滇重楼内生真菌来源杂二萜化合物的基因组导向挖掘
发布时间：2022-01-20 01:21
植物内生真菌与宿主植物长期共存,进化出了独特的代谢机制。从这些代谢产物中寻找具有药用价值的活性分子,是当前新药及成药前体来源的重要途径。药用植物内生真菌来源于传统药用植物,更有可能产生具有生物活性的代谢产物。其中,杂二萜化合物由于普遍具有抗癌抗肿瘤等活性,受到广泛关注。本文以聚酮-二萜（PK-DTs）杂化分子为目标,从云南梁王山产滇重楼Paris polyphylla var.yunnanensis植株内分离得到的34株内生真菌中筛选了适合我们研究的基因簇:经过基因组测序和生物信息学分析,并与已知杂二萜化合物生物合成途径相关的基因簇进行比对发现,其中一株内生真菌Aspergillus versicolor0312的第19基因簇可能与杂二萜化合物的生物合成途径有关。据此,我们用异源表达策略开展了该基因簇的天然产物研究:在滇重楼内生真菌0312的基因组内鉴定了chevalon E（1）及其氧化衍生物的生物合成基因簇,并在异源表达宿主Aspergillus oryzae NSAR1中成功地重构了该生物合成途径。研究发现,两种细胞色素P450单加氧酶cle2和cle4,能将chevalon E...
【文章来源】：云南民族大学云南省
【文章页数】：112 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
本研究所用技术路线
云南民族大学硕士学位论文23图3.1滇重楼内生真菌Aspergillusversicolor0312（左）和Aspergillusfelis0260（右）据此，我们对这两株内生真菌进行了新一代全基因组测序。3.2.1全基因组测序为了寻找Aspergillusversicolor0312和Aspergillusfelis0260中适合基因组挖掘研究的杂二萜因簇，我们将这两株内生真菌进行了第三代全基因组测序。我们偶然发现0312菌株在不同培养基中生长状态差别很大，因此，对其进行了培养基的筛选实验：利用实验室常用的MEA培养基、PDB培养基、DPY培养基，在摇床内使用相同条件振荡培养（图3.2），观察发现PDB培养基生长状态最佳，长得最快，并且菌丝均匀，其次是MEA培养基，而在DPY培养基内长得最差。随后，我们又对恒温摇床设置了不同的温度，观察发现0312在25℃，200rpm/min条件下，长得最快，温度升高，反而极大地抑制了其生长，低于25℃，生长也比较缓慢。因此，25℃，200rpm/min是0312菌株最佳的培养条件。图3.2对Aspergillusversicolor0312筛选培养基
云南民族大学硕士学位论文23图3.1滇重楼内生真菌Aspergillusversicolor0312（左）和Aspergillusfelis0260（右）据此，我们对这两株内生真菌进行了新一代全基因组测序。3.2.1全基因组测序为了寻找Aspergillusversicolor0312和Aspergillusfelis0260中适合基因组挖掘研究的杂二萜因簇，我们将这两株内生真菌进行了第三代全基因组测序。我们偶然发现0312菌株在不同培养基中生长状态差别很大，因此，对其进行了培养基的筛选实验：利用实验室常用的MEA培养基、PDB培养基、DPY培养基，在摇床内使用相同条件振荡培养（图3.2），观察发现PDB培养基生长状态最佳，长得最快，并且菌丝均匀，其次是MEA培养基，而在DPY培养基内长得最差。随后，我们又对恒温摇床设置了不同的温度，观察发现0312在25℃，200rpm/min条件下，长得最快，温度升高，反而极大地抑制了其生长，低于25℃，生长也比较缓慢。因此，25℃，200rpm/min是0312菌株最佳的培养条件。图3.2对Aspergillusversicolor0312筛选培养基
