海南岛油茶种质资源的分子鉴定及遗传多样性评价
发布时间：2021-10-12 05:53
油茶是中国重点发展的木本油料作物,海南岛是中国油茶资源分布最南缘地区,资源和产业发展特色明显。由于海南岛油茶资源研究与开发利用起步晚,国内外对该资源的系统评价尚未开展,关于海南岛油茶资源的分类问题仍无定论,这对海南岛特异油茶资源的保护与创新利用、海南特色油茶产业发展极为不利。同时,油茶组物种的分类和归并问题存在较大的分歧。此外,对包括海南岛油茶资源在内的国内越南油茶资源进行评价,以进一步明确海南岛油茶的资源特色,了解海南岛油茶资源的遗传多样性水平和遗传结构,为相关资源的创新利用和保护提供科学依据。因此,本研究对42个居群共867份油茶种质资源材料进行分子分析,基于ISSR和SRAP标记技术,分析山茶属油茶组普通油茶、越南油茶、小果油茶、高州油茶、陆川油茶,以及香花油茶的分类地位与亲缘关系,并对海南岛油茶种质资源资源进行分类鉴定;同时,基于SRAP标记评价海南岛油茶资源和中国越南油茶资源的遗传多样性,分析居群间的遗传结构和分化。主要研究结果如下:（1）以海南岛油茶基因组DNA为模板,采用单因素试验和正交试验相结合方法,建立海南岛油茶SRAP-PCR最优体系,即在20μL体系中包含:10×...
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：107 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
DNA琼脂糖凝胶电泳检测Fig.2-1AgarosegelelectrophoresisofgemomicDNA
海南大学硕士学位论文21图2-1DNA琼脂糖凝胶电泳检测Fig.2-1AgarosegelelectrophoresisofgemomicDNA2.2.2海南岛油茶SRAP-PCR单因素试验（1）模板DNA用量对SRAP-PCR扩增PCR反应中模板DNA用量是关键因素之一。不同用量DNA模板对海南岛油茶SRAP-PCR反应体系影响不大，本研究设置DNA用量梯度范围内均能扩增获得条带，且清晰度和背景深度差异较小（图2-2）。当模板DNA浓度大于60ng时，条带数量少且清晰度略低；当模板DNA浓度5~60ng时，条带清晰，带型保持一致。正交试验选用5~60ng模板DNA用量梯度水平。图2-2DNA模板用量和dNTPs浓度对SRAP-PCR反应体系的影响Fig.2-2EffectofconcentrationoftemplateDNAanddNTPsonSRAP-PCRreactionsystem注:M:100bpDNAMarker;1~10:1ng,5ng,20ng,40ng,60ng,80ng,100ng,120ng,160ng,200ng;11~20:0.025mmol/L,0.05mmol/L,0.1mmol/L,0.15mmol/L,0.2mmol/L,0.25mmol/L,0.375mmol/L,0.5mmol/L,0.75mmol/L,1.0mmol/LNote:M:100bpDNAMarker;1~10:1ng,5ng,20ng,40ng,60ng,80ng,100ng,120ng,160ng,200ng;11~20:0.025mmol/L,0.05mmol/L,0.1mmol/L,0.15mmol/L,0.2mmol/L,0.25mmol/L,0.375mmol/L,0.5mmol/L,0.75mmol/L,1.0mmol/L（2）dNTPs浓度对SRAP-PCR扩增PCR反应中dNTPs浓度影响扩增反应效率，浓度过低效率降低，条带数量减少、
跎伲?逦?纫菜嬷?档停?踔廖薹ü鄄斓健Ｒ虼耍??皇匝檠≡?.05~0.20mmol/LdNTPs浓度梯度水平。（3）TaqDNA聚合酶用量对SRAP-PCR扩增TaqDNA聚合酶用量对PCR反应的最终结果影响重大，过低浓度的TaqDNA聚合酶会导致产物数量减少，甚至无法扩增，而高浓度的聚合酶又会导致非特异性扩增。当TaqDNA聚合酶浓度为1U以下时，条带数量少且不清晰；TaqDNA聚合酶浓度为1U以上时，TaqDNA聚合酶浓度和产物扩增数量呈正相关；当TaqDNA聚合酶浓度为5U时，泳道10条带模糊(图2-3)。故正交试验选择1.5~4.0U的TaqDNA聚合酶浓度梯度水平。