bta-miR-2400对牦牛前体脂肪细胞增殖与分化的调控机制研究

发布时间：2023-02-25 18:52

　　牦牛(Bos grunniens)是生活在高寒低氧地区具有重要文化和生产意义的放牧动物。由于受地势、气候等环境因素的制约,其体内脂肪组织的消长波动较大。在暖季,由于牧草充足,牦牛体内脂肪组织迅速囤积以维持漫长冷季里足够的体温和能量代谢。目前诸多研究发现,脂肪组织发育及脂代谢离不开miRNAs的分子调控,但在牦牛上对脂肪发生和脂肪沉积相关miRNAs的研究缺乏,亟需挖掘。因此,研究miRNAs在牦牛脂肪细胞增殖、分化及特殊脂代谢调控中的分子作用机理,可能为牦牛脂肪发生和脂肪沉积的生理学研究提供理论依据。本试验以牦牛为研究对象,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测bta-miR-2400在牦牛心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、背最长肌、皮下脂肪中的表达规律。培养牦牛前体脂肪细胞,经油红O染色观察诱导分化过程中脂滴的积累情况并通过RT-qPCR检测诱导分化过程中bta-miR-2400和成脂分化标志基因的表达水平。通过转染bta-miR-2400 mimics和bta-miR-2400 inhibitor于牦牛前体脂肪细胞,利用RT-qPCR和CCK-8检测在过表达和抑制表达bta-miR...

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

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项目资助
摘要
ABSTRACT
缩略语表(ABBREVIATION)
第1章 文献综述
    引言
    1.1 miRNA的产生及调控
    1.2 脂肪细胞概述
        1.2.1 脂肪组织分类
        1.2.2 脂肪细胞的来源和形成
    1.3 脂肪细胞的增殖与分化
        1.3.1 脂肪细胞的增殖
        1.3.2 脂肪细胞的分化
    1.4 miRNA调控脂肪细胞增殖、分化
        1.4.1 miRNA通过转录因子调控脂肪细胞
        1.4.2 miRNA参与信号通路调控脂肪细胞
    1.5 研究目的与意义
第2章 材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 组织样品
        2.1.2 牦牛前体脂肪细胞
    2.2 试验设备与试剂
        2.2.1 实验试剂及仪器
        2.2.2 试剂配制
        2.2.3 相关生物信息学网站及分析软件
    2.3 试验方法
        2.3.1 牦牛前体脂肪细胞制备
        2.3.2 牦牛脂肪细胞传代培养
        2.3.3 牦牛前体脂肪细胞诱导分化
        2.3.4 牦牛脂肪细胞转染
        2.3.5 bta-miR-2400 的功能研究
        2.3.6 总RNA提取及质量检测
        2.3.7 c DNA合成
        2.3.8 Real-time PCR
        2.3.9 油红O染色
        2.3.10 甘油三酯检测
        2.3.11 CCK-8 检测
        2.3.12 bta-miR-2400 的靶基因预测与双荧光素酶报告检测
        2.3.13 bta-miR-2400 在组织和细胞中的表达量分析
第3章 结果与分析
    3.1 bta-miR-2400 表达模式
        3.1.1 bta-miR-2400 在牦牛各组织中的分布
        3.1.2 bta-miR-2400 牦牛前体脂肪细胞时序表达
    3.2 bta-miR-2400 对牦牛前体脂肪细胞增殖的影响
        3.2.1 牦牛前体脂肪细胞的培养及形态学观察
        3.2.2 bta-miR-2400 促进牦牛前体脂肪细胞增殖
    3.3 bta-miR-2400 对牦牛前体脂肪细胞分化的影响
        3.3.1 牦牛前体脂肪细胞诱导分化
        3.3.2 PPARγ、C/EBPα、FABP4 表达变化
        3.3.3 细胞内甘油三酯(TG)含量测定
        3.3.4 过表达(抑制)bta-miR-2400 后脂肪细胞分化标志基因表达变化
    3.4 bta-miR-2400 靶基因预测及功能验证
        3.4.1 bta-miR-2400 靶基因预测
        3.4.2 双荧光素酶报告基因测定
        3.4.3 SUMO1 在诱导分化和转染之后的表达水平
第4章 讨论
    4.1 bta-miR-2400 的表达模式
    4.2 牦牛前体脂肪细胞的分离培养与诱导分化
    4.3 bta-miR-2400 对牦牛前体脂肪细胞增殖、分化的作用
    4.4 bta-miR-2400 靶基因预测及功能分析
第5章 结论
创新点
参考文献
致谢
作者简介
导师简介



本文编号：3749003