芽孢杆菌对新疆棉花黄萎病菌拮抗作用的研究
发布时间：2020-12-27 20:17
棉花黄萎菌（Verticillium dahliae）是一种危害性极强且广寄主的土传病原真菌,其作为棉花全球性的病害,严重危害新疆种植区的棉区。目前,还没有效果明显的防治措施,化学防治造成土壤微环境的污染;倒茬轮作、深耕等防控策略在新疆棉区田间施用有很多限制因素,目前利用生物方法防控棉花土传黄萎病成为主要防治手段。芽孢杆菌形成的菌膜可以增强植物根部定植能力。本研究通过对芽孢杆菌培养条件优化后提高产膜能力,增强其对黄萎菌的抑制效果;通过在两种不同基因型的棉花根部施用优化后的芽孢杆菌液,检测其对两种基因型棉花防御和抵抗黄萎病的能力,为后续的棉花黄萎病的防控提供理论依据。主要研究结果如下:1.通过调节培养基的PH、接种量、装液量和培养基的温度,对培养基成分进行优化;通过对优化结果的分析,最终确定芽孢杆菌C-9培养条件温度为30℃、pH为5,接种量为0.25mL、装液量为20mL时,生防菌菌密度最大,产生菌膜厚度较厚。2.通过qPCR技术验证芽孢杆菌诱导黄萎菌致病相关基因的表达量。基因VMK1与大丽轮枝菌菌核产生有关;NADPH基因和GLU基因的表达,可引起活性氧累积;甘油-3-磷酸脱氢酶能诱...
【文章来源】： 成凤凤 石河子大学
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同碳源培养下对生防菌菌膜产生的影响
芽孢杆菌对新疆棉花黄萎病拮抗作用的研究9在上述优化培养条条件下，温度梯度设置为25,30,35,40℃，接种量0.25mL，初始pH5.0，150ml三角瓶装液量20ml，培养72h，测定不同pH对芽孢杆菌菌膜的影响。本研究涉及芽孢杆菌C-9在不同的营养情况下的生长情况，故在本研究中采取在不同营养物质与不同培养条件下培养芽孢杆菌。2.3结果与分析2.3.1芽孢杆菌培养基营养物质优化2.3.1.1通过对培养芽孢杆菌培养基所用碳源优化发现，本研究中供试生防菌C-9在不同碳源下培养，通过测得OD600发现以酵母提取物为碳源时的值最高，说明在本实验中，碳源为酵母提取物时的菌密度最大，最易形成菌膜，而碳源分别为葡萄糖、蔗糖、玉米粉时的测得的OD600均低于酵母提取物为碳源时的OD600（图2-1）。图2-1不同碳源培养下对生防菌菌膜产生的影响Fig.2-1Effectsofdifferentcarbonsourceculturesonbiofilm2.3.1.2通过对培养芽孢杆菌培养基所用有机氮源优化发现，本研究中供试生防菌C-9在不同有机氮源下培养，通过测得OD600发现以花生粉为有机氮源源时的值最高，说明在本实验中，有机氮源为花生粉时的菌密度最大，最易形成菌膜，而有机氮源分别为牛肉膏、大豆蛋白胨、酵母提取物、(CK)蛋白胨时的测得的OD600均低于花生为有机氮源时的OD600（图2-2）。图2-2不同有机氮源培养下对生防菌菌膜产生的影响Fig.2-2Effectsofdifferentorganicnitrogensourceculturesonbiofilm
芽孢杆菌对新疆棉花黄萎病拮抗作用的研究102.3.1.3通过对芽孢杆菌培养基所用无机氮源优化发现，本研究中供试生防菌C-9在不同无机氮源下培养，通过测得OD600发现CK为无机氮源源时的值最高，说明在本实验中，不添加无机氮源时的菌密度最大，而有机氮源分别为氯化铵、硫酸铵、硝酸铵、硝酸钠时的测得的OD600均低于CK为无机氮源时的OD600（图2-3）。图2-3不同无机氮源培养下对生防菌菌膜产生的影响Fig.2-3Effectsofdifferentinorganicnitrogensourceculturesonbiofilm2.3.1.4通过对芽孢杆菌培养基所用无机盐优化发现，本研究中供试生防菌C-9在不同无机盐下培养，通过测得OD600发现以磷酸二氢钾为无机盐时的值最高，说明在本实验中，以磷酸二氢钾为无机盐时的菌密度最大，最易形成菌膜，而无机盐分别为硫酸锰、硫酸镁、碳酸钙、氯化钠（CK）时的测得的OD600均低于磷酸二氢钾为无机氮源时的OD600（图2-4）。图2-4梯度不同无机盐培养下对生防菌菌膜产生的影响Fig.2-4Effectsofinorganicsaltculturewithdifferentgradientsonbiofilm2.3.1.5通过对芽孢杆菌培养基所用金属离子优化发现，本研究中供试生防菌C-9在培养基中添加不同金属离子下培养，通过测得OD600发现以氯化铁为金属离子时的值最高，说明在本实验中，以氯化铁中铁离子为金属离子时的菌密度最大，最易形成菌膜，而金属离子分别为氯化锰、氯化钙、硫酸亚铁时的测得的OD600均低于磷酸二氢钾为无机氮源时的OD600（图2-5）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]AM真菌对植物防御性蛋白的影响:研究进展[J]. 孙海冰,蔡柏岩. 中国农学通报. 2018(11)
