TNF-α对体外培养仔猪睾丸支持细胞中Fas/FasL表达的调节
发布时间：2021-02-08 20:38
支持细胞（Sertoli cells,SCs）是维持睾丸免疫豁免功能的重要体细胞,主要通过形成血睾屏障（BTB）、高表达FasL、分泌免疫抑制因子（如TGF-β、IL-1、 IGF-Ⅱ等）来实现其免疫豁免功能。肿瘤坏死因子（TNF）属TNFSFL家族成员,包括TNF-α和TNF-β两种类型,睾丸中主要分泌的是TNF-α。TNF-α通过与SCs上的受体结合,影响SCs分泌功能,调节FSH诱导的SCs生精功能和SCs参与的BTB的开闭及SCs免疫调节因子的分泌,进而影响SCs的各种功能。但目前TNF-α是调节SCs中Fas/FasL系统的表达的机制还不完善。本研究的目的是探索TNF-α对SCs中Fas/FasL的表达的影响以及调节Fas/FasL表达的分子机制。本研究以体外培养的仔猪睾丸SCs为研究材料,用TNF-α处理培养的SCs,采用CCK-8细胞增殖检测试剂盒检测TNF-α对SCs增殖的影响,利用流式细胞术检测TNF-α对SCs周期进程的变化和细胞早期凋亡的影响；用Western blot和荧光定量PCR技术检测Fas/FasL、MMP-2/MMP-9和TIMP-2/TIMP-1蛋白...
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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【参考文献】：
期刊论文
[1]睾丸免疫豁免与天然免疫[J]. 朱伟伟,赵树涛,薛社普,韩代书. 科学通报. 2014(27)
[2]流行性腮腺炎合并睾丸炎的血清细胞因子水平分析[J]. 陈杰,张志丽,许维国,张玉林,梁连春,吴昊. 传染病信息. 2014(01)
[3]类风湿关节炎发生发展中TNF-α信号通路与CD4+T细胞的关系[J]. 黄蓓,汪庆童,刘亢亢,姜玲,魏伟. 中国药理学通报. 2013(07)
[4]TNF-α、MMP-2及NF-κB在人子宫肌瘤组织中的表达研究[J]. 张华,王纪元,王悦冰,朱颖军,林琬君,陈震. 天津医科大学学报. 2013(03)
[5]Increase of TNFα-stimulated Osteoarthritic Chondrocytes Apoptosis and Decrease of Matrix Metalloproteinases 9 by NF-κB Inhibition[J]. WANG Yan,LI De Ling,ZHANG Xin Bo,DUAN Yuan Hui,WU Zhi Hong,HAO Dong Sheng,CHEN Bao Sheng,QIU Gui Xing. Biomedical and Environmental Sciences. 2013(04)
[6]中药单体抗TNF-α介导的炎症反应机制研究进展[J]. 周林,杨慧,艾有生,周丽,傅颖珺. 南昌大学学报(医学版). 2013(03)
[7]基质金属蛋白酶-2的结构和功能[J]. 孙春凤,黄国平,陈克平. 安徽医科大学学报. 2013(03)
[8]炎症因子在大鼠脑缺血后MMP和TIMP-1致脑损伤中的作用[J]. 陈新云. 中山大学学报(医学科学版). 2013(02)
[9]长白猪肿瘤坏死因子α成熟肽基因克隆、表达及其表达产物活性检测[J]. 杨明凡,陈红英,张素梅,王彦彬,崔保安. 畜牧兽医学报. 2011(08)
[10]基质金属蛋白酶-2与脑血管畸形关系的研究[J]. 刘子科,林智敏,许海珍,兰周华,董广宇,吴春波,林锦波,杨亚敏,黄翔. 吉林医学. 2011(19)
博士论文
[1]TLR4信号通路抑制Sertoli细胞的吞噬能力[D]. 刘培培.北京协和医学院 2013
硕士论文
[1]奶牛乳腺上皮细胞原代培养及TNF-α对其凋亡影响的研究[D]. 吴娟.内蒙古农业大学 2009
本文编号：3024500
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１体外培养的ＳＣｓ??Ａ■培养第?１?天（ｘｌＯＯ）；?Ｂ．培养?２４ｈ?后（ｘｌＯＯ）；?Ｃ．培养?４８ｈ?后?ＯｌＯＯ）；??．ｘｘ．＞＜
Ｄ．ＳＣｓ?ａｆｔｅｒ?ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ?ｆｏｒ?３?ｄａｙｓ（＞＜１００），?Ｅ．ＳＣｓ?ａｆｔｅｒ?ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ?ｆｏｒ?４?ｄａｙｓ（＞＾１００），Ｆ．ＳＣｓ?ａｆｔｅｒ?ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ?ｆｏｒ?３?ｄａｙｓ（＾２００）??２总ＲＮＡ完整性检测??从图２可以清楚地看出总ＲＮＡ电泳所得２８Ｓ、１８Ｓ条带，其中２８Ｓ的亮度为１８Ｓ的??２倍，５Ｓ比较弥散、模糊，不易看清楚。同时检测所得样品的ＯＤ值，ＯＤ２６（）／ＯＤ２８Ｏ??在１．８？２．０之间，表明ＲＮＡ的纯度较高，可用于下一步的分析。??３３??
