真菌诱导子对铁皮石斛原球茎生物碱含量影响及其机理

发布时间：2021-01-08 01:13

　　铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）是兰科石斛属多年生附生草本植物,是一种兼具观赏价值与药用价值的中草药。本文选用铁皮石斛原球茎为材料（产地为福建连城）,对原球茎离体培养条件进行优化,并以此为基础测定不同浓度和处理时间尖孢镰刀菌诱导子处理下铁皮石斛原球茎总生物碱含量的变化。同时克隆了两个调控生物碱合成途径相关酶的基因——DoHDR基因和DoIspF基因,并进行了基因相对表达量分析。1铁皮石斛离体培养条件优化以连城铁皮石斛为材料,优化铁皮石斛离体培养条件。①对比水杨酸、蛋白胨和番茄汁对铁皮石斛原球茎增殖的影响,结果显示,当水杨酸浓度为2 mg/L时原球茎增殖效果最好,但原球茎生长状态不好。蛋白胨浓度为2 mg/L时最有利原球茎增殖,番茄汁添加量为100 ml/L时原球茎增殖效果最好,且原球茎生长旺盛。②比较几组不同混合有机添加物对铁皮石斛原球茎增殖的影响,采用的添加物组合分别为香蕉和土豆、苹果和土豆、香蕉和苹果、番茄和土豆。结果表明添加50g/L土豆增殖效果最好③比较不同容器和培养方式对原球茎增殖的影响,结果表明,采用三角瓶液体振荡培养最有... 

