鸭HMGB2在宿主抗鸭瘟病毒感染先天性免疫中的作用研究
发布时间：2021-03-01 17:02
鸭、鹅等水禽均为我国主要的养殖禽类,占全世界总量的75.0%。但是,鸭的病毒病对我国养鸭业造成严重的危害,并引发一系列公共卫生安全问题。高迁移率族蛋白B2（HMGB2）是一种高度保守的核蛋白,广泛存在于哺乳动物细胞中,其表达水平能发挥促炎作用,成为近年来危重医学研究的热点。HMGB2有黏性能并且和细胞表面相异的分子进行结合,是一个具有高亲和力受体。HMGB2在病毒核酸诱导的先天性免疫反应中能发挥哨兵作用,但是如细胞中无HMGB2,细胞是否被病毒感染缺乏统一的标准。所以,本研究进而系统的对鸭HMGB2（duHMGB2）在宿主抗鸭瘟病毒感染先天性免疫中的作用进行了研究,内容主要分为三个部分:第一部分duHMGB2基因的扩增与序列分析根据预测的duHMGB2的基因序列设计鉴定引物,然后再提取樱桃谷肉鸭的脾脏组织RNA,通过反转录得到相应的cDNA模板,最后使用特异性引物（duHMGB2-F1/R1）通过扩增从而得到所需要的目的片段,然后通过测序后得到蛋白质编码区（CDs）由624bp组成,编码207个氨基酸,其分子量约为24kDa。根据系统进化树的结果发现,本研究克隆的duHMGB2序列与原...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HMGB2在健康鸭组织中的表达
山东农业大学硕士专业学位论文21图3鸭组织中病毒感染检测结果比果。使用2-ΔΔCT方法以GAPDH作为内参基因并且以平均对照值作为基线参考来计算基因表达的倍数变化。数据表示为三个实验的平均值±SE。Fig.3comparisonofresultsofvirusinfectiondetectioninducktissues.Fold-changesingeneexpressionwerecalculatedusingthe2-ΔΔCTmethodwithGAPDHservingasanormalizationgeneandmeancontrolvaluesasbaselinereference.Dataarerepresentedasthemeanvalue±SEofthreeexperiments.3.4duHMGB2转染DEF细胞后的WesternBlot检测结果比较将重组质粒转染到DEF细胞24hpi后，收集细胞进行WesternBlot检测。实验结果如图4所示，目的条带约为25kDa符合预期大小，这表明：重组真核表达质粒pcDNA3.0（+）-duHMGB2-Flag能在DEF中成功表达。图4HMGB2转染DEF后的WesternBlot检测结果比较。duhmgb-2重组质粒在25kDa出现条带Figure4ComparisonofWesternBlottestresμLtsafterHMGB2transfectionwithDEF.Thebandsofduhmgb-2recombinantplasmidappearedat25kDa3.5双荧光素酶报告基因检测系统检测结果将pcDNA3.0（+）-duHMGB2-Flag（500ng/孔）与100ng/孔的报告质粒（pGL3-NF-κB与pGL3-IRF7）与50ng/孔pRL-TK质粒共同转染DEF细胞；48hpt时收集细胞样品并测量荧光素酶活性，结果表明：duHMGB2转染DEF细胞后NF-κB启动子活性高于对照组细胞5.68倍（P<0.05）；而IRF-7启动子活性实验组与对照组相比没有明显变化。这表明duHMGB2过表达可能激活NF-κB信号通路。见图5。
山东农业大学硕士专业学位论文21图3鸭组织中病毒感染检测结果比果。使用2-ΔΔCT方法以GAPDH作为内参基因并且以平均对照值作为基线参考来计算基因表达的倍数变化。数据表示为三个实验的平均值±SE。Fig.3comparisonofresultsofvirusinfectiondetectioninducktissues.Fold-changesingeneexpressionwerecalculatedusingthe2-ΔΔCTmethodwithGAPDHservingasanormalizationgeneandmeancontrolvaluesasbaselinereference.Dataarerepresentedasthemeanvalue±SEofthreeexperiments.3.4duHMGB2转染DEF细胞后的WesternBlot检测结果比较将重组质粒转染到DEF细胞24hpi后，收集细胞进行WesternBlot检测。实验结果如图4所示，目的条带约为25kDa符合预期大小，这表明：重组真核表达质粒pcDNA3.0（+）-duHMGB2-Flag能在DEF中成功表达。图4HMGB2转染DEF后的WesternBlot检测结果比较。duhmgb-2重组质粒在25kDa出现条带Figure4ComparisonofWesternBlottestresμLtsafterHMGB2transfectionwithDEF.Thebandsofduhmgb-2recombinantplasmidappearedat25kDa3.5双荧光素酶报告基因检测系统检测结果将pcDNA3.0（+）-duHMGB2-Flag（500ng/孔）与100ng/孔的报告质粒（pGL3-NF-κB与pGL3-IRF7）与50ng/孔pRL-TK质粒共同转染DEF细胞；48hpt时收集细胞样品并测量荧光素酶活性，结果表明：duHMGB2转染DEF细胞后NF-κB启动子活性高于对照组细胞5.68倍（P<0.05）；而IRF-7启动子活性实验组与对照组相比没有明显变化。这表明duHMGB2过表达可能激活NF-κB信号通路。见图5。
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸭瘟病毒感染的诊断与病毒分离鉴定[J]. 李小伦. 中国动物保健. 2018(01)
[2]高迁移率族蛋白HMGB2的细胞内定位及移位研究[J]. 王娟,刘铮,徐佳,张秀娟,伍丽琼,邓鹏,姜勇. 解放军医学杂志. 2009(04)
