MP1基因在辽宁绒山羊皮肤的表达研究

发布时间：2017-04-19 17:16

  本文关键词：MP1基因在辽宁绒山羊皮肤的表达研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：辽宁绒山羊是我国特有的品种,并且是禁止基因外流的宝贵资源,其羊绒产量居全国首位,因此,研究与羊绒相关基因的功能就更具实际生产意义。前期,我们实验室通过建库、测通获得了辽宁绒山羊的新基因MP1(MEK Partner 1)的全长序列,首先对MP1基因进行生物信息学分析,检测其核酸及氨基酸的同源性,建立进化树等。然后通过RT-PCR检测MP1基因在各组织中的表达,再利用qPCR方法检测其在毛囊生长的不同时期的初、次级毛囊中的表达含量,最后对绒山羊兴盛期皮肤进行原位杂交并对其进行表达位点分析。为进一步研究MP1基因是否与羊绒细度之间存在某种关系,利用本实验室已有的Noggin基因RNA干扰的慢病毒,感染辽宁绒山羊皮肤细胞后,再利用qPCR检测其对MP1基因表达的影响,为培育出具有优良经济性状的绒山羊提供一定的分子理论基础。结果如下:(1)MP1基因编码的蛋白质包含124个氨基酸,分子量为13.64 KD,是一个疏水性蛋白。MP1含有α螺旋结构(25.81%)、延伸链结构(33.87%)和无规卷曲(40.32%)。无跨膜结构域,无信号肽。MPl的氨基酸序列包含一个保守的MAPKKl-Int结构域,含有有3个可能成为磷酸化位点的Ser。RT-PCR检测结果显示:仅在皮肤、心脏中MP1基因有表达,而在肝、肾、肺、脾中未发现其表达。qPCR检测毛囊在兴盛期时,MP1基因在次级毛囊的表达量为初级毛囊的1.65倍,退行期MP1基因在次级毛囊的表达量为初级毛囊的3.25倍。原位杂交分析发现:MP1在内根鞘上有明显的表达,在毛干、外根鞘以及毛囊乳突中无表达。(2)成功构建出Noggin基因RNAi的慢病毒载体,Noggin基因被干扰后,qPCR检测发现MP1基因起负调控作用,MP1基因的相对表达量出现上调的趋势。由以上结果可以得出以下结论:(1)通过对MP1基因在生物信息学,荧光定量以及原位杂交等方面的研究,推测MP1对绒山羊皮肤细胞的生长发育产生影响,可能与毛囊的生成及再上皮化过程有关,且并具有能够使羊毛变细的作用。(2)推测MP1基因可能存在于Noggin基因表达调控的下游,并通过其与Noggin基因之间存在的某种关系,实现BMP-MAPK途径共同作用来调节绒山羊的表皮及毛囊的的稳态和发育过程。
【关键词】：辽宁绒山羊 MP1 荧光定量 原位杂交 RNAi 慢病毒
【学位授予单位】：辽宁师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S827
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-9
• 引言9
• 1 实验背景介绍9-15
• 1.1 辽宁绒山羊9
• 1.2 MP1基因及其研究进展9-11
• 1.2.1 MAPK信号通路及支架蛋白9-10
• 1.2.2 MP1基因10-11
• 1.3 RNA干扰技术11-12
• 1.3.1 RNA干扰的发现11-12
• 1.3.2 RNAi的作用机制12
• 1.3.3 RNAi载体的选择与应用12
• 1.3.4 RNAi的应用12
• 1.4 研究的目的及意义12-13
• 1.5 研究技术路线13-14
• 1.6 本研究项目的特色与创新14-15
• 1.6.1 特色14
• 1.6.2 创新14-15
• 2 MP1基因在毛囊生长不同时期的表达分析15-35
• 2.1 实验材料及样本采集15-16
• 2.1.1 主要实验仪器设备15
• 2.1.2 主要实验试剂及耗材15
• 2.1.3 样本的采集15-16
• 2.2 实验方法16-22
• 2.2.1 MP1基因全长测通16
• 2.2.2 生物信息学分析16-17
• 2.2.3 初、次级毛囊的分离17
• 2.2.4 初次级毛囊总RNA的提取17-18
• 2.2.5 总RNA的检测18
• 2.2.6 RNA反转录成cDNA18-19
• 2.2.7 RT-PCR检测19-20
• 2.2.8 qPCR检测20
• 2.2.9 原位杂交20-22
• 2.3 结果22-33
• 2.3.1 MP1基因的生物信息学分析22-30
• 2.3.2 RNA提取30-31
• 2.3.3 qPCR31-32
• 2.3.4 原位杂交32-33
• 2.4 讨论33-35
• 3 慢病毒感染后MP1基因的表达研究35-43
• 3.1 实验材料35
• 3.1.1 实验所用细胞及病毒液35
• 3.1.2 主要试剂、仪器与耗材35
• 3.2 实验方法35-38
• 3.2.1 辽宁绒山羊的原代皮肤细胞培养35
• 3.2.2 Noggin基因干扰慢病毒及阴性病毒感染羊皮肤细胞35-36
• 3.2.3 提取病毒感染后的细胞中的总RNA36
• 3.2.4 RNA反转录成cDNA36
• 3.2.5 Lenti-EGFP-Noggin-miR慢病毒感染羊皮肤细胞后MP1基因的qPCR检测36-38
• 3.3 结果38-41
• 3.3.1 感染病毒前，正常皮肤细胞的镜检照片38
• 3.3.2 慢病毒感染靶细胞（感染48小时后）38-39
• 3.3.3 RNA抽提电泳图39-40
• 3.3.4 Lenti- Noggin-EGFP-miR慢病毒感染羊皮肤细胞后MP1基因的qPCR检测40-41
• 3.4 讨论41-43
• 4 注意事项43-44
• 结论44-45
• 参考文献45-49
• 附录A MP1基因的开放阅读框49-50
• 附录B MP1基因在各个时期初次级毛囊中荧光定量的扩增曲线及溶解曲线50-53
• 附录C 病毒液感染后qPCR检测的各组扩增曲线及溶解曲线53-54
• 攻读硕士期间发表论文与获奖情况54-55
• 致谢55

