HSP27通过抗氧化应激及细胞凋亡途径调控奶牛RFM发生作用机制的研究
发布时间：2022-01-12 03:18
胎衣不下（RFM）是奶牛常见的一种繁殖障碍疾病,以往研究已经证实其发生与细胞凋亡及机体抗氧化状态密切相关,本团队在前期研究中发现热休克蛋白27（HSP27）在RFM奶牛胎盘组织中呈现显著升高,而HSP27在机体抗氧化和细胞凋亡生物过程中发挥着重要的作用。因此,本实验拟通过体内体外两部分实验,应用生物化学、分子生物学技术确定HSP27、细胞凋亡相关因子及细胞内ROS与奶牛RFM发生的相关性,并在建立奶牛原代上皮细胞氧化应激模型的基础上,探究HSP27是否是通过细胞凋亡和氧化应激两种途径参与胎衣不下的发生,并阐明HSP27参与RFM发生过程中的作用机制,从而为进一步揭示奶牛胎衣不下发病机理提供理论基础。本研究选取泌乳量、年龄、体重和胎次都相近,且无其他疾病的RFM奶牛和胎衣正常排出奶牛7头,产后12 h分别采取其血液及母体胎盘组织。通过ELISA法检测血清中HSP27的浓度,然后再通过qRT-PCR和Western blot法检测HSP27介导的信号通路中HSP27、Akt、p-Akt、p-IKK、NF-κB p65、p-NF-κB p65、Bad、Bcl-xl、Bcl-2的表达,之后检测...
【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
奶牛胎盘结构（图片引自Dr.LindertBenedictus）
HSP27通过抗氧化应激及细胞凋亡途径调控奶牛RFM发生作用机制的研究4图1.1奶牛胎盘结构（图片引自Dr.LindertBenedictus）Fig1.1Structureofbovineplacentomes.（CourtesyofDr.LindertBenedictus）绒毛膜上皮主要由80％极化的UTC和20％非极化的TGC组成，UTC是一种单核立方上皮细胞，体积略大于肉阜处的上皮细胞，作为绒毛膜的主要组成细胞，他们侵袭入子宫肉阜，形成三个不同级别的微绒毛结构，与此同时他们的形状也变的不规则，以便于更好的贴合子宫肉阜[23,24]，增加胎儿胎盘与母体的接触面积，即交换面积，如图1.1所示。TGC是在奶牛妊娠的第16d由UTC增殖分化产生，而在整个妊娠过程中，约20%的滋养层细胞一直是TGC，主要是TGC会侵入子宫肉阜，并于该处上皮细胞融合，形成三核合胞体，如图1.2所示，能为绒毛与肉阜的连接提供连接点，并且TGC本身能够分泌一些激素，用以维持和帮助胚胎的发育。图1.2滋养层细胞形成三核细胞（引自Dr.Wooding）Fig1.2GormationofatrinucleatecellbyTGC.(CourtesyofDr.Wooding)1.2.3滋养层细胞的作用UTC除了形成三级绒毛与肉阜结合外，其还参与了干扰素-τ（INF-τ）的产生[25]，干扰素-τ在母体识别中发挥关键作用，故其能够保护及维持早期胚胎的正常发育。INF-τ的产生从妊娠开始一直持续，并且在妊娠的第17d含量最高，直至妊娠的第35d消失[25-28]。TGC在妊娠的第16d由UTC分化而来，其不仅能够与肉阜上皮细胞融合，还能够合
2奶牛体内HSP27及其介导的细胞凋亡和氧化应激通路关键因子变化与RFM相关性的研究212.1.2.2.3ELISA检测血液中HSP27含量按照ELISA试剂盒说明书检测血液中HSP27含量2.1.2.3氧化应激途径相关指标的检测胎盘组织中GSH-Px以及G6PD活性以及GSSG和GSH含量的检测依照说明书操作。2.1.3数据分析结果皆表示为平均数±SEM，使用SPSS20.0进行统计分析（单因素方差分析），qRT-PCR及WB结果用t检验分析，“*”为差异显著（P<0.05），“**”为差异极显著（P<0.01）。2.2实验结果2.2.1ELISA实验结果由图2.1可知，RFM奶牛在产后12h，血液中HSP27浓度显著高于NO-RFM奶牛（P<0.05）。图2.1RFM奶牛与NO-RFM奶牛血清中HSP27浓度的检测（R：RFM；N：NO-RFM）Fig2.1DetectionofHSP27inserumofRFMandNO-RFMcows（R：RFM；N：NO-RFM）NF-κBp65508233F：AGGAGCACGGACACCACCAAG164R；AGCTCAGCCTCATAGAAGCCATCCBad615013F：AGACTCCAGCCGTGCAGATAGG81R：GTTAGCCAGTGCTTGCTGAGACCBcl-xl282152F：GAGTCGGATCGCAACTTGGATGG188R：GCAGAACCACACCAGCCACAGBcl-2281020F：TGGATGACCGAGTACCTGAACCG132R：TGCCTTCAGAGACAGCCAGGAG
