两个hpal x 基因转化短短芽孢杆菌（Brevibacillus brevs）HAB-5菌株及其转化子功能的初步研究
发布时间：2021-01-31 20:56
HAB-5菌株是本实验室从棉花土壤根际中分离得到的一株短短芽孢杆菌（Brevibacillus brevis）,具有广谱的抑菌效果。hpalxoo和hpaXm基因分别来自水稻白叶枯病菌（Xanthomonas oryzae pv. oryzae）和棉花角斑病菌（X. citri subsp. Malvacearum nov.comb. nov. nom. nov.）,编码抗病激活蛋白harpinX,本研究利用化学方法将hpalxoo和hpaXm基因分别转化至野生型HAB-5菌株中,以期能实现harpin蛋白在短短芽孢杆菌内的高效表达,构建更高效稳定的生防菌株,为新型生物农药的开发和利用奠定基础。具体研究结果如下：1.将hpalxoo及hpaXm基因转化HAB-5菌株,48h后在Amp抗性平板上得到了阳性转化子,其中,共获得转入hpalxoo的转化子有581个,转入hpaXm的转化子有650个。经PCR和PCR Southern Blot研究证实,目的基因hpaXm和hpalxoo已插入转化子中。2.在LB培养基平板上培养72h后,发现转化子菌株菌落形态均发生了一定程度上的改变。经对峙培...
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
目录
一、引言
1. hrp基因及其编码的harpin蛋白
1.1 hrp基因和harpin蛋白
1.2 Harpin蛋白在植物上的功能
1.2.1 诱导植物抗病
1.2.2 促进植物生长发育和诱导植物抗虫
1.2.3 诱导植株耐旱
1.3 Harpin激发防卫反应
1.3.1 过敏性反应（HR）
1.3.2 氧爆发
1.3.3 其他防卫反应
1.4 Harpin蛋白的表达系统
2. 短短芽孢杆菌及其遗传改良
2.1 短短芽孢杆菌的生物特性
2.2 短短芽孢杆菌的抑菌作用及其机制
2.2.1 对病原菌的抑制作用
2.2.2 短短芽孢杆菌的抑菌作用机制
2.3 短短芽孢杆菌的抗菌物质
2.3.1 短杆菌肽
2.3.2 短杆菌酪肽
2.3.3 其它抗菌物质
2.4 短短芽孢杆菌在国内外的研究及其应用
2.4.1 对植物的促生作用
2.4.2 保鲜作用
2.4.3 微生物降解
2.4.4 其他方面
2.4.5 短短芽孢杆菌的防病作用
2.5 短短芽孢杆菌的遗传改良
2.5.1 短短芽孢杆菌表达系统
2.5.2 芽孢杆菌的转化方法
3. 生长素的极性运输抑制剂（TIBA）
4. 本研究意义
二、材料与方法
1. 材料
1.1 供试菌株
1.2 供试菌株材料
1.3 培养基
1.4 主要试剂
2. 方法
2.1 质粒提取
Xoo及hpaXm基因转入HAB-5菌株"> 2.2 hpa1Xoo及hpaXm基因转入HAB-5菌株
2.3 引物设计与合成
2.4 目的基因的PCR验证
2.5 切胶回收
2.6 克隆转化及测序
2.7 HAB-5及其转化子菌株菌落形态和对C7-2菌株的平板拮抗作用测定
2.7.1 菌株菌落形态观察
2.7.2 对芒果炭疽菌C7-2菌株的平板拮抗作用
2.8 粗蛋白的提取方法
2.9 SDS-PAGE电泳
2.10 烟草过敏性反应（HR）
2.11 转化子粗蛋白特性的研究
2.11.1 转化子粗蛋白热稳定性测定
2.11.2 转化子粗蛋白耐酸碱性测定
2.11.3 转化子粗蛋白对胰蛋白酶和蛋白酶K稳定性的测定
2.11.4 转化子粗蛋白紫外线敏感性测定
2.12 菌悬液和发酵液的配置
2.13 短短芽孢杆菌HAB-5及其转化子菌株对番茄种子的促生作用测定
2.13.1 对番茄种子的促生作用
2.13.2 TIBA对抑制番茄种子生长的逆转作用
2.14 对芒果炭疽离体叶片的拮抗效果
2.15 PCR Southern Blot
2.15.1 目的基因的PCR
2.15.2 探针制备方法
2.15.3 试剂配制
2.15.4 洗胶和转膜
2.15.5 预杂交和杂交
2.15.6 洗膜和显色
三、结果与分析
1. 转化子菌株的筛选及PCR验证
2. PCR Southern Blot验证
2.1 目的基因的PCR扩增
2.2 探针的制备和标记
2.3 PCR Southern Blot
3. 菌落形态对比
4. 转化子对炭疽病菌株C7-2拮抗作用
5. 转化子harpin蛋白的表达
6. 转化子粗蛋白能激发烟草产生过敏性反应并具有harpin蛋白的特性
7. HAB-5及其代表性转化子菌株菌悬液对番茄种子的促生效果
