小黑麦茉莉酸诱导蛋白基因的克隆与功能分析
发布时间：2021-01-24 03:47
目的:干旱是影响作物品质和产量的主要非生物胁迫因素之一。植物在遭受到外界胁迫时会启动特异基因的表达,从而大量合成茉莉酸诱导蛋白。茉莉酸诱导蛋白在植物生长发育及生物和非生物胁迫抵御反应中具有重要作用。本研究拟从六倍体小黑麦中克隆茉莉酸诱导蛋白基因,并对其功能进行解析,以期为小黑麦抗旱育种提供候选基因,也为理解小黑麦应激干旱胁迫提供理论基础。方法:以干旱胁迫下小黑麦转录组测序数据为基础,利用RT-PCR技术从小黑麦中克隆在干旱胁迫下显著上调表达的茉莉酸诱导蛋白基因TwRIP1的编码区全长,并对其生物信息学进行分析;利用qRT-PCR技术检测了干旱胁迫下TwRIP1基因在小黑麦不同组织中的表达量,分析了TwRIP1基因在20%PEG 6000、200 mM NaCl和4℃低温胁迫下的表达模式,并通过100μM MeJA和100μM ABA浸根及叶片喷洒的方法探讨其受这两种激素诱导后的基因表达量变化;经BSMV病毒介导VIGS技术沉默小黑麦中的TwRIP1基因后,测定干旱胁迫和100μM MeJA处理下该基因表达量及抗旱生理指标变化,以探索该基因的功能;同时构建了含有该目的基因的过表达载体,采...
【文章来源】： 凌悦铭 石河子大学
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
当植物受到胁迫时JIP60的作用机制（DeZaeytijdandVanDamme,2017）
小黑麦茉莉酸诱导蛋白基因的克隆与功能分析13细胞定位。2.3结果分析2.3.1小黑麦叶片基因组DNA和总RNA质量2.3.1.1基因组DNA质量检测所提取的正常生长条件下的小黑麦叶片总DNA，经1.0％琼脂糖凝胶电泳检测（图2-1），其降解较少，完整性较好，其A260/A280均在1.8～2.0之间，可见所提取的DNA质量较好。图2-1DNA电泳图Fig.2-1DNAprofile注：泳道1、2表示两个重复Lanes1,2indicatetworeplicates2.3.1.2总RNA质量及cDNA检测所提取的正常生长条件下的小黑麦叶片总RNA，经1.0%琼脂糖凝胶电泳检测（图2-2），其28S和18S核糖体RNA条带清晰，28SrRNA的亮度基本为18SrRNA的两倍，完整性较好，其A260/A280均在2.0～2.2之间，可见所提取的RNA质量较好。采用反转录试剂盒将RNA反转录成cDNA，以小麦β-Actin基因为内参进行PCR扩增，经1.2%琼脂糖凝胶电泳结果显示（图2-3），内参β-Actin基因目标条带大小正确，条带清晰，无杂带。可见反转录的cDNA可以用于后期实验。28SrRNA18SrRNA12图2-2RNA电泳检测图Fig.2-2RNAprofile注：泳道1，2：2次重复。Note:lanes1,2:2repetitions.12
小麦内参β-Actin基因PCR扩增结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于全血基因表达谱的脑组织基因表达量预测模型的建立[J]. 徐文剑,李巍. 首都医科大学学报. 2019(05)
[2]氮肥缓解苗期干旱对小麦根系形态建成及生理特性的影响[J]. 何梦迪,钟宣伯,周启政,崔楠,汪桂凤,马武军,唐桂香. 核农学报. 2019(11)
[3]干旱胁迫对不同抗旱性苜蓿品种根系形态及解剖结构的影响[J]. 张翠梅,师尚礼,刘珍,杨帆,张振科. 草业学报. 2019(05)
[4]咪唑类氮氧自由基化合物的生物活性研究进展[J]. 邵瑾,杨颖,马慧萍,贾正平,景临林. 国际药学研究杂志. 2019(03)
[5]植物干旱胁迫响应机制研究进展[J]. 王凯悦,陈芳泉,黄五星. 中国农业科技导报. 2019(02)
[6]气候变暖背景下中国干旱强度、频次和持续时间及其南北差异性[J]. 韩兰英,张强,贾建英,王有恒,黄涛. 中国沙漠. 2019(05)
[7]脯氨酸转运相关基因的研究进展[J]. 陈颖,王婷,华学军. 植物学报. 2018(06)
