白马山金线莲组培快繁关键技术研究及其药用成分比较

发布时间：2017-05-30 13:10

  本文关键词：白马山金线莲组培快繁关键技术研究及其药用成分比较，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：花叶开唇兰(Anoectochilus roxburghii (Wall.)Lindl.)即民间俗称的金线莲,同时拥有药用、食补和观赏三大价值。其来源地丰富,在我国境内包括福建、广西、台湾等东南沿海至西南9个省份均有分布。金线莲对生长环境的要求严苛,种子萌芽率低,生长缓慢,生产上多采用组培技术进行繁殖。本试验以福建宁德白马山的野生金线莲为主要研究对象,对其工厂化的组培、人工种植技术进行优化研究,对其不同代数的组培苗和福建省内不同产地的野生苗进行ISSR遗传稳定性和多样性分析,最后比较了它们之间多糖和总黄酮含量的区别。主要的研究内容如下：1福建白马山野生金线莲与其它产地野生金线莲的区别本试验通过对福建宁德白马山与省内、外其它产地野生金线莲外在形态、ISSR遗传多样性和多糖、总黄酮含量的比较,明确了它们之间的区别性。(1)通过将福建宁德白马山与省内南平、三明、龙岩、泉州,省外广西、广东、贵州野生金线莲相比较,发现产自宁德白马山的金线莲叶片宽大更似心形,叶脉红艳稀疏,叶缘较平滑,属于中等大小。(2)提取了福建宁德白马山,省内南平、三明、龙岩、泉州,省外广西、广东、贵州野生金线莲的多糖和总黄酮,结果显示：福建野生金线莲多糖含量高于广东、广西和贵州野生样本,其中宁德白马山金线莲的多糖含量为最高,泉州野生样本与之相近,省外广西野生样本的含量为最低；而总黄酮含量上,宁德白马山与三明野生金线莲无显著性差别并列第二,龙岩和广东样本的含量则并列第一(3)对白马山和省内南平、三明、龙岩、泉州等4个主产区的野生金线莲样本进行了DNA的提取,在优选出的11条通用引物的基础上经过ISSR-PCR扩增程序反应后,其总共扩增出了100条谱带,而多态性条带达到了72条,占总体的72%；以宁德白马山野生金线莲为比较标准,计算福建省内其它产地的野生样本变异率,可发现泉州野生金线莲为50.00%,龙岩野生金线莲为62.50%,三明野生金线莲为58.33%,南平野生金线莲为60.42%；根据聚类分析的结果,福建省内不同产地的野生样本遗传相似系数介于0.58-0.92之间,遗传距离较大,可见福建省内各地区的野生金线莲存在着丰富的多样性。2福建白马山金线莲组织培养工厂化育苗的主要技术研究本试验通过将福建白马山金线莲作为主要的研究对象,探究了无菌体系的建立,不同的处理对金线莲茎段增殖的影响,不同的培养基对金线莲芽苗生根的作用,不同的添加物组合对金线莲壮苗培养的效果,最后比较了六种LED不同的光质对金线莲组培苗生长的影响。(1)通过比较金线莲不同的取材部位在0.1%升汞溶液中不同的浸泡时间,研究最佳的灭菌组合。结果为金线莲的顶部茎段最适合作为建立无菌体系的部位,同时采用9 min的消毒时间效果最佳,其存活率为76.67%,污染率为21.67%。(2)增殖阶段通过不同浓度的MS培养基、6-BA和NAA,配以不同的茎段位置设计了一个四因素、三水平的正交试验。试验结果表明,最佳的组合是以金线莲中部茎段为增殖材料,其更优于顶芽和基部,在1/2 MS+6-BA 2.4 mg/L+NAA0.1 mg/L+白糖25g/L的培养基上,增殖系数可达到4.02。(3)通过以1/2MS为基本培养基,采用四因素三水平的正交试验,探究AC.IBA以及NAA对于金线莲芽苗生根的影响。试验结果显示,AC和IBA对金线莲生根的影响显著。筛选出金线莲最佳的生根组合是1/2MS+AC 0.5 g/L+NAA 1.5 mg/L+IBA 1.5 mg/L+白糖30 g/L,其平均根数达到2.1条。(4)以白马山金线莲芽苗为材料,在优选的生根培养基上比较白糖、香蕉泥、土豆泥、洋葱泥和花宝1#这些添加物的组合对其壮苗的影响。经过赋值评分法对数据的统计,发现香蕉泥的添加在金线莲壮苗中起到主要的作用。即最适宜的壮苗培养基为1/2MS+NAA 1.5 mg/L+IBA 1.5 mg/L+AC 0.5 g/L+白糖20 g/L+香蕉泥60g/L+土豆泥60 g/L+洋葱泥60 g/L+花宝1#2 g/L。