四川部分地区副猪嗜血杆菌的耐药性检测及其与PCV2、PRRSV的混合感染调查

发布时间：2017-06-14 01:07

  本文关键词：四川部分地区副猪嗜血杆菌的耐药性检测及其与PCV2、PRRSV的混合感染调查，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis, HPS)是存在于上呼吸道的条件性致病菌,一些强毒力的菌株能对上呼吸道的防御系统造成损伤,引发宿主的全身感染,造成养殖户较大的经济损失。本研究从四川省多地猪场采集疑似副猪嗜血杆菌病患猪病料,进行副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验,并对副猪嗜血杆菌与圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)混合感染进行了抗原抗体检测。主要研究结果如下：1.四川地区副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验2014年2月底到11月底,从四川省雅安、成都、西昌等不同地区采集疑似副猪嗜血杆菌病患猪病料232份,进行细菌分离培养,经革兰氏染色观察、生化鉴定、PCR鉴定,从其中15个地区成功分离出48株副猪嗜血杆菌。选取其中7株副猪嗜血杆菌分离株进行16SrRNA基因测序比较,核酸同源性较高,都在95.9%以上。对分离出的48株副猪嗜血杆菌进行了药敏试验,结果表明分离株普遍对氟苯尼考、头孢噻肟、菌必治、强力霉素和利福平敏感,对复方新诺明、林可霉素、青霉素、氨苄西林、庆大霉素、丁胺卡那、阿莫西林耐药。试验发现48株副猪嗜血杆菌,其耐药谱都不尽相同,同一猪场分离的不同菌株,其耐药性差距较小。2.HPS、PCV2、PRRSV抗原抗体混合感染调查利用PCR和RT-PCR的方法分别对采集的病料进行PCV2和PRRSV检测。检出副猪嗜血杆菌与PCV2混合感染率为64.6%；副猪嗜血杆菌与PRRSV混合感染率为58.3%。副猪嗜血杆菌与PCV2和PRRSV混合感染率为29.1%。本研究主要采集了2014年保育猪的血清进行抗体检测,调查表明,四川地区保育猪HPS抗体阳性率为64.10%,并且四川地区的猪只均未免疫过副猪嗜血杆菌免疫,表明四川地区保育猪普遍存在副猪嗜血杆菌感染。未免疫PCV2疫苗的血清抗体阳性率为42.06%,未免疫PRRSV疫苗的血清抗体阳性率为36.67%。HPS与PCV2混合感染率为30.83%,HPS与PRRSV混合感染率为30%,HPS、PCV2、PRRSV的混合感染率为29.12%。
【关键词】：副猪嗜血杆菌 耐药性 PCV2 PRRSV 混合感染
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S858.28
【目录】：

• 中文摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 符号说明7-11
• 第一章 文献综述11-21
• 1 副猪嗜血杆菌病的研究现状11-18
• 1.1 病原学11
• 1.2 流行病学11-12
• 1.3 致病机理12-13
• 1.4 发病表现13-14
• 1.5 诊断方法14-16
• 1.5.1 病原学诊断14
• 1.5.2 血清学诊断技术14-15
• 1.5.3 分子生物学诊断技术15-16
• 1.6 我国副猪嗜血杆菌的耐药性研究16-17
• 1.7 副猪嗜血杆菌的防治17-18
• 2 副猪嗜血杆菌与其他病原混合感染研究18-19
• 2.1 副猪嗜血杆菌与PCV2的混合感染研究18
• 2.2 副猪嗜血杆菌与PRRSV的混合感染研究18-19
• 2.3 副猪嗜血杆菌与细菌的混合感染研究19
• 3 本研究的目的与意义19-21
• 第二章 副猪嗜血杆菌的分离鉴定与耐药性调查21-36
• 1 试验材料21-23
• 1.1 病料来源21
• 1.2 菌种来源21
• 1.3 主要试剂21-22
• 1.4 主要培养基的制备22
• 1.5 主要仪器22-23
• 2 试验方法23-25
• 2.1 病料细菌分离23
• 2.2 革兰氏染色观察23
• 2.3 生化鉴定23
• 2.4 PCR鉴定23-24
• 2.5 PCR产物测序及同源性比对24
• 2.6 16SrRNA基因序列分析24-25
• 2.7 分离株的药敏试验25
• 3 试验结果25-33
• 3.1 患猪病状及剖检情况25-26
• 3.2 病料细菌分离26
• 3.3 分离株革兰氏染色结果26-27
• 3.4 分离株生化试验结果27
• 3.5 PCR鉴定结果27-28
• 3.6 HPS分离结果28-29
• 3.7 副猪嗜血杆菌的16SrRNA序列分析结果29-32
• 3.7.1 16SrRNA基因进化树分析29-30
• 3.7.2 16SrRNA基因同源性分析30-32
• 3.8 药敏试验结果32-33
• 4 讨论与小结33-36
• 第三章 副猪嗜血杆菌与PCV2、PRRSV混合感染情况调查36-50
• 1. 实验材料36-38
• 1.1 组织病料来源36
• 1.2 血清材料36-37
• 1.3 主要试剂37-38
• 1.4 主要设备38
• 2 试验方法38-41
• 2.1 副猪嗜血杆菌与PCV2的混合感染情况调查38-39
• 2.1.1 病毒DNA的提取38
• 2.1.2 PCR鉴定38-39
• 2.2 副猪嗜血杆菌与PRRSV的混合感染情况调查39-40
• 2.2.1 病毒RNA的提取39
• 2.2.2 反转录39
• 2.2.3 将反转录产物进行PCR鉴定39-40
• 2.3 副猪嗜血杆菌与PCV2、PRRSV的血清学流行病学调查40-41
• 2.3.1 副猪嗜血杆菌血清流行病学调查40
• 2.3.2 PCV2、PRRSV的血清流行病学调查40-41
• 3 试验结果41-45
• 3.1 PCV2的PCR鉴定结果41
• 3.2 PRRSV的PCR鉴定结果41-42
• 3.3 HPS与PCV2、PRRSV抗原混合感染情况42
• 3.4 血清流行病学调查结果42-45
• 3.4.1 PCV2血清流行病学调查结果42
• 3.4.2 PRRSV血清流行病学调查结果42-43
• 3.4.3 副猪嗜血杆菌杆菌血清流行病学调查结果43-44
• 3.4.4 血清流行病学的混合感染调查结果44-45
• 4 讨论与小结45-50
• 4.1 关于猪圆环病检测结果分析45
• 4.2 关于蓝耳病检测结果分析45-47
• 4.3 关于副猪嗜血杆菌病检测结果分析47-48
• 4.4 混合感染情况分析48-50
• 第四章 结论50-51
• 参考文献51-58
• 致谢58-59
• 附录一 副猪嗜血杆菌药敏结果统计表59-62
• 附录二 测序序列62-64

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