[3]高迁移率族蛋白与真核基因表达调控[J]. 徐佳,刘志锋,姜勇. 生物化学与生物物理进展. 2005(05)
[4]鸭瘟病毒的研究[J]. 黄引贤,欧守杼,邝荣禄,林维庆. 华南农学院学报. 1980(01)
博士论文
[1]鸭瘟病毒中国强毒株基因组解析及UL55基因功能初步研究[D]. 吴英.四川农业大学 2015
硕士论文
[1]鸭半乳糖凝集素-1在宿主抗鸭瘟病毒感染中的作用研究[D]. 韩少杰.山东农业大学 2019
[2]鸭瘟病毒SDWF株的分离鉴定及致病性研究[D]. 张坤.山东农业大学 2012
本文编号：3057767
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HMGB2在健康鸭组织中的表达
山东农业大学硕士专业学位论文21图3鸭组织中病毒感染检测结果比果。使用2-ΔΔCT方法以GAPDH作为内参基因并且以平均对照值作为基线参考来计算基因表达的倍数变化。数据表示为三个实验的平均值±SE。Fig.3comparisonofresultsofvirusinfectiondetectioninducktissues.Fold-changesingeneexpressionwerecalculatedusingthe2-ΔΔCTmethodwithGAPDHservingasanormalizationgeneandmeancontrolvaluesasbaselinereference.Dataarerepresentedasthemeanvalue±SEofthreeexperiments.3.4duHMGB2转染DEF细胞后的WesternBlot检测结果比较将重组质粒转染到DEF细胞24hpi后，收集细胞进行WesternBlot检测。实验结果如图4所示，目的条带约为25kDa符合预期大小，这表明：重组真核表达质粒pcDNA3.0（+）-duHMGB2-Flag能在DEF中成功表达。图4HMGB2转染DEF后的WesternBlot检测结果比较。duhmgb-2重组质粒在25kDa出现条带Figure4ComparisonofWesternBlottestresμLtsafterHMGB2transfectionwithDEF.Thebandsofduhmgb-2recombinantplasmidappearedat25kDa3.5双荧光素酶报告基因检测系统检测结果将pcDNA3.0（+）-duHMGB2-Flag（500ng/孔）与100ng/孔的报告质粒（pGL3-NF-κB与pGL3-IRF7）与50ng/孔pRL-TK质粒共同转染DEF细胞；48hpt时收集细胞样品并测量荧光素酶活性，结果表明：duHMGB2转染DEF细胞后NF-κB启动子活性高于对照组细胞5.68倍（P<0.05）；而IRF-7启动子活性实验组与对照组相比没有明显变化。这表明duHMGB2过表达可能激活NF-κB信号通路。见图5。
山东农业大学硕士专业学位论文21图3鸭组织中病毒感染检测结果比果。使用2-ΔΔCT方法以GAPDH作为内参基因并且以平均对照值作为基线参考来计算基因表达的倍数变化。数据表示为三个实验的平均值±SE。Fig.3comparisonofresultsofvirusinfectiondetectioninducktissues.Fold-changesingeneexpressionwerecalculatedusingthe2-ΔΔCTmethodwithGAPDHservingasanormalizationgeneandmeancontrolvaluesasbaselinereference.Dataarerepresentedasthemeanvalue±SEofthreeexperiments.3.4duHMGB2转染DEF细胞后的WesternBlot检测结果比较将重组质粒转染到DEF细胞24hpi后，收集细胞进行WesternBlot检测。实验结果如图4所示，目的条带约为25kDa符合预期大小，这表明：重组真核表达质粒pcDNA3.0（+）-duHMGB2-Flag能在DEF中成功表达。图4HMGB2转染DEF后的WesternBlot检测结果比较。duhmgb-2重组质粒在25kDa出现条带Figure4ComparisonofWesternBlottestresμLtsafterHMGB2transfectionwithDEF.Thebandsofduhmgb-2recombinantplasmidappearedat25kDa3.5双荧光素酶报告基因检测系统检测结果将pcDNA3.0（+）-duHMGB2-Flag（500ng/孔）与100ng/孔的报告质粒（pGL3-NF-κB与pGL3-IRF7）与50ng/孔pRL-TK质粒共同转染DEF细胞；48hpt时收集细胞样品并测量荧光素酶活性，结果表明：duHMGB2转染DEF细胞后NF-κB启动子活性高于对照组细胞5.68倍（P<0.05）；而IRF-7启动子活性实验组与对照组相比没有明显变化。这表明duHMGB2过表达可能激活NF-κB信号通路。见图5。
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸭瘟病毒感染的诊断与病毒分离鉴定[J]. 李小伦. 中国动物保健. 2018(01)
[2]高迁移率族蛋白HMGB2的细胞内定位及移位研究[J]. 王娟,刘铮,徐佳,张秀娟,伍丽琼,邓鹏,姜勇. 解放军医学杂志. 2009(04)
[3]高迁移率族蛋白与真核基因表达调控[J]. 徐佳,刘志锋,姜勇. 生物化学与生物物理进展. 2005(05)
[4]鸭瘟病毒的研究[J]. 黄引贤,欧守杼,邝荣禄,林维庆. 华南农学院学报. 1980(01)
博士论文
[1]鸭瘟病毒中国强毒株基因组解析及UL55基因功能初步研究[D]. 吴英.四川农业大学 2015
硕士论文
[1]鸭半乳糖凝集素-1在宿主抗鸭瘟病毒感染中的作用研究[D]. 韩少杰.山东农业大学 2019
[2]鸭瘟病毒SDWF株的分离鉴定及致病性研究[D]. 张坤.山东农业大学 2012
本文编号：3057767
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