茭白黑粉菌交配型基因类型测定和功能分析
发布时间：2021-01-18 10:38
茭白黑粉菌（Ustilago esculenta）与菰草（Zizania latifolia）互作在其上部产生膨大结构,称为茭白。茭白是一种重要的水生蔬菜。茭白黑粉菌以菌丝体的形式长期存活在寄主体内,通过寄主的无性繁殖转移到新的植株中,具有独特的生活史。有时,膨大的组织内产生大量的冬孢子堆,称为灰茭。虽然冬孢子可以萌发产生担孢子,但大量的观察认为不同交配型的担孢子不能融合产生双核菌丝,因而不能侵染寄主。研究认为,担孢子可融合为双核菌丝,但还没有充分的证据证实。因此,本文通过大量的担孢子株系交配基因的测定以及人工合成交配基因编码的蛋白,评价其功能作用。1.茭白黑粉菌的交配型基因表达分析。利用local blast在对茭白黑粉菌6条MFA基因和3条PRA基因表达分析后,发现关于交配型的基因全部表达,但在浙茭2号中,茭白黑粉菌只含有a2位点单倍体和a3位点单倍体,灰茭黑粉菌只含有a1位点和a3位点单倍体,PRA的基因类型可以作为浙茭2号交配型的鉴定依据。2.真菌分离及交配型基因的测定。通过浙茭2号灰茭组织分离,获得6个株系。通过冬孢子萌发产生担孢子及其单孢分离,获得50个株系。同样,通过浙茭...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
灰茭黑粉菌双核菌丝株系PRA1检测
浙江大学硕士学位论文第三章茭白黑粉菌交配型的研究24以灰茭黑粉菌的6个双核菌丝株系（DH1~6）的DNA为模板，以PRA2-F/PRA2-R为引物，进行PCR检测，发现6个株系的条带都不亮，说明没有PRA2基因。以灰茭黑粉菌的6个双核菌丝株系（DH1~6）的DNA为模板，以PRA3-F/PRA3-R为引物，进行PCR检测，发现6个株系的条带都亮，公司测序之后均与已知PRA3序列一致（图3.2），说明说明DH1~6株系都含有PRA3基因。图3.2灰茭黑粉菌双核菌丝株系PRA3检测。M：DL2000Marker，泳道1~6（DH1~6），显示了2239bp的PCR扩增产物。Figure3.2DeterminationofPRA3ofdikaryotichyphaeofU.esculentafromhuijiaoplants.M:2000bpMarker,Lane1-6(DH1~6)showtheamplificationproductof2239bp.根据PCR结果及测序序列比对分析，DH1~6包含交配型基因a1位点和a3位点（表3.3）。表3.3灰茭黑粉菌双核菌丝株系a位点测定Table3.3DeterminationoflocusaofdikaryotichyphaeinU.esculentafromhuijiaoplantsa位点类型a1a2a3PRA1MFA1.2MFA1.3PRA2MFA2.1MFA2.3PRA3MFA3.1MFA3.2DH1+++－－－+++DH2+++－－－+++DH3+++－－－+++DH4+++－－－+++DH5+++－－－+++DH6+++－－－+++*+表示检测到基因片段；—表示未检测到基因片段。3.2.2.2灰茭黑粉菌单孢株系a位点类型PCR检测以灰茭黑粉菌的50个单孢株系（H1~50）的DNA为模板，以PRA1-F/PRA1-
浙江大学硕士学位论文第三章茭白黑粉菌交配型的研究25R为引物，进行PCR检测，发现只有H9、H14、H23、H36和H43条带亮，将条带亮的样本送去测序，公司测序结果均与已知PRA1序列一致（图3.3），说明含有PRA1基因。图3.3灰茭黑粉菌单孢株系PRA1检测。M：DL2000Marker，泳道1-50（H1-50），泳道（9,14,23,36,43）显示了1277bp的PCR扩增产物。Figure3.3DeterminationofPRA1genesfromsingle-sporeisolatesofU.esculentafromhuijiaoplants.M:2000bpMarker,Lane1-50(H1-50),Lane（9,14,23,36,43）showtheamplificationproductof1127bp.以灰茭黑粉菌的50个单孢株系（H1~50）DNA为模板，以PRA2-F/PRA2-R为引物，进行PCR检测，没有亮的条带，说明没有PRA2基因。以灰茭黑粉菌的50个单孢株系（H1~50）的DNA为模板，以PRA3-F/PRA3-R为引物，进行PCR检测，发现只有H9、H14、H23、H36和H43条带不亮，其余条带都亮，将条带亮的样本送去测序，公司测序结果均与已知PRA3序列一致，说明含有PRA3基因（图3.4）。图3.4灰茭黑粉菌单孢株系PRA3检测。M：DL2000Marker，泳道1-50（H1-50），泳道（1~8,10~13,15~22,24~35,37~42,44~50）显示了2239bp的PCR扩增产物。Figure3.4DeterminationofPRA3genesfromsingle-sporeisolatesofU.esculentafromhuijiaoplants.M:2000bpMarker,Lane1-50(H1-50),Lane（1~8,10~13,15~22,24~35,37~42,44~50）showtheamplificationproductof2239bp.
