CsRSF1和CsRSF2在黄瓜响应白粉病菌侵染过程中的作用
发布时间：2021-01-22 01:19
黄瓜（Cucumis sativus）是我国设施蔬菜栽培面积最大的作物之一。由单丝白粉病菌（Sphaerotheca fuliginea）引起的白粉病是黄瓜生产中的一种重要病害,严重影响黄瓜的产量与质量。研究表明,黄瓜中有两个NBS-LRR型蛋白（Cucsa.102240、Cucsa123410）被预测与拟南芥抗白粉病蛋白RPW8具有类似的结构域序列,我们将这两个蛋白分别命名为CsRSF1和CsRSF2蛋白。核苷酸结合富亮氨酸重复序列（NBS-LRR）型蛋白可以直接或间接识别不同来源的病原物效应子,在植物防御机制中发挥着关键的作用。但目前CsRSF1和CsRSF2基因在黄瓜调控白粉病过程中有何作用仍不清楚。本研究克隆获得CsRSF1和CsRSF2基因的CDS区序列,明确了CsRSF1和CsRSF2基因的序列特征与表达模式,并利用基因瞬时沉默和过量表达技术,初步揭示了CsRSF1和CsRSF2基因在黄瓜响应白粉病菌侵染中的作用。主要研究结果如下:（1）在黄瓜抗、感白粉病姐妹系B21-a-2-1-2和B21-a-2-2-2中分别克隆获得CsRSF1和CsREF2基因的CDS区序列,CsRS...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
1.1 植物NBS-LRR蛋白
1.1.1 植物NBS-LRR蛋白的起源与分类
1.1.2 植物NBS-LRR蛋白的结构域及其功能
1.1.3 植物NBS-LRR蛋白诱导的免疫反应的分子机制
1.1.4 植物NBS-LRR蛋白的应用
1.2 本研究目的与意义
1.3 技术路线
第二章 黄瓜CsRSF1和CsRSF2基因的克隆、定位及表达分析
2.1 试验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 载体和菌株
2.1.3 试剂配制
2.1.4 引物合成及测序
2.1.5 数据处理
2.2 方法
2.2.1 RNA提取及c DNA合成
2.2.2 CsRSF1和CsRSF2基因CDS区的克隆
2.2.3 亚细胞定位载体构建
2.2.4 烟草叶片瞬时过表达
2.2.5 实时定量PCR（q RT-PCR）
2.2.6 烟草表皮细胞的观察
2.2.7 CsRSF1和CsRSF2基因的生物信息学分析
2.3 结果与分析
2.3.1 CsRSF1和CsRSF2基因扩增
2.3.2 CsRSF1和CsRSF2基因的生物信息学分析
2.3.3 CsRSF1和CsRSF2蛋白亚细胞定位分析
2.3.4 CsRSF1和CsRSF2基因表达分析
2.4 讨论
2.5 结论
第三章 Cs RSF1和Cs RSF2基因在黄瓜响应白粉病菌侵染中的作用
3.1 材料
3.1.1 植物材料
3.1.2 载体和菌株
3.1.3 试剂配制
3.1.4 引物合成及测序
3.1.5 数据处理
3.2 方法
3.2.1 黄瓜白粉病菌的培养与接种
3.2.2 RNA的提取和c DNA合成
3.2.3 CsRSF1和CsRSF2基因瞬时沉默表达载体构建
3.2.4 CsRSF1和CsRSF2基因瞬时过表达载体构建
3.2.5 重组质粒转化黄瓜子叶
3.2.6 黄瓜原生质体的提取
3.2.7 黄瓜原生质体细胞的观察
3.2.8 黄瓜病情指数调查
3.2.9 考马斯亮蓝染色
3.2.10 qRT-PCR
3.3 结果与分析
3.3.1 白粉病菌胁迫下CsRSF1和CsRSF2基因的表达模式分析
3.3.2 CsRSF1和CsRSF2 基因瞬时沉默表达载体构建
3.3.3 CsRSF1和CsRSF2 基因瞬时过表达载体构建
3.3.4 重组质粒转化根癌农杆菌感受态EHA105
3.3.5 CsRSF1和CsRSF2 基因瞬时沉默黄瓜子叶的鉴定
