烟草白星病的病原学及生防菌筛选

发布时间：2017-05-06 15:16

  本文关键词：烟草白星病的病原学及生防菌筛选，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：烟草白星病(Phyllosticta nicotianae Ell.et EV)又叫烟草斑点病,与烟草蛙眼病、黑斑病以及气候斑点病极为相似,不易区分且易混生。烟草白星病的病原(Phyllosticta nicotianae)一直以来被认为是叶点霉,而叶点霉和茎点霉属于真菌中的半知菌亚门、腔孢纲、球壳孢目的两个属。二者形态差异很小,分属界定标准较模糊,种类鉴定较困难。两属的传统分类依据主要是以寄生部位进行划分,寄生在叶片上的为叶点霉(Phyllosticta)、寄生在叶以外的为茎点霉(Phoma),但实际鉴定中,常遇到同一种Phyllosticta或Phoma既寄生在叶片上又寄生在茎、果实等其它部位的情况,因此很难断定该病菌是属于Phyllosticta还是Phoma,对此,前人也鲜有研究报道。本文采用传统的真菌形态学鉴定法及分子生物学鉴定法,对采自6个烟草主产区的病样进行了病原菌分离鉴定,以及病原菌的生物学特性研究和拮抗菌的筛选。旨为查明烟草白星病病原菌的分类地位,为烟草白星病的防治提供理论依据。研究结果如下:(1)烟草白星病病原菌的分离与鉴定:采用对染病叶片单斑进行分离、纯化,对分离菌株致病性测定、形态学鉴定及分子生物学鉴定等研究法,对采自于辽宁、黑龙江、广西等6个烟草主产区的具有烟草白星病症状的病样进行了病原菌分离鉴定。依据形态学鉴定法从300多个样品中共分离出31株疑似菌株。通过分子生物学鉴定结果表明,菌株间的its序列差异较小、相似度较高;NCBI比对聚类分析表明,5株是茎点霉属(Phoma.sp)、2组为拟茎点霉属(Phomasis.sp),1组为叶点霉(Phyllosticta.sp),都属于未定种,进而通过β-tubulin测定的结果为5株是茎点霉属(Phoma),分离菌致病性测定结果表明他们均具有致病性。(2)病原菌的生物学特性研究:烟草白星病病原菌适宜的培养基是OA和PDA;最适pH值为5.0-7.0;温度为4-35℃的范围内均可生长,25℃左右产孢量最多、孢子萌发率最大,当温度为40℃不再产孢;光照对病原菌直径大小影响不大,但光暗交替利于产孢。(3)拮抗菌的筛选及抑菌效果:从烟草根际土壤中分离纯化得到20株真菌和14株细菌,其中有9株真菌和1株细菌对烟草白星病病菌具有明显的抑菌作用。采用五点对峙法,以9株真菌、1株细菌和5种农药(甲基托布津、多菌灵、多菌清、百菌清和恶霉灵)对烟草白星病病原菌进行了抑菌活性检测,结果表明:真菌M7、M8、M9以及有效浓度为25 mg/μl的多菌清具有较好的抑菌效果,他们可使病原菌的菌落不扩展。
【关键词】：烟草白星病 病原菌鉴定 拮抗菌筛选
【学位授予单位】：辽宁师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S435.72;S476.1
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 引言9-11
• 1 文献综述11-17
• 1.1 烟草的现状11
• 1.2 烟草主要病害与防治11-14
• 1.2.1 烟草白星病病害症状11-12
• 1.2.2 烟草白星病病的防治12-13
• 1.2.3 烟草生长发育期的其他叶斑病13-14
• 1.3 茎点霉属和叶点霉属14-15
• 1.3.1 茎点霉属和叶点霉属的分类与区别14-15
• 1.3.2 茎点霉的寄主范围15
• 1.4 分子鉴定15
• 1.5 论文研究内容及目的、意义15-17
• 1.5.1 论文研究内容15-16
• 1.5.2 论文研究目的及意义16-17
• 2 烟草白星病病原菌的鉴定17-34
• 2.1 材料与方法17-22
• 2.1.1 实验材料17-18
• 2.1.2 实验方法18-22
• 2.2 结果与分析22-32
• 2.2.1 菌种的分离纯化与保存22-23
• 2.2.2 分离菌株的形态学鉴定23-24
• 2.2.3 分离菌株的分子生物学鉴定24-31
• 2.2.4 分离菌株的侵染性检测31-32
• 2.3 结论与讨论32-34
• 2.3.1 结论32
• 2.3.2 讨论32-34
• 3 烟草白星病病原菌的生物学特性研究34-42
• 3.1 材料与方法34-36
• 3.1.1 材料34
• 3.1.2 方法34-36
• 3.2 结果与分析36-40
• 3.2.1 不同培养基对烟草白星病病原菌的影响36
• 3.2.2 pH值对病原菌菌落直径的影响36-37
• 3.2.3 温度对病原菌菌落直径的影响37-39
• 3.2.4 光照对病原菌菌落直径的影响39
• 3.2.5 湿度对病原菌致病的影响39-40
• 3.3 结论与讨论40-42
• 3.3.1 结论40
• 3.3.2 讨论40-42
• 4 烟草白星病病原拮抗菌的筛选及药剂抑菌实验42-48
• 4.1.材料与方法42-43
• 4.1.1 材料：42
• 4.1.2 方法42-43
• 4.2.结果与分析43-46
• 4.2.1 拮抗菌的形态观察43-44
• 4.2.2 拮抗菌的抑菌率44-45
• 4.2.3 药剂对烟草白星病病原菌的抑菌效果45-46
• 4.3 结论与讨论46-48
• 4.3.1 结论46-47
• 4.3.2 讨论47-48
• 结论48-49
• 参考文献49-52
• 附录Ⅰ rDNA-ITS测序结果52-61
• 附录Ⅱ rDNA-β-tubulin测序结果61-63
• 攻读硕士学位期间发表学术论文情况63-64
• 致谢64-65

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