不同源大肠杆菌耐药性及整合子—基因盒研究

发布时间：2017-05-06 12:15

  本文关键词：不同源大肠杆菌耐药性及整合子—基因盒研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：抗菌药物在医学临床、养殖业等领域大量使用,使细菌的耐药性不断增加,多重耐药现象越来越严重,这给我们敲响了警钟,耐药性问题引起了各国的重视。大肠杆菌作为肠道重要的栖居菌之一,承受着不同药物的诱导和选择压力,导致大肠杆菌耐药性十分严重,使其也成为耐药基因储库和交换的重要场所。本次研究从不同地区采集食品动物(猪,牛,鸡)、宠物犬、大熊猫粪样以及大熊猫生活环境样本中分离、纯化和鉴定出588株大肠杆菌。依据美国临床实验室标准化委员会(CLSI)推荐的纸片法及结果判断标准,对所有分离的大肠杆菌菌株检测其对13种抗菌药物的耐药性。结果显示,588株大肠杆菌对13种抗菌药物呈不同水平的耐药性(耐药率在7.48-80.44%),其中对氨苄西林、四环素、氟苯尼考和复方新诺明呈很高耐药性(耐药率超过70%),而对左氧氟沙星,阿米卡星,头孢噻肟则呈较低耐药性(耐药率低于14%)。93.5%的菌株呈多重耐药性,多重耐药菌株主要为5-11耐。不同来源菌株耐药性比较发现,宠物犬源大肠杆菌对环丙沙星、氨苄西林、头孢噻肟和阿米卡星的耐药率极显著高于其他源菌株(P0.01)；食品动物源菌株对氟苯尼考,链霉素,诺氟沙星,四环素、头孢曲松和氨曲南药物耐药率高于其他来源菌株,尤其对氟苯尼考,头孢曲松,氨曲南和复方新诺明的耐药率与其他源菌株有极显著差异性(P0.01)；大熊猫粪源和环境源菌株对多数药物呈较低水平耐药(耐药率低于20.7%)。从588株大肠杆菌中随机选取320株,通过PCR法扩增其整合酶1型、2型和3型基因。结果显示,食品动物源菌株1类整合子检出率最高为69.70%(138株/198株),其中,猪源、鸡源和牛源分别为76.92%、71.79%和58.18%；犬源检出率为64.10%；大熊猫源和环境源检出率分别为50.75%和31.25%。2类整合子检测发现,2株猪源菌和2株鸡源菌同时检测出1型整合子和2型整合子；未检测出3类整合子。随机抽取145株1类整合子阳性菌,对其基因盒可变区进行PCR扩增和测序,结果显示：食品动物源、犬源、大熊猫粪源及环境源菌株基因盒检出率分别为91.36%、88.0%、58.82%和80.0%,检出的基因盒共有7种,基因盒基因排列分别为dfrA27、dfrA17、aadA2, dfrA1-orfC, dfrA27-aadA2, aacA4-aadA1-catB2和dfrA12-orfF-aadA2。对4株2类整合子阳性菌株基因盒可变区检测发现,有2种不同类型的基因盒,分别为dfrA1-sat2-aadA1(1株)和dfrA1-sat2(3株)。本次对食品动物源、犬源、大熊猫粪源和环境源大肠杆菌耐药性及整合子-基因盒研究发现,不同源大肠杆菌对13种抗菌药物呈不同水平的耐药性,耐药性与菌株来源有关,其中犬源菌株耐药性最严重,其次是食品动物源,大熊猫粪源及其生活环境源菌株耐药性较低,耐药菌株呈多重耐药性：耐药菌株中广泛携带1类整合子,整合子-基因盒分子特征以介导氨基糖苷类和磺胺-甲氧苄啶类耐药的aadA和dfrA基因类型为主；菌株的耐药表型与其所携带的基因盒有一定的相关性。
【关键词】：大肠杆菌 不同源 耐药性 整合子-基因盒
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.61
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 缩略词表8-13
• 第一章 研究背景及目的意义13-26
