Cry2Ab转基因拟南芥的抗虫作用及其对HearNPV增效作用的研究

发布时间：2017-06-09 15:02

  本文关键词：Cry2Ab转基因拟南芥的抗虫作用及其对HearNPV增效作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：本研究以拟南芥(Arabidopsis thaliana)为植物载体,利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的花序侵染法对拟南芥转化了Cry2Ab外源基因,并进行了其对棉铃虫核型多角体病毒(Helicoverpa armigera nucleopolyhedrovirus,HearNPV)增效作用研究,取得如下结果:1、利用农杆菌介导的花序侵染法(Floral dip)转化拟南芥,通过Basta除草剂筛选,获得了7株表现型为阳性的Cry2Ab转基因拟南芥株系,通过PCR检测,发现7个株系的基因组中均能够检测到目的条带,从而初步确定为阳性的转化拟南芥株系。2、通过RT-PCR检测,表明Cry2Ab在其中的5个转基因株系中有表达,分别为株系A、B、C、E、G。其中,株系B的相对表达量最高,株系G的相对表达量最低,而野生型拟南芥中无表达。3、通过生物测定试验表明,株系B对棉铃虫的致死率为65.67%,株系C为50.33%,株系A为47.33%,株系E为46.67%,株系G为42.67%。取食Cry2Ab转基因拟南芥会显著降低虫重,并使化蛹延迟。4、Cry2Ab转基因拟南芥对Hear NPV的增效作用试验表明,饲喂株系B和Hear NPV的棉铃虫的LT50和LT90比对照组分别缩短了36.05%和39.95%。饲喂株系G和Hear NPV的棉铃虫的LT50和LT90比对照组分别缩短了17.96%和25.67%。结果表明,Cry2Ab转基因拟南芥具有显著的抗虫活性,抑制棉铃虫的生长发育,并能显著增强HearNPV的毒力。
【关键词】：拟南芥 Cry2Ab 转基因植物 Hear NPV 棉铃虫 增效
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S432.21;S476.13
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 第一章 文献综述9-13
• 1.1 农杆菌介导的转基因技术简介9-10
• 1.1.1. 根癌农杆菌简介9-10
• 1.1.2 转基因植物筛选方法10
• 1.2 拟南芥转基因简介10-11
• 1.2.1 拟南芥（Arabidopsis thaliana）10
• 1.2.2 拟南芥转基因方法10-11
• 1.3 Bt毒素蛋白简介11
• 1.4 杆状病毒简介11
• 1.5 本研究的目的与意义11-13
• 第二章 实验材料与方法13-26
• 2.1 实验材料13-17
• 2.1.1 植物材料13
• 2.1.2 供试虫体13
• 2.1.3 供试病毒13
• 2.1.4 仪器13-14
• 2.1.5 化学试剂14
• 2.1.6 工具酶和试剂盒14-15
• 2.1.7 菌株和质粒15
• 2.1.8 载体15-16
• 2.1.9 培养基及主要试剂配制16-17
• 2.2 实验方法17-26
• 2.2.1 重组植物表达载体的构建17-20
• 2.2.2 重组载体Cry2Ab-pSR784d转化农杆菌LBA440420-21
• 2.2.3 根癌农杆菌介导的拟南芥花序侵染法21-22
• 2.2.4 转基因拟南芥的筛选22
• 2.2.5 T_3代转基因植株的PCR检测22-23
• 2.2.6 T_3代转基因植株的定量RT-PCR（Quantitative RT-PCR）分析23-25
• 2.2.7 Cry2Ab转基因拟南芥株系对棉铃虫致死率和日累积虫重的测定25
• 2.2.8 Cry2Ab转基因拟南芥对HearNPV增效作用的试验25-26
• 第三章 实验结果分析26-33
• 3.1 Cry2Ab基因的克隆与重组植物表达载体的构建26-27
• 3.2 转基因植株的获得27-28
• 3.3 T_3代转基因植株的PCR检测28
• 3.4 T_3代转基因植株的实时荧光定量RT-PCR分析28-29
• 3.5 Cry2Ab转基因拟南芥株系对棉铃虫累积死亡率的测定29
• 3.6 棉铃虫幼虫日积累增重的测定29-30
• 3.7 Cry2Ab转基因拟南芥对HearNPV的增效作用30-33
• 3.7.1 棉铃虫致死时间的测定30-31
• 3.7.2 棉铃虫日累积增重的测定31-33
• 第四章 结论与讨论33-35
• 4.1 结论33
• 4.2 讨论33-35
• 参考文献35-38
• 致谢38-39
• 作者简介39

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