人参种子后熟分子机理的研究
发布时间：2021-01-18 14:41
人参（Panax ginseng C.A.Mey）为五加科多年生草本植物,是名贵的中药材。研究表明,人参在调节人体中枢神经系统、提高免疫力、抗疲劳、抗肿瘤、降血糖等方面都有良好功效,因此被广泛用于药品、保健品、化妆品等各类产品中,具有可观的经济价值和广阔的应用前景。人参主要通过种子繁殖,人参种子具有后熟特性,需要经历长时间的形态后熟和生理后熟。目前人参种子后熟的分子机制尚不清晰。赤霉素和脱落酸是调控种子休眠和萌发的关键激素,在人参种子后熟过程中,种胚需要依次完成形态后熟和生理后熟才能发芽,WRKY转录因子能通过调控靶基因的表达,调节植物生长发育。本研究对人参种子进行自然层积处理,筛选赤霉素和脱落酸代谢关键基因（GA2ox、GA20ox、NCED、CYP707A）、植物胚胎发育相关基因（SERK、BBM、WUS、FUS3、AGL15、LEC1）和WRKY转录因子（WRKY3、WRKY6、WRKY40）,利用半定量PCR和荧光定量PCR对以上基因在人参种子后熟过程中的表达水平进行检测。本研究结果如下:（1）对新鲜采集的人参种子进行层积处理,每45天取样一次,根据种胚形态和胚率将人参种子后熟...
【文章来源】： 曲庆玲 吉林大学
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
GA和ABA对种子休眠解除和后熟作用情况
吉林大学硕士学位论文22图2.1人参种子总RNA提取电泳图S1：形态后熟早期；S2：形态后熟中期；S3：形态后熟末期；S4：生理后熟早期；S5：生理后熟中期；S6：生理后熟末期从图2.1中可以看出，每个时期的RNA电泳都显示三条条带，分别为5SrRNNA，18SrRNA和28SrRNA。18SrRNA和28SrRNA条带清晰，且条带量度比为1:2，说明提取的RNA质量较好，未发生降解，可进行下一步实验。2.4.2基因克垄纯化与序列分析2.4.2.15SrRNA基因的克隆及测序以人参种子cDNA为模板，克隆人参5SrRNA基因的核心片段，并纯化测序，得到基因序列，基因克隆和纯化结果见图2.2，基因序列对比见图2.3。图2.25SrRNA基因电泳检测结果M：DNAMarkerDL500；1-2：PCR扩增产物；3：5SrRNA基因如图2.2所示，人参5SrRNA基因PCR扩增电泳检测图和纯化电泳检测图S1S2S3S4S5S628S18S5S100bp150bp115bp100bp150bp115bpM12M3
第4章人参PgGA2ox、PgGA20ox和PgWRKY3基因全长克隆23条带清晰，没有其他杂带，纯化效果好。图2.3克隆的内参基因与人参5SrRNA基因序列对比构建克隆载体，转化大肠杆菌，转化后得到单菌落，菌落PCR后获得阳性菌，测序之后得到5SrRNA基因序列，测序结果显示基因片段为115bp，与已知人参5SrRNA基因（KM067390.1）进行核酸序列比对，相似度分别为100%（如图2.3），可以认定克隆的基因片段为人参5SrRNA基因核心片段。2.4.2.2GA与种子后熟相关基因的克垄纯化及测序(1)GA2ox基因以人参种子cDNA为模板，克隆人参GA2ox基因的核心片段，并纯化，测序，得到基因序列，基因克隆和纯化电泳检测结果见图2.4，基因序列对比见图2.5。图2.4GA2ox基因克隆和纯化电泳检测结果M：DNAMarkerDL500；1-2：PCR扩增产物；3：GA2ox基因M3167bp200bp100bpM12167bp150bp200bp
【参考文献】：
期刊论文
[1]3种人参属药用植物种子生根过程中胚乳营养物质与酶活性的变化[J]. 郑惠元,雷秀娟,王佳,张新静,王英平. 种子. 2018(10)
[2]绿绒蒿属植物不同RNA提取方式的比较分析[J]. 冷秋思,屈燕,刘伟,区智. 分子植物育种. 2019(14)
[3]GA和ABA信号转导关键基因在不同温度处理‘凤丹’牡丹种子中的表达分析[J]. 任秀霞,王顺利,薛璟祺,杨若雯,管艳忍,李丹丹,薛玉前,张秀新. 园艺学报. 2017(01)
[4]WRKY转录因子在植物逆境应答中的功能[J]. 程远,姚祝平,阮美颖,李志邈,叶青静,王荣青,周国治,杨悦俭,万红建. 分子植物育种. 2016(11)
[5]水稻WRKY转录因子OsWRKY71的cDNA分离和表达分析[J]. 邹克琴,汪得凯,胡东维,李素芳,陈振煌. 浙江农业学报. 2014(06)
[6]药用植物种子形态生理休眠研究方法概述[J]. 付长珍,郭宝林. 中国现代中药. 2013(10)
[7]人参皂苷Rb1的药理作用研究进展[J]. 杨秋娅,李晓宇,刘皋林. 中国药学杂志. 2013(15)
[8]结缕草种子中NCED基因和CYP707A基因的克隆及其表达动态[J]. 迟晓雪,孙洁峰,方程. 草地学报. 2012(01)
[9]药用植物种子休眠类型及休眠解除研究进展[J]. 徐文娟,祁建军. 生物技术进展. 2011(02)
[10]始于质体/叶绿体的ABA信号通路[J]. 张大鹏. 植物学报. 2011(04)
博士论文