【参考文献】：
期刊论文
[1]雄茭和灰茭的发生与防治[J]. 谢贻格,江扬先. 上海蔬菜. 2019(03)
[2]茭白黑粉菌（Ustilago esculenta）研究进展[J]. 张治平,耿园,戴海博,缪旻珉. 江苏农业科学. 2016(12)
[3]菰黑粉菌MAPK同源基因UeKss1的克隆及表达[J]. 张雅芬,胡鹏,崔海峰,应荣,刘俊平,余佳佳,俞晓平,叶子弘. 植物病理学报. 2016(05)
[4]玉米丝黑穗病菌基因组SSR信息分析及其引物设计[J]. 王雪梅,李新凤,路平,王建明. 山西农业大学学报(自然科学版). 2015(05)
[5]浙江省水生蔬菜产业发展现状及展望[J]. 徐蝉,胡美华,郭得平. 长江蔬菜. 2009(16)
[6]6省区玉米丝黑穗病菌遗传多样性分析[J]. 马军韬,王殿修,宫秀杰,高洁. 玉米科学. 2008(06)
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[8]东北春玉米区玉米丝黑穗病大发生原因及对策[J]. 晋齐鸣,王晓鸣,王作英,沙洪林,李红,宋淑云. 玉米科学. 2003(01)
[9]茭白冬芽的发育及抗寒性的形态学研究[J]. 丁小余,施国新,陈维培,徐祥生. 武汉植物学研究. 1993(02)
[10]茭白雄茭、灰茭的鉴别和防除[J]. 黄家禄. 农业科技通讯. 1989(10)
硕士论文
[1]茭白黑粉菌二型态转换的影响因素分析及乙醛酸循环关键基因功能初探[D]. 刘俊平.中国计量学院 2014
[2]茭白黑粉菌cAMP及MAPK途径关键基因的克隆及表达分析[D]. 应荣.中国计量学院 2014
本文编号：2984804
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
灰茭黑粉菌双核菌丝株系PRA1检测
浙江大学硕士学位论文第三章茭白黑粉菌交配型的研究24以灰茭黑粉菌的6个双核菌丝株系（DH1~6）的DNA为模板，以PRA2-F/PRA2-R为引物，进行PCR检测，发现6个株系的条带都不亮，说明没有PRA2基因。以灰茭黑粉菌的6个双核菌丝株系（DH1~6）的DNA为模板，以PRA3-F/PRA3-R为引物，进行PCR检测，发现6个株系的条带都亮，公司测序之后均与已知PRA3序列一致（图3.2），说明说明DH1~6株系都含有PRA3基因。图3.2灰茭黑粉菌双核菌丝株系PRA3检测。M：DL2000Marker，泳道1~6（DH1~6），显示了2239bp的PCR扩增产物。Figure3.2DeterminationofPRA3ofdikaryotichyphaeofU.esculentafromhuijiaoplants.M:2000bpMarker,Lane1-6(DH1~6)showtheamplificationproductof2239bp.根据PCR结果及测序序列比对分析，DH1~6包含交配型基因a1位点和a3位点（表3.3）。表3.3灰茭黑粉菌双核菌丝株系a位点测定Table3.3DeterminationoflocusaofdikaryotichyphaeinU.esculentafromhuijiaoplantsa位点类型a1a2a3PRA1MFA1.2MFA1.3PRA2MFA2.1MFA2.3PRA3MFA3.1MFA3.2DH1+++－－－+++DH2+++－－－+++DH3+++－－－+++DH4+++－－－+++DH5+++－－－+++DH6+++－－－+++*+表示检测到基因片段；—表示未检测到基因片段。3.2.2.2灰茭黑粉菌单孢株系a位点类型PCR检测以灰茭黑粉菌的50个单孢株系（H1~50）的DNA为模板，以PRA1-F/PRA1-