图2-3Taq酶浓度和和引物浓度对SRAP-PCR反应体系的影响Fig.2-3EffectofTaqDNApolymeraseandprimerconcentrationonSRAP-PCRreactionsystem注:M:100bpDNAMarker;1~10:0.05U,0.25U,0.5U,0.75U,1U,1.5U,2.0U,3.0U,4.0U,5.0U;11~20:0.025μmol/L,0.05μmol/L,0.1μmol/L,0.2μmol/L,0.4μmol/L,0.5μmol/L,0.6μmol/L,0.7μmol/L,0.9μmol/L,1.2μmol/LNote:M:100bpDNAMarker;1~10:0.05U,0.25U,0.5U,0.75U,1U,1.5U,2.0U,3.0U,4.0U,5.0U;11~20:0.025μmol/L,0.05μmol/L,0.1μmol/L,0.2μmol/L,0.4μmol/L,0.5μmol/L,0.6μmol/L,0.7μmol/L,0.9μmol/L,1.2μmol/L（4）引物浓度对SRAP-PCR扩增引物浓度处于0.20~0.60μmol/L时，泳道14至泳道17的条带清晰、稳定，带型一致；引物浓度低于0.20μmol/L时，泳道11至泳道13条带数量较少且不清晰；当引物浓度高于0.60μmol/L时，泳道18至泳道20扩增出的条带数量开始减少，清晰度也随之减弱(图2-3)。因此，本研究正交试验选择0.20~0.60μmol/L的引物浓度梯
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于EST-SSR标记的西双版纳苦茶资源遗传多样性分析[J]. 尚卫琼,李友勇,刘悦,段志芬,杨盛美,李慧,许燕,刘本英. 山西农业科学. 2020(02)
[2]红掌遗传多样性及亲缘关系的ISSR分析[J]. 户帅雅,李斌奇,陈孝丑,巫伟峰,张毅智,陈春,陈发兴. 福建农业学报. 2020(01)
[3]28份余甘子品种遗传多样性的ISSR分析及指纹图谱构建[J]. 邵雪花,刘牛,赖多,肖维强,匡石滋. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2020(08)
[4]朱顶红转录组SSR标记的开发与遗传多样性研究[J]. 黄宝华,蔡家珍,刘生财,林玉玲,徐小萍,赖钟雄. 闽南师范大学学报(自然科学版). 2019(04)
[5]应用FISH-AFLP技术分析105份樱桃种质资源的亲缘关系[J]. 陈新,徐丽,宗晓娟,王甲威,谭钺,朱东姿,魏海蓉,洪坡,刘庆忠. 山东农业科学. 2019(11)
[6]应用RAPD分析方法评估春黑麦品种的遗传多样性[J]. 李姗姗. 安徽农学通报. 2019(22)
[7]海南岛油茶种质资源遗传多样性的SRAP分析[J]. 陈宣,云勇,吴宇佳,戚华沙,杨立荣,陈加利,郑道君. 热带亚热带植物学报. 2019(06)
[8]世界四大木本油料发展现状[J]. 木沐. 中国林业产业. 2019(11)
[9]油茶种植现状及其高产栽培技术[J]. 陈光红,朱党元. 江西农业. 2019(20)
[10]海南6个主要产区山柚籽性状研究[J]. 赵阔,张琳,陈艳,邹易,王青松,高红日,张红建,郑联合. 农产品加工. 2019(19)
博士论文
[1]小果油茶种内类型划分、评价及亲缘关系研究[D]. 谢一青.中国林业科学研究院 2013
[2]广宁红花油茶种质特性与变异研究[D]. 孙佩光.北京林业大学 2012
[3]浙江红山茶遗传多样性分析及观赏价值评价[D]. 谢云.中国林业科学研究院 2011
[4]小果油茶遗传多样性分析及杂交渐渗研究[D]. 黄勇.中国林业科学研究院 2011
硕士论文
[1]利用形态学和SSR标记分析中国紫心甘薯育成品种遗传多样性[D]. 高闰飞.中国农业科学院 2019
[2]普通油茶优良无性系的遗传差异分析及授粉树配置[D]. 李祥胜.福建农林大学 2019
[3]普通油茶优良基因型的遗传多样性及杂交可配性研究[D]. 任卫.福建农林大学 2018
[4]黎蒴与广宁红花油茶种质资源遗传多样性研究[D]. 谢荟.华南农业大学 2016
[5]5种山茶属野生油茶ISSR亲缘关系研究及指纹图谱的构建[D]. 李国帅.中南林业科技大学 2014