3.3.6 CsRSF1和CsRSF2 基因瞬时过表达黄瓜子叶的鉴定
3.3.7 CsRSF1和CsRSF2 基因瞬时沉默黄瓜子叶的白粉病抗性鉴定
3.3.8 CsRSF1和CsRSF2 基因瞬时过表达黄瓜子叶的白粉病抗性鉴定
3.3.9 CsRSF1和CsRSF2 对防御相关基因的表达调控
3.4 讨论
3.5 结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表学术论文
本文编号：2992259
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
1.1 植物NBS-LRR蛋白
1.1.1 植物NBS-LRR蛋白的起源与分类
1.1.2 植物NBS-LRR蛋白的结构域及其功能
1.1.3 植物NBS-LRR蛋白诱导的免疫反应的分子机制
1.1.4 植物NBS-LRR蛋白的应用
1.2 本研究目的与意义
1.3 技术路线
第二章 黄瓜CsRSF1和CsRSF2基因的克隆、定位及表达分析
2.1 试验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 载体和菌株
2.1.3 试剂配制
2.1.4 引物合成及测序
2.1.5 数据处理
2.2 方法
2.2.1 RNA提取及c DNA合成
2.2.2 CsRSF1和CsRSF2基因CDS区的克隆
2.2.3 亚细胞定位载体构建
2.2.4 烟草叶片瞬时过表达
2.2.5 实时定量PCR（q RT-PCR）
2.2.6 烟草表皮细胞的观察
2.2.7 CsRSF1和CsRSF2基因的生物信息学分析
2.3 结果与分析
2.3.1 CsRSF1和CsRSF2基因扩增
2.3.2 CsRSF1和CsRSF2基因的生物信息学分析
2.3.3 CsRSF1和CsRSF2蛋白亚细胞定位分析
2.3.4 CsRSF1和CsRSF2基因表达分析
2.4 讨论
2.5 结论
第三章 Cs RSF1和Cs RSF2基因在黄瓜响应白粉病菌侵染中的作用
3.1 材料
3.1.1 植物材料
3.1.2 载体和菌株
3.1.3 试剂配制
3.1.4 引物合成及测序
3.1.5 数据处理
3.2 方法
3.2.1 黄瓜白粉病菌的培养与接种
3.2.2 RNA的提取和c DNA合成
3.2.3 CsRSF1和CsRSF2基因瞬时沉默表达载体构建
3.2.4 CsRSF1和CsRSF2基因瞬时过表达载体构建
3.2.5 重组质粒转化黄瓜子叶
3.2.6 黄瓜原生质体的提取
3.2.7 黄瓜原生质体细胞的观察
3.2.8 黄瓜病情指数调查
3.2.9 考马斯亮蓝染色
3.2.10 qRT-PCR
3.3 结果与分析
3.3.1 白粉病菌胁迫下CsRSF1和CsRSF2基因的表达模式分析
3.3.2 CsRSF1和CsRSF2 基因瞬时沉默表达载体构建
3.3.3 CsRSF1和CsRSF2 基因瞬时过表达载体构建
3.3.4 重组质粒转化根癌农杆菌感受态EHA105
3.3.5 CsRSF1和CsRSF2 基因瞬时沉默黄瓜子叶的鉴定
3.3.6 CsRSF1和CsRSF2 基因瞬时过表达黄瓜子叶的鉴定
3.3.7 CsRSF1和CsRSF2 基因瞬时沉默黄瓜子叶的白粉病抗性鉴定
3.3.8 CsRSF1和CsRSF2 基因瞬时过表达黄瓜子叶的白粉病抗性鉴定
3.3.9 CsRSF1和CsRSF2 对防御相关基因的表达调控
3.4 讨论
3.5 结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表学术论文
本文编号：2992259
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/zaizhiyanjiusheng/2992259.html
教材专著