【参考文献】：
期刊论文
[1]奶牛胎衣不下的发生原因、临床症状及综合防治措施[J]. 孙绍仁. 现代畜牧科技. 2020(01)
[2]奶牛胎衣不下防治探讨[J]. 李红玉. 中国畜禽种业. 2018(05)
[3]奶牛胎衣不下的病因及治疗[J]. 刘新,李金容,鲁必均. 中国畜牧兽医文摘. 2018(01)
[4]奶牛胎衣不下病因分析及防治措施[J]. 谢化弟,徐光明. 畜禽业. 2008(08)
本文编号：3583999
【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
奶牛胎盘结构（图片引自Dr.LindertBenedictus）
HSP27通过抗氧化应激及细胞凋亡途径调控奶牛RFM发生作用机制的研究4图1.1奶牛胎盘结构（图片引自Dr.LindertBenedictus）Fig1.1Structureofbovineplacentomes.（CourtesyofDr.LindertBenedictus）绒毛膜上皮主要由80％极化的UTC和20％非极化的TGC组成，UTC是一种单核立方上皮细胞，体积略大于肉阜处的上皮细胞，作为绒毛膜的主要组成细胞，他们侵袭入子宫肉阜，形成三个不同级别的微绒毛结构，与此同时他们的形状也变的不规则，以便于更好的贴合子宫肉阜[23,24]，增加胎儿胎盘与母体的接触面积，即交换面积，如图1.1所示。TGC是在奶牛妊娠的第16d由UTC增殖分化产生，而在整个妊娠过程中，约20%的滋养层细胞一直是TGC，主要是TGC会侵入子宫肉阜，并于该处上皮细胞融合，形成三核合胞体，如图1.2所示，能为绒毛与肉阜的连接提供连接点，并且TGC本身能够分泌一些激素，用以维持和帮助胚胎的发育。图1.2滋养层细胞形成三核细胞（引自Dr.Wooding）Fig1.2GormationofatrinucleatecellbyTGC.(CourtesyofDr.Wooding)1.2.3滋养层细胞的作用UTC除了形成三级绒毛与肉阜结合外，其还参与了干扰素-τ（INF-τ）的产生[25]，干扰素-τ在母体识别中发挥关键作用，故其能够保护及维持早期胚胎的正常发育。INF-τ的产生从妊娠开始一直持续，并且在妊娠的第17d含量最高，直至妊娠的第35d消失[25-28]。TGC在妊娠的第16d由UTC分化而来，其不仅能够与肉阜上皮细胞融合，还能够合
2奶牛体内HSP27及其介导的细胞凋亡和氧化应激通路关键因子变化与RFM相关性的研究212.1.2.2.3ELISA检测血液中HSP27含量按照ELISA试剂盒说明书检测血液中HSP27含量2.1.2.3氧化应激途径相关指标的检测胎盘组织中GSH-Px以及G6PD活性以及GSSG和GSH含量的检测依照说明书操作。2.1.3数据分析结果皆表示为平均数±SEM，使用SPSS20.0进行统计分析（单因素方差分析），qRT-PCR及WB结果用t检验分析，“*”为差异显著（P<0.05），“**”为差异极显著（P<0.01）。2.2实验结果2.2.1ELISA实验结果由图2.1可知，RFM奶牛在产后12h，血液中HSP27浓度显著高于NO-RFM奶牛（P<0.05）。图2.1RFM奶牛与NO-RFM奶牛血清中HSP27浓度的检测（R：RFM；N：NO-RFM）Fig2.1DetectionofHSP27inserumofRFMandNO-RFMcows（R：RFM；N：NO-RFM）NF-κBp65508233F：AGGAGCACGGACACCACCAAG164R；AGCTCAGCCTCATAGAAGCCATCCBad615013F：AGACTCCAGCCGTGCAGATAGG81R：GTTAGCCAGTGCTTGCTGAGACCBcl-xl282152F：GAGTCGGATCGCAACTTGGATGG188R：GCAGAACCACACCAGCCACAGBcl-2281020F：TGGATGACCGAGTACCTGAACCG132R：TGCCTTCAGAGACAGCCAGGAG
【参考文献】：
期刊论文
[1]奶牛胎衣不下的发生原因、临床症状及综合防治措施[J]. 孙绍仁. 现代畜牧科技. 2020(01)
[2]奶牛胎衣不下防治探讨[J]. 李红玉. 中国畜禽种业. 2018(05)
[3]奶牛胎衣不下的病因及治疗[J]. 刘新,李金容,鲁必均. 中国畜牧兽医文摘. 2018(01)
[4]奶牛胎衣不下病因分析及防治措施[J]. 谢化弟,徐光明. 畜禽业. 2008(08)
本文编号：3583999
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