(5)本试验在优化的壮苗配方基础上,使用单因素法旨在通过对比LED红、黄、蓝、绿、白、暖白光,并以日光灯为对照,研究不同的光源对金线莲组培苗生长的影响。结果发现LED暖白光的效果最佳,其中红、黄、绿容易使植株出现徒长、细弱的现象,蓝光对苗的生长有益能够抑制拔高,而暖白和白光则能够使植株粗壮,增大叶面积。3福建白马山金线莲组培苗人工移栽的试验研究选择组培3个月左右,株高达到5-6 cm,有2-3条主根,4片以上叶片,生长健壮的植株为移栽对象。比较不同的种植基质,广谱性杀菌剂的组合以及两种缓释肥的不同用量对人工移栽的影响。(1)在对比不同基质配比的试验中,发现泥炭：珍珠岩：蛭石：松树皮=2：1：1：1是最佳的移栽基质,成活率100%,长势最优。(2)在优化的移栽基质上,分别以不同倍数的多菌灵、百菌清、代森锰锌、甲基托布津以及腐霉利两两配对,对移栽苗进行轮换浇施,比较它们对金线莲病害的防治。结果为以50%的多菌灵1000倍配以70%的甲基托布津1000倍轮换使用对病害的防治效果最佳,同时也促进了植物的生长,增加产量。(3)按照好康多1号和奥绿601两种缓释肥不同的施用量对白马山金线莲移栽苗进行施用,并与清水对照组比较。通过赋值评分法的处理,试验结果为在15寸种植盘移栽时施以好康多1号13g是最有利于金线莲的增产,其鲜重、粗度、高度增量比对照分别增加了145.16%、400%以及193%,叶大舒展、叶脉鲜红且有两片新叶。4福建白马山金线莲组培苗遗传稳定的ISSR分析本试验对福建白马山金线莲0代、3代、6代和9代的组培苗进行了ISSR遗传稳定性的检测分析。使用11条通用引物对不同代数的福建白马山金线莲组培苗的DNA进行PCR的扩增,结果显示扩增出的总条带为96条,总的多态性带数为30条,多态性达到31.25%。与初代相比3代、6代、9代的变异率分别为9.38%、10.42%、12.50%。0-9代的遗传相似系数在0.813-0.990之间,遗传相似性很大。虽然从第3代开始,随着代数的上升变异率会逐步扩大,组培苗发生了一定的变异,但变异率上升幅度并不大,其遗传性状依然较为稳定,主要药用成分含量与野生植株差别不大,可作为生产使用。5福建白马山金线莲与其它产地金线莲组培苗药用成分的测定与分析本试验以福建白马山金线莲组培苗和移栽苗为主,以省外其它产地的为比照,探究它们主要药用成分中多糖和总黄酮含量的变化。(1)将福建宁德白马山、广西、江西和台湾金线莲培养3个月左右的瓶苗与其移栽2和3个月的大棚苗进行多糖和总黄酮的提取比较。发现相较于其它样本,白马山金线莲多糖含量较高,总黄酮含量为最高。而且在移栽初期各品种无论是多糖还是总黄酮含量都有所降低,但随着种植时间的延长,它们都呈现出了上升的趋势。(2)福建宁德白马山金线莲在经过LED红、黄、蓝、绿、白、暖白光下培养90 d后,测定其与日光灯处理下苗的多糖、总黄酮含量的变化,发现LED中红光最有益于多糖的积累,LED蓝、绿光则最能促进总黄酮含量的增加。
【关键词】：白马山金线莲 组织培养 移栽 ISSR 多糖 总黄酮
【学位授予单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S567.239
【目录】：

• 缩写词10-12
• 摘要12-15
• Abstract15-20
• 第一章 前言20-35
• 1 金线莲生物学特性及药用成分概述20-23
• 1.1 金线莲生物学特性21
• 1.2 金线莲原植物的探讨21-22
• 1.3 金线莲化学成分和药效作用的研究进展22-23
• 2 金线莲工厂化试管育苗技术的研究进展23-31
• 2.1 金线莲组织培养的研究进展23-26
• 2.2 金线莲组培苗移栽技术的研究进展26-29
• 2.3 LED光源在植物培养中应用的研究前景29-31
• 3 ISSR分子标记技术的研究进展31-32
• 3.1 ISSR分子标记技术的原理31
• 3.2 ISSR分子标记技术在植物中的应用研究31-32
• 3.3 ISSR分子标记技术应用于金线莲的研究进展32
• 4 本试验的意义和主要内容32-35
• 4.1 本试验的研究意义32-33
• 4.2 本试验的主要研究内容33-35
