鸭传染性浆膜炎灭活疫苗免疫产蛋种鸭母源抗体及其保护力

发布时间：2023-05-21 23:01

　　本研究开展了建立基于脂多糖的间接酶联免疫吸附试验(LPS-ELISA)和基于鸭疫里默氏菌(RA)超声裂解物的间接酶联免疫吸附试验(PRO-ELISA)检测血清1型鸭疫里默氏菌(RA-1)抗体、鸭传染性浆膜炎灭活疫苗免疫产蛋种鸭后其种蛋卵黄及6日龄雏鸭血清中LPS-ELISA抗体/PRO-ELISA抗体/试管凝集试验抗体的消长规律、雏鸭母源抗体水平与抵抗RA-1强毒攻击的关系评估等,获得如下结果：1、检测RA-1抗体的LPS-ELISA和PRO-ELISA方法建立LPS-ELISA:LPS最佳包被浓度为12.50 ng/μL,血清最佳稀释浓度为1：800,酶标二抗最佳稀释度为1：400。PRO-ELISA:RA超声裂解抗原最佳包被浓度为1.56 ng/μL,血清最佳稀释浓度为]：400,酶标二抗最佳稀释度为1：800。以上两种方法与经典的RA试管凝集试验具有较好的平行关系。2、鸭传染性浆膜炎灭活疫苗免疫种鸭后抗体传至卵黄及下一代6日龄雏鸭的消长规律60只4月龄产蛋种鸭注射0.5mL鸭传染性浆膜炎灭活疫苗,于第3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36天收集当天所产的...

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
缩略词表
一 文献综述
    1 前言
        1.1 鸭传染性浆膜炎概述
        1.2 病原学
        1.3 流行病学
        1.4 临诊症状和病理变化
        1.5 诊断
    2 鸭传染性浆膜炎防治研究进展
        2.1 鸭传染性浆膜炎的预防
        2.2 鸭传染性浆膜炎的药物防治
        2.3 鸭传染性浆膜炎的疫苗预防
    3 鸭传染性浆膜炎检测方法的研究进展
        3.1 免疫荧光检测技术
        3.2 PCR检测方法
        3.3 鸭传染性浆膜炎抗体的检测方法
    4 本试验研究的目的意义
二 试验内容
    1 试验材料
        1.1 试验动物、菌株和试剂
        1.2 主要仪器
    2 试验方法
        2.1 LPS-ELISA方法的建立和PRO-ELISA方法优化
            2.1.1 RA-1阳性血清制备
            2.1.2 LPS-ELISA方法的建立
            2.1.3 PRO-ELISA方法条件的优化
        2.2 免疫种鸭后不同时间点卵黄抗体及后代锥鸭血清抗体的消长规律
            2.2.1 免疫种鸭收集鸭蛋提取卵黄抗体和孵育雏鸭提取血清
            2.2.2 试管凝集试验检测卵黄抗体和雏鸭血清抗体
            2.2.3 两种间接ELISA方法检测卵黄抗体和雏鸭血清抗体效价
        2.3 后代雏鸭母源抗体效价测定及攻毒保护试验
            2.3.1 免疫种鸭、收集鸭蛋和孵育雏鸭
            2.3.2 不同日龄雏鸭血清制备
            2.3.3 检测不同日龄雏鸭血清抗体效价
            2.3.4 雏鸭攻毒保护试验
    3 结果
        3.1 血清1型鸭疫里默氏菌(RA-1)阳性血清制备
            3.1.1 不完全弗氏佐剂乳化抗原物理性质与无菌检验结果
            3.1.2 收集的RA-1阳性血清
        3.2 建立LPS-ELISA条件优化结果
            3.2.1 测定抗原和血清工作浓度
            3.2.2 酶标抗体的工作浓度
            3.2.3 最佳封闭液的选择
            3.2.4 包被最佳工作条件
            3.2.5 酶标抗体的最佳孵育时间
            3.2.6 一抗的最佳孵育时间
            3.2.7 最佳封闭时间
            3.2.8 底物显色时间的测定
            3.2.9 阴性临界值的测定
            3.2.10 特异性检测
            3.2.11 变异系数测定
        3.3 PRO-ELISA条件的优化
            3.3.1 测定抗原和血清工作浓度
            3.3.2 酶标抗体的工作浓度
            3.3.3 阴性临界值的测定
        3.4 试管凝集试验检测种蛋卵黄和雏鸭血清抗体效价
        3.5 间接ELISA检测卵黄抗体效价和雏鸭体内血清抗体效价
            3.5.1 PRO-ELISA检测卵黄抗体效价和雏鸭体内血清抗体效价
            3.5.2 LPS-ELISA检测种蛋卵黄抗体效价和雏鸭体内血清抗体效价
        3.6 雏鸭出壳后母源抗体消长规律
            3.6.1 后代雏鸭血清凝集抗体消长规律
            3.6.2 PRO-ELISA检测雏鸭出壳后体内母源抗体效价
            3.6.3 LPS-ELISA检测雏鸭出壳后体内血清抗体效价
        3.7 雏鸭攻毒保护试验
    4 讨论
三 结论
参考文献
致谢



本文编号：3821592