青岛文昌鱼铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆与表达研究

发布时间：2021-05-12 06:52

　　本文采用RT-PCR和RACE技术首次克隆了青岛文昌鱼铜锌超氧化物歧化酶基因的全长cDNA序列1285bp,该基因开放阅读框全长468bp,编码155个氨基酸,有7个可与铜锌离子结合的位点,预测分子量大约为15718.32Da,理论等电点为5.60,编码的蛋白质不存在亚细胞定位的信号肽和跨膜结构域,属于icCu/Zn-SOD。系统进化分析表明文昌鱼的icCu/Zn-SOD位于脊椎动物大分支和无脊椎动物大分支的中间,并且更偏向于脊椎动物。原位杂交实验表明,铜锌超氧化物歧化酶基因在文昌鱼的背神经周围、肝盲囊、性腺以及脊索中均有表达。在肝盲囊、背神经周围等部位表达较高,推测原因是因为这些组织是构成文昌鱼抗氧化免疫系统的重要部位,而铜锌超氧化物歧化酶又是生物体内参与抗氧化免疫反应最重要的酶类之一,因此该基因在这些部位的大量表达有助于文昌鱼抗氧化免疫反应的正常进行。采用相对实时定量PCR中的Ct法来检测不同Cu²⁺浓度的海水来饲养青岛文昌鱼其Cu/Zn-SOD基因的相对表达,结果显示在以0.01mg/L的浓度为基准,0.03mg/L时表达相对较高,随后表达量下降,0.07m... 

【文章来源】：鲁东大学山东省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
第一章 综述
    1.1 文昌鱼简介
    1.2 文昌鱼的发现，分布，种类以及生活习性
    1.3 研究背景以及研究结果
    1.4 超氧化物歧化酶的分类与分布
    1.5 SOD的作用机理
    1.6 SOD的功能
    1.7 SOD的起源与进化
    1.8 SOD的应用
    1.9 展望
第2章 青岛文昌鱼铜锌超氧化物歧化酶基因特征与遗传进化分析
    2.1 材料与方法
        2.1.1 实验材料
            2.1.1.1 主要试剂
            2.1.1.2 主要试剂盒
        2.1.2 实验方法
            2.1.2.1 总RNA的提取
            2.1.2.2 RNA反转录成cDNA
            2.1.2.3 目的片段及全序列的获取
    2.2 分析与讨论
        2.2.1 Cu/Zn-SOD基因序列分析
        2.2.2 Cu/Zn-SOD蛋白质的理化性质预测
        2.2.3 Cu/Zn-SOD氨基酸序列相似性分析
        2.2.4 Cu/Zn-SOD基因序列的系统进化分析
第3章 青岛文昌鱼铜锌超氧化物歧化酶基因的表达
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验步骤
            3.1.1.1 试剂的配置
            3.1.1.2 探针的合成
            3.1.1.3 文昌鱼石蜡切片的制作
            3.1.1.4 文昌鱼组织切片原位杂交
        3.1.2 实验结果
    3.2 分析与讨论：
第4章 不同Cu~(2+)浓度对青岛文昌鱼Cu/Zn-SOD基因表达的影响
    4.1 实验材料与方法
        4.1.1 实验材料
            4.1.1.1 主要试剂
            4.1.1.2 主要试剂盒
        4.1.2 实验方法
            4.1.2.1 总RNA的提取及cDNA的合成
            4.1.2.2 工作液的配制
            4.1.2.3 引物设计
    4.2 实验结果
    4.3 分析与讨论
第5章 总结与展望
参考文献
附录
作者简历



本文编号：3182953