• 第二章 福建白马山野生金线莲与其它产地野生金线莲的比较分析35-53
• 第一节 福建白马山和其它产地野生金线莲多糖和总黄酮含量的差异35-46
• 1 材料与方法35-36
• 1.1 材料来源与处理35-36
• 1.2 仪器和药品36
• 1.3 试验方法36
• 1.4 计算方法36
• 2 结果与分析36-45
• 2.1 福建白马山和其它产地野生金线莲的生物学特性观察36-37
• 2.2 福建白马山和其它产地野生金线莲多糖含量的分析37-41
• 2.3 福建白马山和其它产地野生金线莲总黄酮含量的分析41-45
• 3 讨论45-46
• 3.1 福建白马山与其它产地野生金线莲存在生物学特性的差异45
• 3.2 福建白马山野生金线莲的多糖含量较高45-46
• 3.3 福建白马山野生金线莲具有较高的总黄酮含量46
• 第二节 福建白马山和省内其它产地野生金线莲ISSR遗传多样性的鉴定46-53
• 1 材料与方法46-48
• 1.1 材料46-47
• 1.2 仪器与药品47
• 1.3 金线莲DNA的提取47
• 1.4 ISSR-PCR扩增反应程序47
• 1.5 引物的选择47-48
• 1.6 数据统计和计算方法48
• 2 结果与分析48-51
• 2.1 福建白马山与省内其它产地野生金线莲DNA琼脂糖凝胶电泳分析48-49
• 2.2 福建白马山与省内其它产地野生金线莲DNA纯度检测49
• 2.3 福建白马山与省内其它产地野生金线莲ISSR-PCR的扩增反应结果49-50
• 2.4 福建白马山与省内其它产地野生金线莲的遗传变异率统计50
• 2.5 福建白马山与省内其它产地野生金线莲的聚类分析结果50-51
• 3 讨论51-53
• 第三章 福建白马山金线莲组织培养工厂化育苗的关键技术研究53-86
• 第一节 福建白马山金线莲无菌体系的建立53-56
• 1 材料和方法53-54
• 1.1 材料53-54
• 1.2 试验方法54
• 1.3 基本培养条件54
• 1.4 统计方法54
• 2 结果与分析54-55
• 2.1 不同灭菌时间和取材位置对白马山金线莲外植体消毒效果的影响54-55
• 2.2 灭菌后的外植体萌芽和生长状况55
• 3 讨论55-56
• 第二节 福建白马山金线莲增殖条件的筛选56-63
• 1 材料和方法56-57
• 1.1 材料56
• 1.2 试验方法56-57
• 1.3 基本培养条件57
• 1.4 统计方法和数据分析57
• 2 结果与分析57-63
• 2.1 不同处理对白马山金线莲茎段增殖的影响和总体评价57-59
• 2.2 不同处理对白马山金线莲茎段增殖结果的显著性分析59-63
• 3 讨论63
• 3.1 白马山金线莲的中部茎段更有益于其增殖63
• 3.2 1/2MS培养基对白马山金线莲增殖起到重要的作用63
• 第三节 福建白马山金线莲的生根研究63-70
• 1 材料和方法64-65
• 1.1 材料64
• 1.2 试验方法64
• 1.3 基本培养条件64
• 1.4 统计方法和数据分析64-65
• 2 结果与分析65-69
• 2.1 不同培养基对白马山金线莲芽苗生根的影响和总体评价65-66
• 2.2 不同培养基对白马山金线莲芽苗生根结果的显著性分析66-69
• 3 讨论69-70
• 3.1 AC显著促进白马山金线莲的生根69
• 3.2 适宜浓度的IBA有助于白马山金线莲芽苗的生根69-70
• 第四节 不同添加物组合对福建白马山金线莲壮苗培养的影响70-79
• 1 材料和方法70-71
• 1.1 材料70
• 1.2 试验方法70
• 1.3 基本培养条件70-71
• 1.4 统计方法和数据分析71
• 2 结果与分析71-79
• 2.1 不同的添加物组合对白马山金线莲壮苗的影响和总体评价71-74
• 2.2 不同添加物组合对白马山金线莲壮苗结果的显著性分析74-79
• 3 讨论79
• 3.1 香蕉泥的添加在金线莲壮苗过程中起到重要的作用79
• 3.2 花宝1#能够有效的促进和加快
  
  本文编号：407201
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