Ｆｉｇ．２?Ｄｅｌｅｃｔｉｎｇ?ｔｈｅ?ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ??３劳光定量ＰＣＲ矿增曲线和溶解曲线??从图３Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、Ｉ、Ｋ可以看出，基因的扩增曲线为“Ｓ’’型的光滑曲线，??且在基线期，基线平稳，说明干扰信号很小；ＡＣＴＢ起跳的循环数为１５？２５，满??足作为内参的条件。??从图３Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｊ、Ｌ可以看出，各基因的溶解曲线中均出现单一峰，说??明无非特异性扩增产物，定量准确。??Ａｍｐｌｆ?ｃａｔｉｏｎ?Ｍ？？Ｐ？ａｆｃ??■＇ｉ?：?．Ｊ?＇Ｋ—‘一１??ｍ，，．?一二－?：力〕?ＡＣＴＢ???２?：?ＡＣｌ＇Ｂ?／?Ｆａｓ?％Ｉ?ｆｆｆｙｋ＾?Ｆａｓ??“＂“．．?—?——－Ｉ?１?－?＾?■?＼?丨?？?Ｉ?Ｉ?＊?ｆ?＜?？?＞?Ｉ?１?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?ｔ?Ｉ?ｔ?Ｉ?，？１，１１?Ｉ?Ｉ??０?ｌ．＿?．．ＩＩ?４ｒ．＜?Ｋ?７０?７５?ＤＯ?ＣＳ?如?３９??丨?ｅｍｕ＊??Ａ?Ｂ??Ｉ?Ｍｄｌ??‘丨丨ｎ；??■？Ｉ?Ｉ?．Ｍｌ?４＜ｉ?ｆ?ｆ?Ｉ．！．：．?ｎ？??Ｃ、ｄ，ｋ?Ｔｔｉ?ｉｊｗｉｌｉｉｉｆ
【参考文献】：
期刊论文
[1]睾丸免疫豁免与天然免疫[J]. 朱伟伟,赵树涛,薛社普,韩代书. 科学通报. 2014(27)
[2]流行性腮腺炎合并睾丸炎的血清细胞因子水平分析[J]. 陈杰,张志丽,许维国,张玉林,梁连春,吴昊. 传染病信息. 2014(01)
[3]类风湿关节炎发生发展中TNF-α信号通路与CD4+T细胞的关系[J]. 黄蓓,汪庆童,刘亢亢,姜玲,魏伟. 中国药理学通报. 2013(07)
[4]TNF-α、MMP-2及NF-κB在人子宫肌瘤组织中的表达研究[J]. 张华,王纪元,王悦冰,朱颖军,林琬君,陈震. 天津医科大学学报. 2013(03)
[5]Increase of TNFα-stimulated Osteoarthritic Chondrocytes Apoptosis and Decrease of Matrix Metalloproteinases 9 by NF-κB Inhibition[J]. WANG Yan,LI De Ling,ZHANG Xin Bo,DUAN Yuan Hui,WU Zhi Hong,HAO Dong Sheng,CHEN Bao Sheng,QIU Gui Xing. Biomedical and Environmental Sciences. 2013(04)
[6]中药单体抗TNF-α介导的炎症反应机制研究进展[J]. 周林,杨慧,艾有生,周丽,傅颖珺. 南昌大学学报(医学版). 2013(03)
[7]基质金属蛋白酶-2的结构和功能[J]. 孙春凤,黄国平,陈克平. 安徽医科大学学报. 2013(03)
[8]炎症因子在大鼠脑缺血后MMP和TIMP-1致脑损伤中的作用[J]. 陈新云. 中山大学学报(医学科学版). 2013(02)
[9]长白猪肿瘤坏死因子α成熟肽基因克隆、表达及其表达产物活性检测[J]. 杨明凡,陈红英,张素梅,王彦彬,崔保安. 畜牧兽医学报. 2011(08)
[10]基质金属蛋白酶-2与脑血管畸形关系的研究[J]. 刘子科,林智敏,许海珍,兰周华,董广宇,吴春波,林锦波,杨亚敏,黄翔. 吉林医学. 2011(19)
博士论文
[1]TLR4信号通路抑制Sertoli细胞的吞噬能力[D]. 刘培培.北京协和医学院 2013
硕士论文
[1]奶牛乳腺上皮细胞原代培养及TNF-α对其凋亡影响的研究[D]. 吴娟.内蒙古农业大学 2009
本文编号：3024500
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