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王世权;辽宁绒山羊[J];北京农业;2001年08期

2 魏窦兴;辽宁绒山羊在莫河地区生长发育观察[J];中国草食动物;2001年02期

3 姜怀志,马宁;辽宁绒山羊的生态环境、生态特征及开发利用[J];中国草食动物;2001年S1期

4 姜怀志,王淑萍,马宁;辽宁绒山羊的生态环境、生态特征及开发利用[J];家畜生态;2001年01期

5 王世权;辽宁绒山羊[J];新农业;2001年03期

6 田翠珍,张显柱,吕赫,滕远;辽宁绒山羊季节性舍饲的可行性研究[J];中国草食动物;2002年05期

7 王春景,李长存,韩存魁;辽宁绒山羊改良化隆山羊的效果调查[J];辽宁畜牧兽医;2002年02期

8 张世伟,宋先忱,王世权;辽宁绒山羊舍饲及半舍饲效果的调查报告[J];辽宁畜牧兽医;2002年03期

9 刘胜华,史良;辽宁绒山羊育种管理系统的设计[J];辽宁畜牧兽医;2002年04期

10 孔繁臣,耿秀露;辽宁绒山羊繁育体系模式探讨[J];辽宁畜牧兽医;2003年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 杨文凯;;提高辽宁绒山羊育肥经济效益的措施简述[A];2010中国羊业进展[C];2010年

