LTA-sa对奶牛乳腺上皮细胞中乳蛋白合成及相关信号通路的影响
发布时间：2021-01-24 04:08
金黄色葡萄球菌能诱发奶牛乳房炎,是临床上最难治疗且造成经济损失最大的病原菌,严重阻碍了奶牛产业健康发展。在奶牛乳腺发生金黄色葡萄球菌感染时,其表面的固有成分脂磷壁酸（Staphylococcus aureus lipoteichoic acid,LTA-sa）能够作为配体被识别,引起奶牛乳腺组织发生炎症反应,改变乳汁中乳蛋白和乳脂肪等乳成分的含量。但具体机制尚不十分明确。本试验以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells,BMECs）为泌乳模型,研究LTA-sa对BMECs中乳蛋白合成功能及相关信号通路的影响,为进一步研究牛奶蛋白合成的调控机制,提高牛奶的营养质量提供科学依据。为明确LTA-sa构建炎症细胞模型的最佳处理浓度以及核因子-κB（Nuclear factor-κB,NF-κB）抑制剂PDTC和信号转导与转录活化因子3（Signal transducer and activator of transcription 3,STAT3）抑制剂stattic的最佳处理浓度,分别用不同浓度的LTA-sa、PDTC和stattic处理BM...
【文章来源】： 耿子健 黑龙江八一农垦大学
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
奶牛乳腺上皮细胞的原代培养(40×)
LTA-sa对奶牛乳腺上皮细胞中乳蛋白合成及相关信号通路的影响24二次纯化后，视野中上皮细胞已占据主导位置，但仍有部分成纤维细胞混杂在其中(图3-2B)；第三次纯化后，视野中已观察不到成纤维细胞的存在，表明我们已经获得了相对纯净的上皮细胞，且细胞生长状态良好。三次纯化后，我们在每次细胞传代时依旧进行纯化过程，以保持细胞的纯净。通过免疫荧光技术，使用CK-18抗体对所获得的上皮细胞进行鉴定，如图3-3所示，蓝色荧光为被DAPI染色的细胞核(图3-3A)，CK-18激发的绿色荧光明亮清晰，表明CK-18蛋白在细胞质和细胞膜上大量表达(图3-3B)。该结果表明我们从荷斯坦奶牛乳腺组织所分离获得的细胞为BMECs，且纯度较高。图3-2奶牛乳腺上皮细胞的分离纯化(100×)Fig3-2Isolationandpurificationofbovinemammaryepithelialcells(100×)(A)：第一次纯化的结果；(B)：第二次纯化的结果；(C)：第三次纯化的结果。(A):Theresultsoffirstpurification;(B):Theresultsofsecondpurification;(C):Theresultsofthirdpurification.图3-3奶牛乳腺上皮细胞CK-18的免疫荧光结果(200×)Fig.3-3ImmunofluorescenceresultsofCK-18inBMECs(200×)A：DAPI染色结果；B：CK-18的免疫荧光结果；C：A、B合图。A:theresultsofDAPIstaining;B:ImmunofluorescenceresultsofCK-18;C:ResultofmergedAandB.3.1.3BMECs中CSN2表达能力的检测通过WesternBlot技术检测纯化至第5代、第6代、第7代的BMECs中CSN2的蛋白表达情况。结果如图3-4所示，CSN2能够正常表达，且各代细胞之间CSN2的蛋白相对
LTA-sa对奶牛乳腺上皮细胞中乳蛋白合成及相关信号通路的影响24二次纯化后，视野中上皮细胞已占据主导位置，但仍有部分成纤维细胞混杂在其中(图3-2B)；第三次纯化后，视野中已观察不到成纤维细胞的存在，表明我们已经获得了相对纯净的上皮细胞，且细胞生长状态良好。三次纯化后，我们在每次细胞传代时依旧进行纯化过程，以保持细胞的纯净。通过免疫荧光技术，使用CK-18抗体对所获得的上皮细胞进行鉴定，如图3-3所示，蓝色荧光为被DAPI染色的细胞核(图3-3A)，CK-18激发的绿色荧光明亮清晰，表明CK-18蛋白在细胞质和细胞膜上大量表达(图3-3B)。该结果表明我们从荷斯坦奶牛乳腺组织所分离获得的细胞为BMECs，且纯度较高。图3-2奶牛乳腺上皮细胞的分离纯化(100×)Fig3-2Isolationandpurificationofbovinemammaryepithelialcells(100×)(A)：第一次纯化的结果；(B)：第二次纯化的结果；(C)：第三次纯化的结果。(A):Theresultsoffirstpurification;(B):Theresultsofsecondpurification;(C):Theresultsofthirdpurification.图3-3奶牛乳腺上皮细胞CK-18的免疫荧光结果(200×)Fig.3-3ImmunofluorescenceresultsofCK-18inBMECs(200×)A：DAPI染色结果；B：CK-18的免疫荧光结果；C：A、B合图。A:theresultsofDAPIstaining;B:ImmunofluorescenceresultsofCK-18;C:ResultofmergedAandB.3.1.3BMECs中CSN2表达能力的检测通过WesternBlot技术检测纯化至第5代、第6代、第7代的BMECs中CSN2的蛋白表达情况。结果如图3-4所示，CSN2能够正常表达，且各代细胞之间CSN2的蛋白相对
【参考文献】：
期刊论文
