾现象，因此在蛋白沉淀过程中加入１附多糖，提取效果较好。在一向等点聚焦过程中，胞内蛋白种类比较丰富，??｜ａｇ蛋白最后得到的蛋白图谱效果很好，适用于Ｉｍａｇｅ?Ｍａｓｔｅｒ软件分析蛋白胞外分泌蛋白种类很少，上样４００＾３得到的蛋白图谱比较清晰。??沮中差向异构酶、苹果酸脱氨酶、磯酸蹄醇丙丽酸蛋白稱酸转移酶、ＮＩＭ关蛋白、ＧＴＰ结合蛋白表达量上调，这几种酶参与到能量和物质代谢、氮讯、蛋白质合成、有丝分裂等过程，而转酵醇酶、热休克蛋白表达量下调，??及到糖代谢和刺激响应等过程。云杉组中ＳＡＭ依赖性甲基转移酶、无机基转移酶、３－微管蛋白和４０Ｓ－核糖体蛋白表这量上调，这些酶参与到物转导、染色体表达调控、脂类代谢、蛋白合成修饰等方面。而蛋氨酸氨基调，该酶在组织修复和蛋白质降解的过程中起到关键作用。在木屑诱导组，吸此
?枠剥管菌接种到马铃曹液体培养基１５?ｄ后，进行胞外蛋白提取，将得到的蛋白质样??品进行双向电泳。等点聚焦选用ＰＨ３－１０范围的ＩＰＧ胶条，第二向分离选用１２．５％的??犯Ｓ－ＰＡ畑凝胶。如图３－３所示，蛋白上样量均为４００帖。??＾?：３。—：皆；??，通Ｌ??＇丐‘?＊、－某?ｆ?叛＾４?毫友一．二．?＊！＇＊家?３?；?，盛占??图３－４胞外分泌蛋白??Ｆｉｇ．?３－４?Ａｎａｌｙｓｉｓ?ａｎｄ?ｉｄｅｎｔｉ円ｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ??３－４．２．１胞外分泌蛋白质组分析??共选取２４个点进行ＭＡＬＤＩ?ＴＯＦ／ＴＯＦ质谱鉴定，利用ＧＰＳ?Ｅｘｐｌｏｒｅ软件进行分??化ＭＡＳＣＯＴ检索ＮＣＢＩ化蛋白质数据库
【参考文献】：
期刊论文
[1]褐腐菌在木质纤维素降解中的研究进展[J]. 彭木,王秋玉,訾晓雪. 中国农学通报. 2014(10)
[2]无色杆菌JA81基因组中多个假定短链脱氢酶的克隆表达及其在4-苯基-3-丁炔-2-酮还原中的应用[J]. 田小亮,裴小琼,刘艳,吴中柳. 应用与环境生物学报. 2013(06)
[3]纤维素酶以及应用行业的研究进展[J]. 武林芝. 安徽农业科学. 2013(26)
[4]SMA胞外分泌蛋白抑制小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ的研究[J]. 邹珂珂,邹强,李丽梅,杨平,沈小旭,陈自敏,宋丽萍,蒋洪娇,李敏惠. 中国病原生物学杂志. 2013(06)
[5]流产布鲁氏菌ATP/GTP结合蛋白基因缺失株保护力及安全性研究[J]. 王真,欧齐星,王双山,吕艳丽,吴清民. 中国农业大学学报. 2013(03)
[6]功能性低聚糖合成中糖基转移酶研究进展[J]. 李玉,路福平,王正祥. 食品科学. 2013(09)
[7]有关蛋白质组学概述[J]. 姜丽丽,郝欣霞,张东泽. 内蒙古科技与经济. 2013(03)
[8]中空纤维渗透汽化复合膜及组件研究进展[J]. 王乃鑫,张国俊,纪树兰. 化工进展. 2013(02)
[9]微生物糖苷类抗生素糖基转移酶的体外研究进展[J]. 林钦恒,肖吉,陈瑞东,张长生. 中国抗生素杂志. 2012(12)
[10]混菌发酵中与普通生酮基古龙酸菌产2-酮基-L-古龙酸相关功能蛋白的研究[J]. 麻浩,李野,张磊,张海宏,蔺新峰,周凯,易绍琼,李冠霖,陈薇,张怡轩. 生物技术通讯. 2012(05)
博士论文
[1]白桦木材耐腐能力差异和木腐菌腐朽木材基因差异表达[D]. 刘欣.东北林业大学 2009
[2]梅林青霉对纤维素降解特性及机制的研究[D]. 王希国.哈尔滨工业大学 2007
[3]罗布麻纤维结构、针织加工与性能研究[D]. 韩光亭.东华大学 2006
硕士论文
[1]改性PVA/壳聚糖复合小球的合成及其用于固定化过氧化氢酶[D]. 臧金金.天津大学 2013
[2]海绵状白腐菌木质纤维素酶活性及其基因的遗传变异研究[D]. 曹宇.东北林业大学 2013
[3]红曲菌氨肽酶的研究[D]. 李滨.中南林业科技大学 2012
[4]β-葡萄糖苷酶高产菌株的选育及玉米芯的诱导作用研究[D]. 王春丽.北京化工大学 2010
[5]堆肥系统中木质素关键降解酶的作用规律及其在堆肥基质中的吸附特性研究[D]. 赵美花.湖南大学 2010
[6]三种木腐菌木材降解相关酶以及相关基因TRAP标记的变异[D]. 吕世翔.东北林业大学 2010
[7]新信号分子SH2A相互作用的蛋白质筛选[D]. 李伟.中国医科大学 2007
[8]亲水性卟啉及金属卟啉的合成及化学模拟[D]. 乔利英.山西大学 2006
[9]高活性纤维素降解菌产酶条件和酶的性质及应用研究[D]. 李英.四川师范大学 2005
本文编号：2934490
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