[1]不同外源物质提高盐胁迫下黄连种子及幼苗抗逆性机理研究[D]. 张春平.西南大学 2012
硕士论文
[1]拟南芥生殖发育突变体筛选及MPKs和MKKs的表达模式分析[D]. 张冬洋.兰州大学 2016
[2]拟南芥中ABA与WUS的关系分析及三个圆叶突变体的图位克隆[D]. 赵佳.西北大学 2014
[3]种子发育相关B3基因的起源和进化[D]. 李杨.复旦大学 2011
[4]川贝母种子萌发特性及育苗技术研究[D]. 胡莹莹.四川农业大学 2008
本文编号：2985128
【文章来源】： 曲庆玲 吉林大学
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
GA和ABA对种子休眠解除和后熟作用情况
吉林大学硕士学位论文22图2.1人参种子总RNA提取电泳图S1：形态后熟早期；S2：形态后熟中期；S3：形态后熟末期；S4：生理后熟早期；S5：生理后熟中期；S6：生理后熟末期从图2.1中可以看出，每个时期的RNA电泳都显示三条条带，分别为5SrRNNA，18SrRNA和28SrRNA。18SrRNA和28SrRNA条带清晰，且条带量度比为1:2，说明提取的RNA质量较好，未发生降解，可进行下一步实验。2.4.2基因克垄纯化与序列分析2.4.2.15SrRNA基因的克隆及测序以人参种子cDNA为模板，克隆人参5SrRNA基因的核心片段，并纯化测序，得到基因序列，基因克隆和纯化结果见图2.2，基因序列对比见图2.3。图2.25SrRNA基因电泳检测结果M：DNAMarkerDL500；1-2：PCR扩增产物；3：5SrRNA基因如图2.2所示，人参5SrRNA基因PCR扩增电泳检测图和纯化电泳检测图S1S2S3S4S5S628S18S5S100bp150bp115bp100bp150bp115bpM12M3
第4章人参PgGA2ox、PgGA20ox和PgWRKY3基因全长克隆23条带清晰，没有其他杂带，纯化效果好。图2.3克隆的内参基因与人参5SrRNA基因序列对比构建克隆载体，转化大肠杆菌，转化后得到单菌落，菌落PCR后获得阳性菌，测序之后得到5SrRNA基因序列，测序结果显示基因片段为115bp，与已知人参5SrRNA基因（KM067390.1）进行核酸序列比对，相似度分别为100%（如图2.3），可以认定克隆的基因片段为人参5SrRNA基因核心片段。2.4.2.2GA与种子后熟相关基因的克垄纯化及测序(1)GA2ox基因以人参种子cDNA为模板，克隆人参GA2ox基因的核心片段，并纯化，测序，得到基因序列，基因克隆和纯化电泳检测结果见图2.4，基因序列对比见图2.5。图2.4GA2ox基因克隆和纯化电泳检测结果M：DNAMarkerDL500；1-2：PCR扩增产物；3：GA2ox基因M3167bp200bp100bpM12167bp150bp200bp
【参考文献】：
期刊论文
[1]3种人参属药用植物种子生根过程中胚乳营养物质与酶活性的变化[J]. 郑惠元,雷秀娟,王佳,张新静,王英平. 种子. 2018(10)
[2]绿绒蒿属植物不同RNA提取方式的比较分析[J]. 冷秋思,屈燕,刘伟,区智. 分子植物育种. 2019(14)
[3]GA和ABA信号转导关键基因在不同温度处理‘凤丹’牡丹种子中的表达分析[J]. 任秀霞,王顺利,薛璟祺,杨若雯,管艳忍,李丹丹,薛玉前,张秀新. 园艺学报. 2017(01)
[4]WRKY转录因子在植物逆境应答中的功能[J]. 程远,姚祝平,阮美颖,李志邈,叶青静,王荣青,周国治,杨悦俭,万红建. 分子植物育种. 2016(11)
[5]水稻WRKY转录因子OsWRKY71的cDNA分离和表达分析[J]. 邹克琴,汪得凯,胡东维,李素芳,陈振煌. 浙江农业学报. 2014(06)
[6]药用植物种子形态生理休眠研究方法概述[J]. 付长珍,郭宝林. 中国现代中药. 2013(10)
[7]人参皂苷Rb1的药理作用研究进展[J]. 杨秋娅,李晓宇,刘皋林. 中国药学杂志. 2013(15)
[8]结缕草种子中NCED基因和CYP707A基因的克隆及其表达动态[J]. 迟晓雪,孙洁峰,方程. 草地学报. 2012(01)
[9]药用植物种子休眠类型及休眠解除研究进展[J]. 徐文娟,祁建军. 生物技术进展. 2011(02)
[10]始于质体/叶绿体的ABA信号通路[J]. 张大鹏. 植物学报. 2011(04)
博士论文
[1]不同外源物质提高盐胁迫下黄连种子及幼苗抗逆性机理研究[D]. 张春平.西南大学 2012
硕士论文
[1]拟南芥生殖发育突变体筛选及MPKs和MKKs的表达模式分析[D]. 张冬洋.兰州大学 2016
[2]拟南芥中ABA与WUS的关系分析及三个圆叶突变体的图位克隆[D]. 赵佳.西北大学 2014
[3]种子发育相关B3基因的起源和进化[D]. 李杨.复旦大学 2011
[4]川贝母种子萌发特性及育苗技术研究[D]. 胡莹莹.四川农业大学 2008
本文编号：2985128
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/zaizhiyanjiusheng/2985128.html
教材专著
