蛹虫草菌株退化机制初探与高效基因编辑技术的构建

发布时间：2021-01-26 06:32

　　蛹虫草作为重要食药用真菌,其很多功效都接近于冬虫夏草,具有提高人体免疫力、抗肿瘤和抗氧化等功能,是冬虫夏草的最佳替代品。目前,蛹虫草在我国已经实现人工大规模种植,但克服蛹虫草菌株易退化的特性一直是其工业化生产中无法突破的技术瓶颈。随着分子生物学的快速发展,基因工程、CRISPR基因编辑等新技术的兴起,将为蛹虫草功能基因挖掘、菌株退化机制探索及菌种定向改良等研究提供新的途径。本研究采用倒置显微镜、扫描电子显微镜观察蛹虫草退化菌株与正常菌株菌丝的形态特征,并且分别用高效液相色谱（HPLC）、BODIPY脂滴染色、荧光定量PCR测定蛹虫草退化菌株与正常菌株中腺苷与虫草素含量、脂质含量、细胞自噬相关基因的表达水平。结果表明,蛹虫草退化菌株的菌丝体分枝多、畸形,呈弯曲的不规则状;退化菌株的菌丝中腺苷含量比正常菌株的低30.23%,两者发酵液中的腺苷含量无差异,但在退化菌株的菌丝和发酵液中均未检测到虫草素;BODIPY染色后,退化菌株的荧光亮度明显低于正常菌株;细胞自噬相关基因Atg13、Atg18、Atg22、Atg22-2表达量在退化菌株中呈上升表达,退化菌株比正常菌株分别上升了432.19%... 

【文章来源】：长春工业大学吉林省

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

蛹虫草形态特征

第2章蛹虫草退化菌株的生理生化特征11第2章蛹虫草退化菌株的生理生化特征2.1材料与仪器2.1.1供试菌株本研究使用了蛹虫草（C.militaris）正常菌株Norm3和退化菌株Dene3，其中Dene3是通过Norm3连续传20代，每代生长21d后获得的菌株（图2.1C）。Dene3通过注射入蚕蛹进行复壮，已不能生长出子座（图2.2A），证明该菌株已退化且该退化不可逆。Dene3与Norm3均为上海市农业科学院食用菌研究所获得且保存菌株。图2.1菌丝传代培养A：正常菌株Norm3；B：第10代菌株；C：退化菌株Dene3Fig.2.1HyphalsubcultureA:normalstrainNorm3;B:the10thpassageofNorm3;C:degradedstrainDene3图2.2注射蚕蛹出菇对比A：退化菌株Dene3；B：正常菌株Norm3Fig.2.2FruitingafterinjectionintosilkwormcocoonsA:degradedstrainDene3;B:normalstrainNorm3

第2章蛹虫草退化菌株的生理生化特征11第2章蛹虫草退化菌株的生理生化特征2.1材料与仪器2.1.1供试菌株本研究使用了蛹虫草（C.militaris）正常菌株Norm3和退化菌株Dene3，其中Dene3是通过Norm3连续传20代，每代生长21d后获得的菌株（图2.1C）。Dene3通过注射入蚕蛹进行复壮，已不能生长出子座（图2.2A），证明该菌株已退化且该退化不可逆。Dene3与Norm3均为上海市农业科学院食用菌研究所获得且保存菌株。图2.1菌丝传代培养A：正常菌株Norm3；B：第10代菌株；C：退化菌株Dene3Fig.2.1HyphalsubcultureA:normalstrainNorm3;B:the10thpassageofNorm3;C:degradedstrainDene3图2.2注射蚕蛹出菇对比A：退化菌株Dene3；B：正常菌株Norm3Fig.2.2FruitingafterinjectionintosilkwormcocoonsA:degradedstrainDene3;B:normalstrainNorm3


本文编号：3000640