[6]油茶种质资源多样性的ISSR分析[D]. 周兰英.湖南师范大学 2014
[7]茶油多酚分析及其抗氧化稳定性研究[D]. 廖义秀.中南林业科技大学 2013
[8]福建省不同地理区域浙江红花油茶变异规律研究[D]. 付茂旺.福建农林大学 2013
[9]SRAP标记技术优化与湖北油茶遗传多样性研究[D]. 左雪枝.华中农业大学 2012
[10]油茶种质资源遗传多样性分析及品种鉴定[D]. 吴莺莺.南京林业大学 2011
本文编号：3432011
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【文章页数】：107 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
DNA琼脂糖凝胶电泳检测Fig.2-1AgarosegelelectrophoresisofgemomicDNA
海南大学硕士学位论文21图2-1DNA琼脂糖凝胶电泳检测Fig.2-1AgarosegelelectrophoresisofgemomicDNA2.2.2海南岛油茶SRAP-PCR单因素试验（1）模板DNA用量对SRAP-PCR扩增PCR反应中模板DNA用量是关键因素之一。不同用量DNA模板对海南岛油茶SRAP-PCR反应体系影响不大，本研究设置DNA用量梯度范围内均能扩增获得条带，且清晰度和背景深度差异较小（图2-2）。当模板DNA浓度大于60ng时，条带数量少且清晰度略低；当模板DNA浓度5~60ng时，条带清晰，带型保持一致。正交试验选用5~60ng模板DNA用量梯度水平。图2-2DNA模板用量和dNTPs浓度对SRAP-PCR反应体系的影响Fig.2-2EffectofconcentrationoftemplateDNAanddNTPsonSRAP-PCRreactionsystem注:M:100bpDNAMarker;1~10:1ng,5ng,20ng,40ng,60ng,80ng,100ng,120ng,160ng,200ng;11~20:0.025mmol/L,0.05mmol/L,0.1mmol/L,0.15mmol/L,0.2mmol/L,0.25mmol/L,0.375mmol/L,0.5mmol/L,0.75mmol/L,1.0mmol/LNote:M:100bpDNAMarker;1~10:1ng,5ng,20ng,40ng,60ng,80ng,100ng,120ng,160ng,200ng;11~20:0.025mmol/L,0.05mmol/L,0.1mmol/L,0.15mmol/L,0.2mmol/L,0.25mmol/L,0.375mmol/L,0.5mmol/L,0.75mmol/L,1.0mmol/L（2）dNTPs浓度对SRAP-PCR扩增PCR反应中dNTPs浓度影响扩增反应效率，浓度过低效率降低，条带数量减少、
跎伲?逦?纫菜嬷?档停?踔廖薹ü鄄斓健Ｒ虼耍??皇匝檠≡?.05~0.20mmol/LdNTPs浓度梯度水平。（3）TaqDNA聚合酶用量对SRAP-PCR扩增TaqDNA聚合酶用量对PCR反应的最终结果影响重大，过低浓度的TaqDNA聚合酶会导致产物数量减少，甚至无法扩增，而高浓度的聚合酶又会导致非特异性扩增。当TaqDNA聚合酶浓度为1U以下时，条带数量少且不清晰；TaqDNA聚合酶浓度为1U以上时，TaqDNA聚合酶浓度和产物扩增数量呈正相关；当TaqDNA聚合酶浓度为5U时，泳道10条带模糊(图2-3)。故正交试验选择1.5~4.0U的TaqDNA聚合酶浓度梯度水平。图2-3Taq酶浓度和和引物浓度对SRAP-PCR反应体系的影响Fig.2-3EffectofTaqDNApolymeraseandprimerconcentrationonSRAP-PCRreactionsystem注:M:100bpDNAMarker;1~10:0.05U,0.25U,0.5U,0.75U,1U,1.5U,2.0U,3.0U,4.0U,5.0U;11~20:0.025μmol/L,0.05μmol/L,0.1μmol/L,0.2μmol/L,0.4μmol/L,0.5μmol/L,0.6μmol/L,0.7μmol/L,0.9μmol/L,1.2μmol/LNote:M