四川地区腹泻仔猪群猪圆环病毒Ⅱ型感染情况的调查

发布时间：2017-06-14 04:07

  本文关键词：四川地区腹泻仔猪群猪圆环病毒Ⅱ型感染情况的调查，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)是可以引起仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、呼吸道疾病综合征(PRDC)、皮炎与肾病综合征(PNDS)、肉芽肿性肠炎、坏死性淋巴结炎等多种临床症状的一种免疫抑制病毒。PCV2诱发仔猪相关肠炎疾病是PCVAD的临床症状之一,其表现为仔猪腹泻、消瘦、脱水,抗生素治疗无效后死亡；在肠道和相关淋巴结中均能够检出PCV2病原,剖检可发现肠道有组织学的特征性病变。本文针对2013-2014年四川省13市腹泻仔猪群的PCV2感染情况进行了较全面的流行病学调查,主要研究结果如下：1、四川地区腹泻仔猪群PCV2感染率的统计本研究对来自四川省13个地市的腹泻仔猪样品436份运用PCR方法进行检测并分析,结果显示,436份腹泻样品中PCV2阳性样本312份,总阳性率为71.55%。本次所采样本的13市中腹泻仔猪群PCV2阳性率最高的是攀枝花市为88.89%,最低的是德阳市阳性率为64.51%,同时PCV2与TGEV、PEDV两种仔猪腹泻的相关病毒的混合感染率依次为4.35%、42.88%。1-6周龄腹泻仔猪PCV2核酸阳性率分别为82.88%、86.66%、57.38%、44.11%、45.83%和36.84%。全年四季度采集样本的PCV2核酸阳性率依次为65.78%、66.90%、64.06%、81.52%。各周龄段PCV2阳性腹泻仔猪全血、血清、粪便的总检出率分别为36.67%、30%、83.33%,各组织器官PCV2总检出率由高到低依次为76.92%(腹股沟淋巴结)、71.15%(肠系膜淋巴结)、61.53%(肠)、54.81%(脾脏)、47.11%(肺脏)、29.80%(肝脏)、25%(颌下淋巴结)、14.42%(肾脏)、0(脑)。以上结果表明,腹泻仔猪群内PCV2存在较高的感染率,且除淋巴器官和淋巴组织外,肠道可能为PCV2感染的另一重要靶器官。2、四川地区腹泻仔猪群PCV2分子流行病学调查通过PCR及分子克隆等分子生物学相关技术,对收集的312份PCV2阳性组织病料进行不同基因型PCV2分析。结果显示,PCV2a单独感染占15.12%,PCV2b单独感染率占63.44%,二者混合感染率占21.84%。表明2014年度四川省内腹泻仔猪群不论从单独还是混合感染PCV2b的感染率远大于PCV2a;本试验获得的四川省19株PCV2毒株之间的同源性为94.3%-100%；四川省19株PCV2毒株中16株属于GroupI,3株属于GroupⅡ。19株四川省PCV2毒株间Rep蛋白氨基酸同源性为96.8%-100%,表明Rep基因确属PCV2高度保守序列,变异程度远低于全基因序列。Cap蛋白的核苷酸序列分析结果显示19株四川省PCV2毒株ORF2基因核苷酸同源性为91.3%-99.9%,推导的氨基酸同源性为94.5%-100%。与世界和国内参考株的最大Kimura距离分别为6.09%和4.84%；转换／颠换平均值(R)为0.94和0.68；氨基酸替代倾向指数为3.8%和2.5%。与美国株(FJ218000)相比共有25个氨基酸的突变。Cap蛋白这些位点氨基酸突变的积累效应可能会引起抗原漂移,可能会使PCV2免疫原性的发生改变。
【关键词】：四川省 仔猪腹泻 猪圆环病毒Ⅱ型 感染情况 分子流行病学
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S858.28