[8]巴哈雀稗PnDREB2基因克隆及时序表达图谱构建[J]. 张宇君,王普昶,赵丽丽,曾庆飞,张雄,陈超,董瑞. 核农学报. 2019(01)
[9]红肉蜜柚PDR型转运蛋白基因的发掘及CmPDR11-2表达与耐草甘膦初步分析[J]. 宋敏娜,姚婷婷,潘腾飞,蒲小龙,张迪,谢冬梅,潘东明. 热带作物学报. 2018(09)
[10]不同生育时期冬小麦叶片相对含水量高光谱监测[J]. 刘晓静,陈国庆,王良,陈玉洁,王兰,刘肖瑜,李学国. 麦类作物学报. 2018(07)
本文编号：2996509
【文章来源】： 凌悦铭 石河子大学
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
当植物受到胁迫时JIP60的作用机制（DeZaeytijdandVanDamme,2017）
小黑麦茉莉酸诱导蛋白基因的克隆与功能分析13细胞定位。2.3结果分析2.3.1小黑麦叶片基因组DNA和总RNA质量2.3.1.1基因组DNA质量检测所提取的正常生长条件下的小黑麦叶片总DNA，经1.0％琼脂糖凝胶电泳检测（图2-1），其降解较少，完整性较好，其A260/A280均在1.8～2.0之间，可见所提取的DNA质量较好。图2-1DNA电泳图Fig.2-1DNAprofile注：泳道1、2表示两个重复Lanes1,2indicatetworeplicates2.3.1.2总RNA质量及cDNA检测所提取的正常生长条件下的小黑麦叶片总RNA，经1.0%琼脂糖凝胶电泳检测（图2-2），其28S和18S核糖体RNA条带清晰，28SrRNA的亮度基本为18SrRNA的两倍，完整性较好，其A260/A280均在2.0～2.2之间，可见所提取的RNA质量较好。采用反转录试剂盒将RNA反转录成cDNA，以小麦β-Actin基因为内参进行PCR扩增，经1.2%琼脂糖凝胶电泳结果显示（图2-3），内参β-Actin基因目标条带大小正确，条带清晰，无杂带。可见反转录的cDNA可以用于后期实验。28SrRNA18SrRNA12图2-2RNA电泳检测图Fig.2-2RNAprofile注：泳道1，2：2次重复。Note:lanes1,2:2repetitions.12
小麦内参β-Actin基因PCR扩增结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于全血基因表达谱的脑组织基因表达量预测模型的建立[J]. 徐文剑,李巍. 首都医科大学学报. 2019(05)
[2]氮肥缓解苗期干旱对小麦根系形态建成及生理特性的影响[J]. 何梦迪,钟宣伯,周启政,崔楠,汪桂凤,马武军,唐桂香. 核农学报. 2019(11)
[3]干旱胁迫对不同抗旱性苜蓿品种根系形态及解剖结构的影响[J]. 张翠梅,师尚礼,刘珍,杨帆,张振科. 草业学报. 2019(05)
[4]咪唑类氮氧自由基化合物的生物活性研究进展[J]. 邵瑾,杨颖,马慧萍,贾正平,景临林. 国际药学研究杂志. 2019(03)
[5]植物干旱胁迫响应机制研究进展[J]. 王凯悦,陈芳泉,黄五星. 中国农业科技导报. 2019(02)
[6]气候变暖背景下中国干旱强度、频次和持续时间及其南北差异性[J]. 韩兰英,张强,贾建英,王有恒,黄涛. 中国沙漠. 2019(05)
[7]脯氨酸转运相关基因的研究进展[J]. 陈颖,王婷,华学军. 植物学报. 2018(06)
[8]巴哈雀稗PnDREB2基因克隆及时序表达图谱构建[J]. 张宇君,王普昶,赵丽丽,曾庆飞,张雄,陈超,董瑞. 核农学报. 2019(01)
[9]红肉蜜柚PDR型转运蛋白基因的发掘及CmPDR11-2表达与耐草甘膦初步分析[J]. 宋敏娜,姚婷婷,潘腾飞,蒲小龙,张迪,谢冬梅,潘东明. 热带作物学报. 2018(09)
[10]不同生育时期冬小麦叶片相对含水量高光谱监测[J]. 刘晓静,陈国庆,王良,陈玉洁,王兰,刘肖瑜,李学国. 麦类作物学报. 2018(07)
本文编号：2996509
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