[2]超氧化物歧化酶与植物抗逆性[J]. 夏民旋,王维,袁瑞,邓粉妮,沈法富. 分子植物育种. 2015(11)
[3]培养基组分对枯草芽胞杆菌产表面活性素的影响[J]. 朱玲燕,刘强,刘洋,李霜. 生物加工过程. 2015(05)
[4]枯草芽孢杆菌B006产surfactin突变株特性及其对黄瓜枯萎病的抑制能力[J]. 贾珂,李世东,刘桂君,郭荣君. 中国生物防治学报. 2013(04)
[5]植物体内活性氧的研究及其在植物抗逆方面的应用[J]. 薛鑫,张芊,吴金霞. 生物技术通报. 2013(10)
[6]枯草芽孢杆菌B006对黄瓜枯萎病菌和辣椒疫霉病菌的抑制作用及其抗菌组分分析[J]. 杨琦瑶,索雅丽,郭荣君,李世东,许修宏. 中国生物防治学报. 2012(02)
[7]细菌对植物病害生物防治研究进展[J]. 许彦君,刘海龙,刘新晶,许艳丽. 大豆科技. 2011(05)
[8]特殊生境中植物枯、黄萎病拮抗放线菌的筛选及鉴定[J]. 张文婷,张秋丽,冀媛媛,吴文君,宗兆锋. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2011(09)
[9]阿维菌素的发展史——在“2009阿维菌素类360°产业论坛”上的讲话[J]. 沈寅初. 世界农药. 2009(S2)
[10]水杨酸、茉莉酸和乙烯介导的防卫信号途径相互作用的研究进展[J]. 徐刚,姚银安. 生物学杂志. 2009(01)
博士论文
[1]一个来自于稻瘟病菌的免疫诱导蛋白的鉴定和功能分析[D]. 杨雅云.浙江大学 2008
硕士论文
[1]产surfactin枯草芽胞杆菌168重组菌株构建及其对黄瓜枯萎病的控制作用[D]. 高毓晗.中国农业科学院 2015
[2]解淀粉芽胞杆菌WH1抗真菌机制的研究[D]. 朱发银.华中农业大学 2010
[3]生物和非生物胁迫条件下拟南芥AtCBP60g表达特性研究[D]. 张新.内蒙古农业大学 2010
[4]拟南芥AtPLC5在植株对病原菌胁迫响应中的作用[D]. 马文文.中央民族大学 2006
本文编号：2942416
【文章来源】： 成凤凤 石河子大学
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同碳源培养下对生防菌菌膜产生的影响
芽孢杆菌对新疆棉花黄萎病拮抗作用的研究9在上述优化培养条条件下，温度梯度设置为25,30,35,40℃，接种量0.25mL，初始pH5.0，150ml三角瓶装液量20ml，培养72h，测定不同pH对芽孢杆菌菌膜的影响。本研究涉及芽孢杆菌C-9在不同的营养情况下的生长情况，故在本研究中采取在不同营养物质与不同培养条件下培养芽孢杆菌。2.3结果与分析2.3.1芽孢杆菌培养基营养物质优化2.3.1.1通过对培养芽孢杆菌培养基所用碳源优化发现，本研究中供试生防菌C-9在不同碳源下培养，通过测得OD600发现以酵母提取物为碳源时的值最高，说明在本实验中，碳源为酵母提取物时的菌密度最大，最易形成菌膜，而碳源分别为葡萄糖、蔗糖、玉米粉时的测得的OD600均低于酵母提取物为碳源时的OD600（图2-1）。图2-1不同碳源培养下对生防菌菌膜产生的影响Fig.2-1Effectsofdifferentcarbonsourceculturesonbiofilm2.3.1.2通过对培养芽孢杆菌培养基所用有机氮源优化发现，本研究中供试生防菌C-9在不同有机氮源下培养，通过测得OD600发现以花生粉为有机氮源源时的值最高，说明在本实验中，有机氮源为花生粉时的菌密度最大，最易形成菌膜，而有机氮源分别为牛肉膏、大豆蛋白胨、酵母提取物、(CK)蛋白胨时的测得的OD600均低于花生为有机氮源时的OD600（图2-2）。图2-2不同有机氮源培养下对生防菌菌膜产生的影响Fig.2-2Effectsofdifferentorganicnitrogensourceculturesonbiofilm