【参考文献】：
期刊论文
[1]重楼属植物在少数民族医药中的应用[J]. 刘玉雨,徐福荣,范敏,段宝忠. 世界科学技术-中医药现代化. 2019(03)
[2]冬凌草甲素抗癌活性的研究进展[J]. 栾剑,董慧婷,郭海勇. 安徽农学通报. 2018(20)
[3]滇重楼（Paris polyphylla var.yunnanensis）的内生细菌的分离与鉴定[J]. 廖秋红,李艳冰,刘琴,杨生超,刘涛. 分子植物育种. 2018(18)
[4]Sansanmycin生物合成基因簇在天蓝色链霉菌中的异源表达[J]. 范佳会,侍媛媛,江志波,李星星,雷璇,解云英,王丽非,洪斌. 药学学报. 2018(06)
[5]中药重楼的抗炎作用机制研究进展[J]. 熊伟,陈思如,修光辉,凌斌,孙洁,刘萍. 云南中医中药杂志. 2018(01)
[6]微生态学与后抗生素时代[J]. 王世荣,岳寿松. 中国微生态学杂志. 2017(08)
[7]重楼皂苷Ⅰ对人肝癌细胞MHCC97-H增殖、周期、凋亡的影响[J]. 曾普华,叶书林,王佳佳,李为,刘丹,贺佐梅,邓天好,周芳,郜文辉. 云南中医学院学报. 2017(03)
[8]重楼皂苷Ⅰ对肺癌循环肿瘤细胞凋亡及周期的影响[J]. 王青,阙祖俊,罗斌,郑婷婷,田建辉. 上海中医药杂志. 2017(05)
[9]滇重楼内生真菌多样性分析[J]. 段荣婷,李洪涛,李红玉,周皓,杨雪琼,蔡乐,杨亚滨. 中国医药导报. 2017(09)
[10]合成生物学在天然产物研究中的应用[J]. 王丽苹,罗云孜. 生物技术通报. 2017(01)
硕士论文
[1]6-Hydroxymellein及类似物和Ansaspirolide的合成研究[D]. 刘金杨.西北农林科技大学 2018
[2]中药活性成分重楼皂苷Ⅵ抑制肺鳞癌细胞增殖的机制研究[D]. 徐俊.浙江大学 2018
[3]白僵菌素在构巢曲霉中异源表达的研究[D]. 孙安徽.安徽大学 2016
[4]基因组导向的Streptomyces sp.SS中天然产物及其生物合成基因簇的发现[D]. 张宁宁.北京协和医学院 2016
[5]基于遗传改造发掘深海链霉菌Streptomyces somaliensis SCSIO ZH66的次级代谢产物[D]. 侯路宽.中国海洋大学 2015
[6]香茶菜属二萜类化合物抗肿瘤作用的构效关系及其分子机制研究[D]. 梁宇光.中国人民解放军军事医学科学院 2007
本文编号：3597914
【文章来源】：云南民族大学云南省
【文章页数】：112 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
本研究所用技术路线
云南民族大学硕士学位论文23图3.1滇重楼内生真菌Aspergillusversicolor0312（左）和Aspergillusfelis0260（右）据此，我们对这两株内生真菌进行了新一代全基因组测序。3.2.1全基因组测序为了寻找Aspergillusversicolor0312和Aspergillusfelis0260中适合基因组挖掘研究的杂二萜因簇，我们将这两株内生真菌进行了第三代全基因组测序。我们偶然发现0312菌株在不同培养基中生长状态差别很大，因此，对其进行了培养基的筛选实验：利用实验室常用的MEA培养基、PDB培养基、DPY培养基，在摇床内使用相同条件振荡培养（图3.2），观察发现PDB培养基生长状态最佳，长得最快，并且菌丝均匀，其次是MEA培养基，而在DPY培养基内长得最差。随后，我们又对恒温摇床设置了不同的温度，观察发现0312在25℃，200rpm/min条件下，长得最快，温度升高，反而极大地抑制了其生长，低于25℃，生长也比较缓慢。因此，25℃，200rpm/min是0312菌株最佳的培养条件。图3.2对Aspergillusversicolor0312筛选培养基