2 王会东;;辽宁绒山羊产业集群发展研究[A];《2008中国羊业进展》论文集[C];2008年

3 郭维春;;对辽宁绒山羊种质资源利用几个问题的思考[A];《2008中国羊业进展》论文集[C];2008年

4 李丰田;宋宪忱;刘兴伟;;辽宁绒山羊舍饲技术规范[A];《2008中国羊业进展》论文集[C];2008年

5 赵艳娇;常青;姜怀志;;辽宁绒山羊胎儿发育初步研究[A];中国畜牧兽医学会养羊学分会2012年全国养羊生产与学术研讨会议论文集[C];2012年

6 姜雪梅;郭丹;姜怀志;;常年长绒型辽宁绒山羊纤维理化特性的研究[A];中国畜牧兽医学会养羊学分会2012年全国养羊生产与学术研讨会议论文集[C];2012年

7 姜怀志;宋先忱;张世伟;;辽宁绒山羊繁殖生物学特性[A];中国畜牧兽医学会养羊学分会全国养羊生产与学术研讨会议论文集[C];2010年

8 王春艳;郭丹;郑旭;高月;王家明;宋先忱;;辽宁绒山羊生理生化参数的测定与分析[A];2010中国羊业进展[C];2010年

9 姜怀志;韩迪;郭丹;张世伟;宋先忱;;辽宁绒山羊的若干种质特性[A];《2011中国羊业进展》论文集[C];2011年

10 张世伟;;辽宁绒山羊产业现状及前景[A];2005中国羊业进展——第二届中国羊业发展大会会刊[C];2005年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 焦宏;辽宁绒山羊助农牧民增收[N];中国畜牧兽医报;2008年

2 记者 张会斌;辽宁绒山羊引领“高效畜牧”[N];辽宁日报;2008年

3 辽宁省辽宁绒山羊育种中心 张世伟　王世权;正确评价辽宁绒山羊品种地位和改良作用[N];中国畜牧兽医报;2008年

4 焦宏;辽宁绒山羊改良低产山羊效果显著[N];中国畜牧兽医报;2008年

5 中国畜牧兽医学会养羊学分会名誉理事长、中国畜牧业协会羊业分会专家委员会主任 赵有璋;辽宁绒山羊——世界级优秀白绒山羊品种[N];中国畜牧兽医报;2008年

6 辽宁省畜牧科学研究院 张世伟　王世权 韩迪;创新联合育种制度 保障辽宁绒山羊保种选育[N];中国畜牧兽医报;2009年

7 辽宁省畜牧科学研究院 郭维春;关于辽宁绒山羊种质资源利用的思考[N];中国畜牧兽医报;2009年

8 记者 徐铁英;辽宁绒山羊单产创国内新高[N];辽宁日报;2011年

9 记者 王晓峰;辽宁绒山羊优质高产新品系项目启动[N];本溪日报;2011年

10 记者　郑有胜;辽阳打造辽宁绒山羊产业优势区[N];辽宁日报;2006年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 刘红亮;基于高通量测序的辽宁绒山羊转录组研究与应用[D];西北农林科技大学;2013年

2 张帆;辽宁绒山羊品种资源保护与利用研究[D];中国农业科学院;2013年

3 展微;辽宁绒山羊公羊精子发生与生精性能的研究[D];吉林农业大学;2015年

4 张丽丽;MP1基因在辽宁绒山羊皮肤的表达研究[D];辽宁师范大学;2015年

5 王瑞龙;辽宁绒山羊蛋白脂质蛋白质基因（PLP2）的表达研究[D];辽宁师范大学;2015年

6 刘海斌;蛋白水平对舍饲辽宁绒山羊生产性能及消化代谢的影响[D];吉林农业大学;2008年

7 董李学;辽宁绒山羊多胎候选基因的研究[D];河北农业大学;2010年

8 张曦;不同硫水平日粮对辽宁绒山羊生绒期消化代谢及产绒性能的影响[D];沈阳农业大学;2009年

9 邓宏炜;日粮添加无机硫对辽宁绒山羊消化代谢、血液指标及产绒性能的影响[D];沈阳农业大学;2011年

10 常青;辽宁绒山羊皮肤的发育过程及年周期变化规律的研究[D];吉林农业大学;2011年

  本文关键词：MP1基因在辽宁绒山羊皮肤的表达研究，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：316761