【文章来源】：福建农林大学福建省

【文章页数】：116 页

【学位级别】：硕士

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缩写词
摘要
    1 铁皮石斛离体培养条件优化
    2 真菌诱导子对铁皮石斛总生物碱含量的影响
    3 铁皮石斛HDR基因和ISPF基因的克隆和生物信息学分析
    4 真菌诱导子处理下生物戚合成相关基因DoHDR与DoIspF基因相对表达量分析
ABSTRACT
第一章 引言
    1 石斛属植物离体培养研究进展
        1.1 有机添加物对药用石斛属植物离体培养的影响
        1.2 植物激素对药用石斛属植物离体培养的影响
        1.3 环境条件对药用石斛属植物离体培养的影响
        1.4 其他因素对药用石斛属植物离体培养的影响
    2 石斛属生物碱的研究进展
        2.1 药理作用
        2.2 影响生物碱含量的因素
    3 诱导子研究进展
        3.1 非生物诱导子
        3.2 真菌诱导子
    4 植物倍半萜合成途径以及相关酶基因
        4.1 HDR基因研究进展
        4.2 IspF基因研究进展
    5 本研究的意义与主要内容
        5.1 研究意义
        5.2 研究内容
第二章 铁皮石斛原球茎离体培养条件的优化
    第一节 不同添加物对铁皮石斛原球茎增殖的影响
        1 材料和方法
            1.1 材料
            1.2 试验方法
        2 结果与分析
            2.1 不同浓度水杨酸对铁皮石斛原球茎增殖的影响
            2.2 不同浓度蛋白胨对铁皮石斛原球茎增殖的影响
            2.3 不同浓度番茄汁对铁皮石斛原球茎增殖的影响
        3. 讨论
            3.1 水杨酸能够促进铁皮石斛原球茎的增殖
            3.2 适当浓度的蛋白胨能够促进铁皮石斛原球茎增殖
            3.3 适当浓度的番茄汁能够促进铁皮石斛原球茎增殖
    第二节 混合天然有机添加物对铁皮石斛原球茎增殖的影响
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 试验方法
            1.3 基本培养条件
        2 结果与分析
            2.1 香蕉与土豆混合物对铁皮石斛原球茎增殖情况的影响
            2.2 苹果与土豆混合物对铁皮石斛原球茎增殖情况的影响
            2.3 香蕉与苹果混合物对铁皮石斛原球茎增殖情况的影响
            2.4 番茄与土豆混合物对铁皮石斛原球茎增殖情况的影响
        3 讨论
            3.1 天然有机添加物都能一定程度上促进铁皮石斛原球茎的增殖
            3.2 土豆泥对铁皮石斛原球茎增殖的促进效果最佳
    第三节 不同培养方式及不同容器对铁皮石斛原球茎增殖的影响
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 试验方法
            1.3 培养条件
        2 结果与分析
        3 讨论
第三章 真菌诱导子对铁皮石斛总生物碱含量的影响
    第一节 不同浓度尖孢镰刀菌诱导子以及不同处理天数对铁皮石斛原球茎总生物碱含量的影响
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 真菌诱导子制备方法
            1.3 样品处理方法
            1.4 总生物碱的测定方法
            1.5 数据处理与分析
        2 结果与分析
            2.1 添加100 mg/L真菌诱导子的情况下铁皮石斛原球茎总生物碱含量的变化
            2.2 添加200 mg/L真菌诱导子的情况下铁皮石斛原球茎总生物碱含量的变化
            2.3 添加500 mg/L真菌诱导子的情况下铁皮石斛原球茎总生物碱含量的变化
            2.4 添加1000 mg/L真菌诱导子的情况下铁皮石斛原球茎总生物碱含量的变化
        3 讨论
            3.1 适当浓度的尖孢镰刀菌真菌诱导子促进铁皮石斛原球茎生物碱的合成与积累
            3.2 尖孢镰刀菌诱导子处理合适的时间能够促进铁皮石斛原球茎合成与积累生物碱
第四章 铁皮石斛生物碱相关基因的克隆和生物信息学分析
    第一节 铁皮石斛DoHDR基因的克隆和生物信息学分析
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果与分析
            2.1 DoHDR基因保守区克隆
            2.2 DoHDR基因3’端克隆
            2.3 DoHDR基因5’端克隆
            2.4 DoHDR基因拼接验证
        3 生物信息学分析
            3.1 DoHDR基因所编码的蛋白质理化性质分析
            3.2 蛋白质跨膜结构预测
            3.3 蛋白质信号肽预测
            3.4 蛋白质卷曲结构预测
            3.5 蛋白质二级结构预测
            3.6 蛋白质磷酸化位点预测
            3.7 蛋白质功能位点预测
            3.8 蛋白质三维结构预测
            3.9 亚细胞定位预测
            3.10 DoHDR蛋白系统进化树的构建
        4 讨论
            4.1 DoHDR基因与其他物种的相似性很大
            4.2 DoHDR基因克隆的意义
    第二节 铁皮石斛DoIspF基因的克隆和生物信息学分析
        1. 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果与分析
            2.1 DoIspF基因保守区的克隆
            2.2 DoIspF基因3’端的克隆
            2.3 DoIspF基因5’的克隆
            2.4 DolspF基因拼接验证
        3 生物信息学分析
            3.1 DoIspF蛋白质理化性质分析
            3.2 蛋白质跨膜结构预测
            3.3 蛋白质信号肽预测
            3.4 蛋白质卷曲结构预测
            3.5 蛋白质二级结构预测
            3.6 蛋白质磷酸化位点预测
            3.7 蛋白质功能位点预测
            3.8 蛋白质三维结构预测
            3.9 亚细胞定位预测
            3.10 DoIspF蛋白系统进化树的构建
        4 讨论
            4.1 DoIspF基因与其他物种的相似性很大
            4.2 基因DoIspF克隆的意义
第五章 铁皮石斛生物碱合成与积累相关基因定量表达分析
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 材料处理方法
        1.3 试剂与仪器
        1.4 总RNA提取及cDNA合成
        1.5 实时荧光定量PCR引物设计
        1.6 实时荧光定量PCR反应体系
        1.7 数据分析
    2 结果与分析
        2.1 18sRNA、DoHDR、DoIspF基因标准曲线分析
        2.2 铁皮石斛DoHDR基因相对表达量分析
        2.3 铁皮石斛DoIspF基因相对表达量分析
    3 讨论
        3.1 DoHDR基因可能参与了铁皮石斛生物碱含量调控
        3.2 DoIspF基因可能参与铁皮石斛生物碱合成
第六章 小结
    1 铁皮石斛离体培养条件优化
    2 真菌诱导子对铁皮石斛总生物碱含量的影响
    3 铁皮石斛HDR基因和ISPF基因的克隆和生物信息学分析
    4 真菌诱导子处理下生物碱合成相关基因DOHDR与DOISPF基因相对表达量分析
参考文献
附录 图版及图版说明
附录 DoHDR和DoIspF基祖（cDNA）序列登录
攻读硕士期间发表论文情况、参加学术会议及获奖情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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[4]金钗石斛有效成分对脂多糖激活星形胶质细胞产生炎症因子的影响[D]. 张俊青.遵义医学院 2010
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[6]稀土元素钕对密花石斛不定根再生作用的研究[D]. 张竞成.合肥工业大学 2008
[7]川滇金丝桃组织培养及植株再生研究[D]. 任华.四川农业大学 2007
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本文编号：2963610