樟叶越桔原植物及其组织培养系的化学成分分析

发布时间：2017-05-30 00:06

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【摘要】：樟叶越桔(Vaccinium dunalianum Wight)属杜鹃花科越桔属植物。主产于云南、四川、贵州、西藏等地,在云南省境内则主要分布于云南西北部经滇中高原至滇南和滇东南。其幼嫩叶芽,因形似雀嘴呈锥状,在云南彝族民间又称“雀嘴茶”,据记载自明代开始就作为一种茶代用品长期饮用至今,具有祛风除湿、舒筋活络等功效。樟叶越桔还是一种富含咖啡酰熊果苷类物质的特殊资源植物,其主要成分的黑色素生成抑制活性优于熊果苷,且毒性仅为熊果苷的1/2。熊果苷是源于绿色植物的天然活性物质,是国际公认的21世纪的最为安全有效的理想皮肤美白祛斑活性剂。由于熊果苷作为次生代谢产物通常以微量形式存在于植物体中,且天然植物来源困难,因此,樟叶越桔有望作为熊果苷天然替代品资源加以应用,具有重要的开发价值。本研究以樟叶越桔为植物材料,分别开展了樟叶越桔不同产地及不同部位中主要化学成分的含量分析;以樟叶越桔幼嫩茎段为外植体,建立其组织培养和快速繁殖体系;樟叶越桔阴干果实的化学成分分离鉴定和营养成分分析等三方面的研究工作,以期为该植物的种质资源保护及进一步的综合开发利用提供科学依据。取得的主要研究结果如下:1.建立了樟叶越桔中熊果苷(arbutin,1)、绿原酸(chlorogenic acid,2)和6'-O-咖啡酰熊果苷(6'-O-caffeoylarbutin,3)等3种主要化学成分的HPLC同步定量分析方法。运用该方法对樟叶越桔不同产地及不同部位中上述3种化学成分的含量分布进行了测定分析,结果表明化合物3的含量高于1和2,且3在叶芽中的含量高达31.76%,叶芽、花芽及叶中1-3的含量均高于其他部位。2.以野生樟叶越桔幼嫩带芽茎段为外植体,通过对初代启动培养、增殖及生根培养方案的筛选,建立了樟叶越桔的组织培养和快速繁殖体系。结果表明,最适启动培养基为WPM+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1,外植体诱导萌发率达83.33%;增殖培养基为WPM+ZT 2.0 mg·L-1,可获得较高的增殖倍率,且暗培养7d可达最佳增殖效果;生根最适培养基为WPM+IBA 0.2 mg·L-1,生根率达86.67%。3.运用植物化学研究方法,樟叶越桔果实用80%甲醇冷浸提取后,依次用石油醚和乙酸乙酯进行萃取,萃取后剩余水溶液部分进一步采用Diaion HP20、MCI和CG161吸附树脂、硅胶、Sephadex LH-20凝胶和HPLC半制备Rp-18等柱层析方法进行分离纯化,从中共分离得到19个化合物。采用质谱、1H和13C NMR波谱分析技术鉴定了其中4个化合物的化学结构分别为6'-O-咖啡酰熊果苷(6'-Ocaffeoylarbutin,1)、水晶兰苷甲酯(monotropein methyl ester,2)、二氢水晶兰苷甲酯(dihydroxy monotropein methyl ester,3)和熊果苷(4)。化合物2和3为首次从越桔属植物中分离得到,其余化合物的结构正在解析中。4.对云南省武定县产樟叶越桔阴干果实的营养成分进行了测定分析,结果表明,樟叶越桔阴干果实营养成分丰富,粗纤维含量高达36.3%;含有16种氨基酸,氨基酸配比较为合理,其中必需氨基酸含量占氨基酸总量的38.9%,天门冬氨酸和谷氨酸等鲜味氨基酸含量丰富,占氨基酸总量的26.18%;含有9种矿质元素,常量元素的分布规律为钾钙镁磷钠,具有典型的高钾低钠特征,具有较高的营养价值和保健价值。
【关键词】：樟叶越桔 化学成分 分离鉴定 定量分析 营养成分 组织培养
【学位授予单位】：西南林业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S663.9
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-11
• 1 前言11-24
• 1.1 越桔属植物概述11-18
• 1.1.1 越桔属植物的引种栽培11-12
• 1.1.2 越桔属植物的组织培养12-13
• 1.1.3 越桔属植物的化学成分及生物活性13-18
• 1.2 樟叶越桔概述18-21
• 1.2.1 樟叶越桔的生物学特性和分布18-19
• 1.2.2 樟叶越桔的研究现状19-20
• 1.2.3 樟叶越桔主要化学成分研究现状20-21
• 1.3 研究的目的和意义21-23
• 1.4 试验流程23-24
• 2 樟叶越桔不同产地及部位中主要化学成分的含量分析24-33
• 2.1 试验材料、试剂和仪器24
• 2.2 试验方法24-26
• 2.2.1 HPLC检测条件24
• 2.2.2 标准曲线建立24-25
• 2.2.3 提取条件优化25-26
• 2.2.4 樟叶越桔不同产地及不同部位样品的含量测定26
• 2.3 结果与分析26-33
• 2.3.1 标准曲线的建立26-27
• 2.3.2 标准曲线的重现性和稳定性27-28
• 2.3.3 樟叶越桔的加标回收28
• 2.3.4 不同体积分数甲醇溶液对提取效果的影响28
• 2.3.5 不同超声时间和超声次数对提取效果的影响28-29
• 2.3.6 不同产地樟叶越桔中 1-3 的含量分析29-30
• 2.3.7 樟叶越桔不同部位中 1-3 的含量分析30-33
• 3 樟叶越桔的组织培养及其化学成分的定性分析33-40
• 3.1 试验材料33
• 3.2 试验流程图33
• 3.3 培养方法33-35
• 3.3.1 培养基及培养条件33
• 3.3.2 外植体处理33-34
• 3.3.3 腋芽诱导的启动34
• 3.3.4 继代与增殖34
• 3.3.5 生根培养34-35
• 3.4 结果与分析35-38
• 3.4.1 外植体的消毒处理35
• 3.4.2 腋芽诱导的启动培养35-36
• 3.4.3 继代与增殖培养36-37
• 3.4.4 生根培养37-38
• 3.5 无菌组培苗的初步定性分析38-40
• 4 樟叶越桔果实化学成分分离鉴定及营养成分分析40-54
• 4.1 樟叶越桔果实化学成分分离鉴定40-50
• 4.1.1 试验材料、试剂和仪器40
• 4.1.2 试验方法40-45
• 4.1.3 结果与分析45-50
• 4.1.3.1 结构鉴定45-48
• 4.1.3.2 波谱分析48-50
• 4.2 樟叶越桔果实的营养成分分析50-54
• 4.2.1 试验材料50
• 4.2.2 试验方法50
• 4.2.3 结果与分析50-54
• 5 结论与讨论54-57
• 5.1 樟叶越桔不同产地及部位中主要化学成分的含量分析54-55
• 5.2 樟叶越桔的组织培养及其化学成分的定性分析55
• 5.3 樟叶越桔果实化学成分的分离鉴定及营养成分分析55-57
• 5.3.1 樟叶越桔果实化学成分的分离鉴定55
• 5.3.2 樟叶越桔果实的营养成分分析55-57
• 参考文献57-62
• 附图62-66
• 个人简介66-67
• 导师简介67-68
• 致谢68

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本文编号：405958