:100bpDNAMarker;1~10:0.05U,0.25U,0.5U,0.75U,1U,1.5U,2.0U,3.0U,4.0U,5.0U;11~20:0.025μmol/L,0.05μmol/L,0.1μmol/L,0.2μmol/L,0.4μmol/L,0.5μmol/L,0.6μmol/L,0.7μmol/L,0.9μmol/L,1.2μmol/L（4）引物浓度对SRAP-PCR扩增引物浓度处于0.20~0.60μmol/L时，泳道14至泳道17的条带清晰、稳定，带型一致；引物浓度低于0.20μmol/L时，泳道11至泳道13条带数量较少且不清晰；当引物浓度高于0.60μmol/L时，泳道18至泳道20扩增出的条带数量开始减少，清晰度也随之减弱(图2-3)。因此，本研究正交试验选择0.20~0.60μmol/L的引物浓度梯
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于EST-SSR标记的西双版纳苦茶资源遗传多样性分析[J]. 尚卫琼,李友勇,刘悦,段志芬,杨盛美,李慧,许燕,刘本英. 山西农业科学. 2020(02)
[2]红掌遗传多样性及亲缘关系的ISSR分析[J]. 户帅雅,李斌奇,陈孝丑,巫伟峰,张毅智,陈春,陈发兴. 福建农业学报. 2020(01)
[3]28份余甘子品种遗传多样性的ISSR分析及指纹图谱构建[J]. 邵雪花,刘牛,赖多,肖维强,匡石滋. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2020(08)
[4]朱顶红转录组SSR标记的开发与遗传多样性研究[J]. 黄宝华,蔡家珍,刘生财,林玉玲,徐小萍,赖钟雄. 闽南师范大学学报(自然科学版). 2019(04)
[5]应用FISH-AFLP技术分析105份樱桃种质资源的亲缘关系[J]. 陈新,徐丽,宗晓娟,王甲威,谭钺,朱东姿,魏海蓉,洪坡,刘庆忠. 山东农业科学. 2019(11)
[6]应用RAPD分析方法评估春黑麦品种的遗传多样性[J]. 李姗姗. 安徽农学通报. 2019(22)
[7]海南岛油茶种质资源遗传多样性的SRAP分析[J]. 陈宣,云勇,吴宇佳,戚华沙,杨立荣,陈加利,郑道君. 热带亚热带植物学报. 2019(06)
[8]世界四大木本油料发展现状[J]. 木沐. 中国林业产业. 2019(11)
[9]油茶种植现状及其高产栽培技术[J]. 陈光红,朱党元. 江西农业. 2019(20)
[10]海南6个主要产区山柚籽性状研究[J]. 赵阔,张琳,陈艳,邹易,王青松,高红日,张红建,郑联合. 农产品加工. 2019(19)
博士论文
[1]小果油茶种内类型划分、评价及亲缘关系研究[D]. 谢一青.中国林业科学研究院 2013
[2]广宁红花油茶种质特性与变异研究[D]. 孙佩光.北京林业大学 2012
[3]浙江红山茶遗传多样性分析及观赏价值评价[D]. 谢云.中国林业科学研究院 2011
[4]小果油茶遗传多样性分析及杂交渐渗研究[D]. 黄勇.中国林业科学研究院 2011
硕士论文
[1]利用形态学和SSR标记分析中国紫心甘薯育成品种遗传多样性[D]. 高闰飞.中国农业科学院 2019
[2]普通油茶优良无性系的遗传差异分析及授粉树配置[D]. 李祥胜.福建农林大学 2019
[3]普通油茶优良基因型的遗传多样性及杂交可配性研究[D]. 任卫.福建农林大学 2018
[4]黎蒴与广宁红花油茶种质资源遗传多样性研究[D]. 谢荟.华南农业大学 2016
[5]5种山茶属野生油茶ISSR亲缘关系研究及指纹图谱的构建[D]. 李国帅.中南林业科技大学 2014
[6]油茶种质资源多样性的ISSR分析[D]. 周兰英.湖南师范大学 2014
[7]茶油多酚分析及其抗氧化稳定性研究[D]. 廖义秀.中南林业科技大学 2013
[8]福建省不同地理区域浙江红花油茶变异规律研究[D]. 付茂旺.福建农林大学 2013
[9]SRAP标记技术优化与湖北油茶遗传多样性研究[D]. 左雪枝.华中农业大学 2012
[10]油茶种质资源遗传多样性分析及品种鉴定[D]. 吴莺莺.南京林业大学 2011
本文编号：3432011
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