• 1 研究背景13-25
• 1.1 大肠杆菌概述13-14
• 1.2 不同源大肠杆菌耐药现状14-16
• 1.2.1 宠物源大肠杆菌耐药现状14
• 1.2.2 食品动物源大肠杆菌耐药现状14-15
• 1.2.3 野生动物源及环境源大肠杆菌耐药现状15-16
• 1.3 大肠杆菌的耐药机制16-18
• 1.3.1 酶对抗生素的修饰和水解17
• 1.3.2 抗生素作用靶点改变17
• 1.3.3 细菌细胞膜通透性改变17
• 1.3.4 细菌药物外排系统17-18
• 1.3.5 耐药基因的转移机制18
• 1.4 整合子-基因盒系统18-25
• 1.4.1 整合子结构及分类19-20
• 1.4.2 整合子的分布20-21
• 1.4.3 基因盒结构和功能21-23
• 1.4.4 整合子-基因盒系统与大肠杆菌多重耐药性的关系23-25
• 1.4.5 整合子的检测方法25
• 2 研究目的及意义25-26
• 第二章 不同源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性检测26-38
• 1 材料与方法26-30
• 1.1 材料26-27
• 1.1.1 样品及来源26
• 1.1.2 标准菌株26
• 1.1.3 抗菌药物药敏纸片26
• 1.1.4 培养基26-27
• 1.1.5 细菌生化鉴定管27
• 1.1.6 其他试剂27
• 1.1.7 主要仪器与设备27
• 1.2 方法27-30
• 1.2.1 样品采集27
• 1.2.2 大肠杆菌分离、鉴定及保存27-28
• 1.2.3 抗菌药物的耐药性检测28-30
• 2 结果与分析30-35
• 2.1 大肠杆菌分离和鉴定30
• 2.2 大肠杆菌对13种抗菌药物的药敏结果30-31
• 2.3 不同源菌株对13种抗菌药物耐药情况比较31-33
• 2.4 588株大肠杆菌对13种抗菌药物的多重耐药性33-35
• 3 讨论35-38
• 3.1 不同源大肠杆菌对13种抗菌药物的耐药情况35-36
• 3.2 规范使用抗生素,降低抗生素耐药性36-38
• 第三章 不同源大肠杆菌整合子-基因盒的检测38-55
• 1 材料和方法38-41
• 1.1 材料38-39
• 1.1.1 菌株38
• 1.1.2 试剂38-39
• 1.1.3 主要设备及仪器39
• 1.2 方法39-41
• 1.2.1 PCR检测1、2、3型整合酶基因39-40
• 1.2.2 基因盒的检测及鉴定40-41
• 2 结果与分析41-50
• 2.1 不同源大肠杆菌菌株整合子的检测结果及分析41-43
• 2.1.1 PCR扩增不同类型整合子的检测结果41-42
• 2.1.2 不同源大肠杆菌1、2类整合子检出情况及分布42-43
• 2.2 不同源大肠杆菌整合子.基因盒流行特征43-47
• 2.2.1 不同源大肠杆菌1类整合子-基因盒可变区PCR扩增及测序43-46
• 2.2.2 不同源大肠杆菌2类整合子-基因盒PCR扩增及测序结果46-47
• 2.3 整合子基因盒与耐药表型的关系47-50
• 3 讨论50-55
• 3.1 不同源大肠杆菌菌株整合子流行情况51-52
• 3.2 不同源大肠杆菌菌株整合子-基因盒的检测52-53
• 3.3 整合子-基因盒与细菌耐性之间的关系53-55
• 第四章 结论和创新55-57
• 1 结论55-56
• 2 创新56-57
• 参考文献57-65
• 致谢65-66
• 攻读硕士期间发表的学术论文66

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4 王s

本文编号：348396