云南民族大学硕士学位论文23图3.1滇重楼内生真菌Aspergillusversicolor0312（左）和Aspergillusfelis0260（右）据此，我们对这两株内生真菌进行了新一代全基因组测序。3.2.1全基因组测序为了寻找Aspergillusversicolor0312和Aspergillusfelis0260中适合基因组挖掘研究的杂二萜因簇，我们将这两株内生真菌进行了第三代全基因组测序。我们偶然发现0312菌株在不同培养基中生长状态差别很大，因此，对其进行了培养基的筛选实验：利用实验室常用的MEA培养基、PDB培养基、DPY培养基，在摇床内使用相同条件振荡培养（图3.2），观察发现PDB培养基生长状态最佳，长得最快，并且菌丝均匀，其次是MEA培养基，而在DPY培养基内长得最差。随后，我们又对恒温摇床设置了不同的温度，观察发现0312在25℃，200rpm/min条件下，长得最快，温度升高，反而极大地抑制了其生长，低于25℃，生长也比较缓慢。因此，25℃，200rpm/min是0312菌株最佳的培养条件。图3.2对Aspergillusversicolor0312筛选培养基
【参考文献】：
期刊论文
[1]重楼属植物在少数民族医药中的应用[J]. 刘玉雨,徐福荣,范敏,段宝忠. 世界科学技术-中医药现代化. 2019(03)
[2]冬凌草甲素抗癌活性的研究进展[J]. 栾剑,董慧婷,郭海勇. 安徽农学通报. 2018(20)
[3]滇重楼（Paris polyphylla var.yunnanensis）的内生细菌的分离与鉴定[J]. 廖秋红,李艳冰,刘琴,杨生超,刘涛. 分子植物育种. 2018(18)
[4]Sansanmycin生物合成基因簇在天蓝色链霉菌中的异源表达[J]. 范佳会,侍媛媛,江志波,李星星,雷璇,解云英,王丽非,洪斌. 药学学报. 2018(06)
[5]中药重楼的抗炎作用机制研究进展[J]. 熊伟,陈思如,修光辉,凌斌,孙洁,刘萍. 云南中医中药杂志. 2018(01)
[6]微生态学与后抗生素时代[J]. 王世荣,岳寿松. 中国微生态学杂志. 2017(08)
[7]重楼皂苷Ⅰ对人肝癌细胞MHCC97-H增殖、周期、凋亡的影响[J]. 曾普华,叶书林,王佳佳,李为,刘丹,贺佐梅,邓天好,周芳,郜文辉. 云南中医学院学报. 2017(03)
[8]重楼皂苷Ⅰ对肺癌循环肿瘤细胞凋亡及周期的影响[J]. 王青,阙祖俊,罗斌,郑婷婷,田建辉. 上海中医药杂志. 2017(05)
[9]滇重楼内生真菌多样性分析[J]. 段荣婷,李洪涛,李红玉,周皓,杨雪琼,蔡乐,杨亚滨. 中国医药导报. 2017(09)
[10]合成生物学在天然产物研究中的应用[J]. 王丽苹,罗云孜. 生物技术通报. 2017(01)
硕士论文
[1]6-Hydroxymellein及类似物和Ansaspirolide的合成研究[D]. 刘金杨.西北农林科技大学 2018
[2]中药活性成分重楼皂苷Ⅵ抑制肺鳞癌细胞增殖的机制研究[D]. 徐俊.浙江大学 2018
[3]白僵菌素在构巢曲霉中异源表达的研究[D]. 孙安徽.安徽大学 2016
[4]基因组导向的Streptomyces sp.SS中天然产物及其生物合成基因簇的发现[D]. 张宁宁.北京协和医学院 2016
[5]基于遗传改造发掘深海链霉菌Streptomyces somaliensis SCSIO ZH66的次级代谢产物[D]. 侯路宽.中国海洋大学 2015
[6]香茶菜属二萜类化合物抗肿瘤作用的构效关系及其分子机制研究[D]. 梁宇光.中国人民解放军军事医学科学院 2007
本文编号：3597914
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