【目录】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 缩略词表8-11
• 第一章 文献综述及选题的目的和意义11-21
• 1. 猪圆环病毒概述11-14
• 1.1 猪圆环病毒Ⅱ型分类简介11-12
• 1.2 猪圆环病毒Ⅱ型的相关特性12
• 1.3 猪圆环病毒Ⅱ型的基因组结构12-13
• 1.4 猪圆环病毒Ⅱ型的基因型的划分13
• 1.5 猪圆环病毒Ⅱ型的编码蛋白13-14
• 2. 猪圆环病毒(PCV2)病的流行病学14-19
• 2.1 PCV2引发的相关性疾病(PCVD)14-15
• 2.2 PCV2感染引起相关肠炎性疾病及作用机制15-17
• 2.2.1 PCV2单独感染引起的仔猪肠炎性疾病15-16
• 2.2.2 PCV2与多病原混合感染引起的仔猪肠炎性疾病16-17
• 2.3 PCVD的诊断17-19
• 2.3.1 聚合酶链式反应17-18
• 2.3.2 酶联免疫吸附试验18
• 2.3.3 间接免疫突光技术18-19
• 2.3.4 免疫过氧化物酶细胞单层试验19
• 2.3.5 病毒的分离与鉴定19
• 3. 研究的目的与意义19-21
• 第二章 四川地区腹泻仔猪圆环病毒Ⅱ型感染率的统计21-34
• 1 材料与方法21-22
• 1.1 实验毒株21
• 1.2 主要试剂及溶液配制21-22
• 1.3 主要设备仪器22
• 2. 实验方法22-26
• 2.1 样本采集22-23
• 2.2 引物的设计与合成23-24
• 2.3 病毒DNA的抽提及PCR扩增24-25
• 2.4 腹泻仔猪PCV2核酸的检测25-26
• 2.4.1 不同地区腹泻仔猪PCV2流行情况调查25
• 2.4.2 不同周龄腹泻仔猪PCV2流行情况调查25-26
• 2.4.3 不同季度腹泻仔猪PCV2感染情况调查26
• 2.4.4 PCV2与其他引起腹泻的病毒混合感染情况调查26
• 2.4.5 PCV2在猪各脏器及排泄物检出率的统计26
• 2.4.6 数据处理26
• 3. 结果26-31
• 3.1 四川地区猪群PCV2病原学监测26-31
• 3.1.1 腹泻仔猪组织样品PCV2与其他腹泻病毒的检测结果26-28
• 3.1.2 不同周龄腹泻仔猪PCV2流行情况调查结果28-29
• 3.1.3 不同季度腹泻仔猪PCV2感染情况调查结果29
• 3.1.4 腹泻仔猪血液和排泄物PCV2的检出率29-30
• 3.1.5 腹泻仔猪主要组织器官PCV2的检出率30-31
• 4 讨论31-34
• 第三章 四川地区腹泻仔猪中PCV2分子流行病学调查34-53
• 1 材料34-35
• 1.1 试剂34
• 1.2 样品34
• 1.3 引物34-35
• 2. 方法35-37
• 2.1 PCV2a与PCV2b的鉴别35
• 2.2 PCV2全基因的克隆与序列测定35-36
• 2.3 PCV2全基因序列特点及进化分析36
• 2.4 ORF1核苷酸和氨基酸序列的分析36
• 2.5 ORF2核苷酸和氨基酸序列的分析36-37
• 3. 结果37-50
• 3.1 PCV2不同基因型在四川腹泻仔猪群的流行情况37-39
• 3.2 PCV2全基因组的扩增与序列测定39-41
• 3.3 PCV2全基因组序列分析41-50
• 3.3.1 全基因组序列结构分析41
• 3.3.2 同源性与进化分析41-43
• 3.3.3 ORF1及其推导氨基酸序列分析43-46
• 3.3.4 ORF2其推导氨基酸序列分析46-50
• 4. 讨论50-53
• 全文结论53-54
• 参考文献54-58
• 致谢58

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