芽孢杆菌对新疆棉花黄萎病拮抗作用的研究102.3.1.3通过对芽孢杆菌培养基所用无机氮源优化发现，本研究中供试生防菌C-9在不同无机氮源下培养，通过测得OD600发现CK为无机氮源源时的值最高，说明在本实验中，不添加无机氮源时的菌密度最大，而有机氮源分别为氯化铵、硫酸铵、硝酸铵、硝酸钠时的测得的OD600均低于CK为无机氮源时的OD600（图2-3）。图2-3不同无机氮源培养下对生防菌菌膜产生的影响Fig.2-3Effectsofdifferentinorganicnitrogensourceculturesonbiofilm2.3.1.4通过对芽孢杆菌培养基所用无机盐优化发现，本研究中供试生防菌C-9在不同无机盐下培养，通过测得OD600发现以磷酸二氢钾为无机盐时的值最高，说明在本实验中，以磷酸二氢钾为无机盐时的菌密度最大，最易形成菌膜，而无机盐分别为硫酸锰、硫酸镁、碳酸钙、氯化钠（CK）时的测得的OD600均低于磷酸二氢钾为无机氮源时的OD600（图2-4）。图2-4梯度不同无机盐培养下对生防菌菌膜产生的影响Fig.2-4Effectsofinorganicsaltculturewithdifferentgradientsonbiofilm2.3.1.5通过对芽孢杆菌培养基所用金属离子优化发现，本研究中供试生防菌C-9在培养基中添加不同金属离子下培养，通过测得OD600发现以氯化铁为金属离子时的值最高，说明在本实验中，以氯化铁中铁离子为金属离子时的菌密度最大，最易形成菌膜，而金属离子分别为氯化锰、氯化钙、硫酸亚铁时的测得的OD600均低于磷酸二氢钾为无机氮源时的OD600（图2-5）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]AM真菌对植物防御性蛋白的影响:研究进展[J]. 孙海冰,蔡柏岩. 中国农学通报. 2018(11)
[2]超氧化物歧化酶与植物抗逆性[J]. 夏民旋,王维,袁瑞,邓粉妮,沈法富. 分子植物育种. 2015(11)
[3]培养基组分对枯草芽胞杆菌产表面活性素的影响[J]. 朱玲燕,刘强,刘洋,李霜. 生物加工过程. 2015(05)
[4]枯草芽孢杆菌B006产surfactin突变株特性及其对黄瓜枯萎病的抑制能力[J]. 贾珂,李世东,刘桂君,郭荣君. 中国生物防治学报. 2013(04)
[5]植物体内活性氧的研究及其在植物抗逆方面的应用[J]. 薛鑫,张芊,吴金霞. 生物技术通报. 2013(10)
[6]枯草芽孢杆菌B006对黄瓜枯萎病菌和辣椒疫霉病菌的抑制作用及其抗菌组分分析[J]. 杨琦瑶,索雅丽,郭荣君,李世东,许修宏. 中国生物防治学报. 2012(02)
[7]细菌对植物病害生物防治研究进展[J]. 许彦君,刘海龙,刘新晶,许艳丽. 大豆科技. 2011(05)
[8]特殊生境中植物枯、黄萎病拮抗放线菌的筛选及鉴定[J]. 张文婷,张秋丽,冀媛媛,吴文君,宗兆锋. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2011(09)
[9]阿维菌素的发展史——在“2009阿维菌素类360°产业论坛”上的讲话[J]. 沈寅初. 世界农药. 2009(S2)
[10]水杨酸、茉莉酸和乙烯介导的防卫信号途径相互作用的研究进展[J]. 徐刚,姚银安. 生物学杂志. 2009(01)
博士论文
[1]一个来自于稻瘟病菌的免疫诱导蛋白的鉴定和功能分析[D]. 杨雅云.浙江大学 2008
硕士论文
[1]产surfactin枯草芽胞杆菌168重组菌株构建及其对黄瓜枯萎病的控制作用[D]. 高毓晗.中国农业科学院 2015
[2]解淀粉芽胞杆菌WH1抗真菌机制的研究[D]. 朱发银.华中农业大学 2010
[3]生物和非生物胁迫条件下拟南芥AtCBP60g表达特性研究[D]. 张新.内蒙古农业大学 2010
[4]拟南芥AtPLC5在植株对病原菌胁迫响应中的作用[D]. 马文文.中央民族大学 2006
本文编号：2942416
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