[1]脂磷壁酸体外诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症模型的建立与评价[J]. 孙静,冶冬阳,王旭荣,侯艳华,张凯,张景艳,王磊,张康,李建喜,杨志强. 中国兽医科学. 2018(08)
硕士论文
[1]PRL抵抗在LPS导致BMEC乳蛋白合成功能降低中的作用[D]. 单旭菲.黑龙江八一农垦大学 2019
[2]奶牛乳腺上皮细胞JAK2-STAT5和mTOR信号通路协同调控乳蛋白合成[D]. 史琳琳.东北农业大学 2013
本文编号：2996543
【文章来源】： 耿子健 黑龙江八一农垦大学
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
奶牛乳腺上皮细胞的原代培养(40×)
LTA-sa对奶牛乳腺上皮细胞中乳蛋白合成及相关信号通路的影响24二次纯化后，视野中上皮细胞已占据主导位置，但仍有部分成纤维细胞混杂在其中(图3-2B)；第三次纯化后，视野中已观察不到成纤维细胞的存在，表明我们已经获得了相对纯净的上皮细胞，且细胞生长状态良好。三次纯化后，我们在每次细胞传代时依旧进行纯化过程，以保持细胞的纯净。通过免疫荧光技术，使用CK-18抗体对所获得的上皮细胞进行鉴定，如图3-3所示，蓝色荧光为被DAPI染色的细胞核(图3-3A)，CK-18激发的绿色荧光明亮清晰，表明CK-18蛋白在细胞质和细胞膜上大量表达(图3-3B)。该结果表明我们从荷斯坦奶牛乳腺组织所分离获得的细胞为BMECs，且纯度较高。图3-2奶牛乳腺上皮细胞的分离纯化(100×)Fig3-2Isolationandpurificationofbovinemammaryepithelialcells(100×)(A)：第一次纯化的结果；(B)：第二次纯化的结果；(C)：第三次纯化的结果。(A):Theresultsoffirstpurification;(B):Theresultsofsecondpurification;(C):Theresultsofthirdpurification.图3-3奶牛乳腺上皮细胞CK-18的免疫荧光结果(200×)Fig.3-3ImmunofluorescenceresultsofCK-18inBMECs(200×)A：DAPI染色结果；B：CK-18的免疫荧光结果；C：A、B合图。A:theresultsofDAPIstaining;B:ImmunofluorescenceresultsofCK-18;C:ResultofmergedAandB.3.1.3BMECs中CSN2表达能力的检测通过WesternBlot技术检测纯化至第5代、第6代、第7代的BMECs中CSN2的蛋白表达情况。结果如图3-4所示，CSN2能够正常表达，且各代细胞之间CSN2的蛋白相对
LTA-sa对奶牛乳腺上皮细胞中乳蛋白合成及相关信号通路的影响24二次纯化后，视野中上皮细胞已占据主导位置，但仍有部分成纤维细胞混杂在其中(图3-2B)；第三次纯化后，视野中已观察不到成纤维细胞的存在，表明我们已经获得了相对纯净的上皮细胞，且细胞生长状态良好。三次纯化后，我们在每次细胞传代时依旧进行纯化过程，以保持细胞的纯净。通过免疫荧光技术，使用CK-18抗体对所获得的上皮细胞进行鉴定，如图3-3所示，蓝色荧光为被DAPI染色的细胞核(图3-3A)，CK-18激发的绿色荧光明亮清晰，表明CK-18蛋白在细胞质和细胞膜上大量表达(图3-3B)。该结果表明我们从荷斯坦奶牛乳腺组织所分离获得的细胞为BMECs，且纯度较高。图3-2奶牛乳腺上皮细胞的分离纯化(100×)Fig3-2Isolationandpurificationofbovinemammaryepithelialcells(100×)(A)：第一次纯化的结果；(B)：第二次纯化的结果；(C)：第三次纯化的结果。(A):Theresultsoffirstpurification;(B):Theresultsofsecondpurification;(C):Theresultsofthirdpurification.图3-3奶牛乳腺上皮细胞CK-18的免疫荧光结果(200×)Fig.3-3ImmunofluorescenceresultsofCK-18inBMECs(200×)A：DAPI染色结果；B：CK-18的免疫荧光结果；C：A、B合图。A:theresultsofDAPIstaining;B:ImmunofluorescenceresultsofCK-18;C:ResultofmergedAandB.3.1.3BMECs中CSN2表达能力的检测通过WesternBlot技术检测纯化至第5代、第6代、第7代的BMECs中CSN2的蛋白表达情况。结果如图3-4所示，CSN2能够正常表达，且各代细胞之间CSN2的蛋白相对
【参考文献】：
期刊论文
[1]脂磷壁酸体外诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症模型的建立与评价[J]. 孙静,冶冬阳,王旭荣,侯艳华,张凯,张景艳,王磊,张康,李建喜,杨志强. 中国兽医科学. 2018(08)
硕士论文
[1]PRL抵抗在LPS导致BMEC乳蛋白合成功能降低中的作用[D]. 单旭菲.黑龙江八一农垦大学 2019
[2]奶牛乳腺上皮细胞JAK2-STAT5和mTOR信号通路协同调控乳蛋白合成[D]. 史琳琳.东北农业大学 2013
本文编号：2996543
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教材专著