8. HAB-5及其代表性转化子菌株菌悬液对芒果炭疽离体叶片的拮抗作用
9. HAB-5及其代表性转化子菌株发酵液对番茄种子的促生作用
10. HAB-5及其代表性转化子菌株发酵液对芒果炭疽离体叶片的拮抗效果
11. TIBA对抑制番茄种子生长的逆转作用
11.1 TIBA对HAB-5菌悬液抑制番茄种子生长的逆转作用
11.2 TIBA对HAB-5发酵液抑制番茄种子生长的逆转作用
四、讨论
五、结论
六、创新点
七、参考文献
已发表论文
课题来源
致谢
本文编号：3011561
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
目录
一、引言
1. hrp基因及其编码的harpin蛋白
1.1 hrp基因和harpin蛋白
1.2 Harpin蛋白在植物上的功能
1.2.1 诱导植物抗病
1.2.2 促进植物生长发育和诱导植物抗虫
1.2.3 诱导植株耐旱
1.3 Harpin激发防卫反应
1.3.1 过敏性反应（HR）
1.3.2 氧爆发
1.3.3 其他防卫反应
1.4 Harpin蛋白的表达系统
2. 短短芽孢杆菌及其遗传改良
2.1 短短芽孢杆菌的生物特性
2.2 短短芽孢杆菌的抑菌作用及其机制
2.2.1 对病原菌的抑制作用
2.2.2 短短芽孢杆菌的抑菌作用机制
2.3 短短芽孢杆菌的抗菌物质
2.3.1 短杆菌肽
2.3.2 短杆菌酪肽
2.3.3 其它抗菌物质
2.4 短短芽孢杆菌在国内外的研究及其应用
2.4.1 对植物的促生作用
2.4.2 保鲜作用
2.4.3 微生物降解
2.4.4 其他方面
2.4.5 短短芽孢杆菌的防病作用
2.5 短短芽孢杆菌的遗传改良
2.5.1 短短芽孢杆菌表达系统
2.5.2 芽孢杆菌的转化方法
3. 生长素的极性运输抑制剂（TIBA）
4. 本研究意义
二、材料与方法
1. 材料
1.1 供试菌株
1.2 供试菌株材料
1.3 培养基
1.4 主要试剂
2. 方法
2.1 质粒提取
Xoo及hpaXm基因转入HAB-5菌株"> 2.2 hpa1Xoo及hpaXm基因转入HAB-5菌株
2.3 引物设计与合成
2.4 目的基因的PCR验证
2.5 切胶回收
2.6 克隆转化及测序
2.7 HAB-5及其转化子菌株菌落形态和对C7-2菌株的平板拮抗作用测定
2.7.1 菌株菌落形态观察
2.7.2 对芒果炭疽菌C7-2菌株的平板拮抗作用
2.8 粗蛋白的提取方法
2.9 SDS-PAGE电泳
2.10 烟草过敏性反应（HR）
2.11 转化子粗蛋白特性的研究
2.11.1 转化子粗蛋白热稳定性测定
2.11.2 转化子粗蛋白耐酸碱性测定
2.11.3 转化子粗蛋白对胰蛋白酶和蛋白酶K稳定性的测定
2.11.4 转化子粗蛋白紫外线敏感性测定
2.12 菌悬液和发酵液的配置
2.13 短短芽孢杆菌HAB-5及其转化子菌株对番茄种子的促生作用测定
2.13.1 对番茄种子的促生作用
2.13.2 TIBA对抑制番茄种子生长的逆转作用
2.14 对芒果炭疽离体叶片的拮抗效果
2.15 PCR Southern Blot
2.15.1 目的基因的PCR
2.15.2 探针制备方法
2.15.3 试剂配制
2.15.4 洗胶和转膜
2.15.5 预杂交和杂交
2.15.6 洗膜和显色
三、结果与分析
1. 转化子菌株的筛选及PCR验证
2. PCR Southern Blot验证
2.1 目的基因的PCR扩增
2.2 探针的制备和标记
2.3 PCR Southern Blot
3. 菌落形态对比
4. 转化子对炭疽病菌株C7-2拮抗作用
5. 转化子harpin蛋白的表达
6. 转化子粗蛋白能激发烟草产生过敏性反应并具有harpin蛋白的特性
7. HAB-5及其代表性转化子菌株菌悬液对番茄种子的促生效果
8. HAB-5及其代表性转化子菌株菌悬液对芒果炭疽离体叶片的拮抗作用
9. HAB-5及其代表性转化子菌株发酵液对番茄种子的促生作用
10. HAB-5及其代表性转化子菌株发酵液对芒果炭疽离体叶片的拮抗效果
11. TIBA对抑制番茄种子生长的逆转作用
11.1 TIBA对HAB-5菌悬液抑制番茄种子生长的逆转作用
11.2 TIBA对HAB-5发酵液抑制番茄种子生长的逆转作用
四、讨论
五、结论
六、创新点
七、参考文献
已发表论文
课题来源
致谢
本文编号：3011561
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/zaizhiyanjiusheng/3011561.html
教材专著