浙江大学硕士学位论文第三章茭白黑粉菌交配型的研究25R为引物，进行PCR检测，发现只有H9、H14、H23、H36和H43条带亮，将条带亮的样本送去测序，公司测序结果均与已知PRA1序列一致（图3.3），说明含有PRA1基因。图3.3灰茭黑粉菌单孢株系PRA1检测。M：DL2000Marker，泳道1-50（H1-50），泳道（9,14,23,36,43）显示了1277bp的PCR扩增产物。Figure3.3DeterminationofPRA1genesfromsingle-sporeisolatesofU.esculentafromhuijiaoplants.M:2000bpMarker,Lane1-50(H1-50),Lane（9,14,23,36,43）showtheamplificationproductof1127bp.以灰茭黑粉菌的50个单孢株系（H1~50）DNA为模板，以PRA2-F/PRA2-R为引物，进行PCR检测，没有亮的条带，说明没有PRA2基因。以灰茭黑粉菌的50个单孢株系（H1~50）的DNA为模板，以PRA3-F/PRA3-R为引物，进行PCR检测，发现只有H9、H14、H23、H36和H43条带不亮，其余条带都亮，将条带亮的样本送去测序，公司测序结果均与已知PRA3序列一致，说明含有PRA3基因（图3.4）。图3.4灰茭黑粉菌单孢株系PRA3检测。M：DL2000Marker，泳道1-50（H1-50），泳道（1~8,10~13,15~22,24~35,37~42,44~50）显示了2239bp的PCR扩增产物。Figure3.4DeterminationofPRA3genesfromsingle-sporeisolatesofU.esculentafromhuijiaoplants.M:2000bpMarker,Lane1-50(H1-50),Lane（1~8,10~13,15~22,24~35,37~42,44~50）showtheamplificationproductof2239bp.
【参考文献】：
期刊论文
[1]雄茭和灰茭的发生与防治[J]. 谢贻格,江扬先. 上海蔬菜. 2019(03)
[2]茭白黑粉菌（Ustilago esculenta）研究进展[J]. 张治平,耿园,戴海博,缪旻珉. 江苏农业科学. 2016(12)
[3]菰黑粉菌MAPK同源基因UeKss1的克隆及表达[J]. 张雅芬,胡鹏,崔海峰,应荣,刘俊平,余佳佳,俞晓平,叶子弘. 植物病理学报. 2016(05)
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[6]6省区玉米丝黑穗病菌遗传多样性分析[J]. 马军韬,王殿修,宫秀杰,高洁. 玉米科学. 2008(06)
[7]玉米病害发生现状与推广品种抗性对未来病害发展的影响[J]. 王晓鸣,晋齐鸣,石洁,王作英,李晓. 植物病理学报. 2006(01)
[8]东北春玉米区玉米丝黑穗病大发生原因及对策[J]. 晋齐鸣,王晓鸣,王作英,沙洪林,李红,宋淑云. 玉米科学. 2003(01)
[9]茭白冬芽的发育及抗寒性的形态学研究[J]. 丁小余,施国新,陈维培,徐祥生. 武汉植物学研究. 1993(02)
[10]茭白雄茭、灰茭的鉴别和防除[J]. 黄家禄. 农业科技通讯. 1989(10)
硕士论文
[1]茭白黑粉菌二型态转换的影响因素分析及乙醛酸循环关键基因功能初探[D]. 刘俊平.中国计量学院 2014
[2]茭白黑粉菌cAMP及MAPK途径关键基因的克隆及表达分析[D]. 应荣.中国计量学院 2014
本文编号：2984804
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