苋菜活性物的提取分离及抑菌作用研究

发布时间：2017-06-20 21:12

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【摘要】：本文在前期研究基础上从苋菜活性物的提取、苋菜活性物提取工艺优化及抑菌能力、苋菜活性物的分离纯化和鉴定三个部分全面系统的对苋菜中的抑菌活性物进行了研究,以期为开发苋菜作为新的植物源生防试剂,拓展苋菜利用的新功能提供科学依据,研究内容与结果如下：1苋菜活性物对供试的植物病原细菌柑橘溃疡病菌(抑制率66.29%)、水稻细菌性条斑病菌(抑制率63.39%)、烟草青枯病菌(抑制率42.19%)、西瓜细菌性果斑病菌(抑制率36.71%)、白菜软腐病菌(抑制率33.19%)、大肠杆菌(抑制率28.33%)；植物病原真菌仅对水稻纹枯病菌(抑制率62.1%)表现出抑制活性,而对其他的供试病原真菌则没有抑制活性。2不同有机溶剂提取对苋菜活性物抑菌活性影响不一样,依次为乙酸乙酯(抑制率60.79%)水(22.69%)丙酮=无水乙醇=石油醚,其中乙酸乙酯提取物抑制效果略好于对照8mg/mL硫酸链霉素(56.98%)；苋菜活性物存在于苋菜的叶、根、茎,其中叶和根的含量较高,茎的含量较低。3静置、静置超声和振荡3种提取方式对苋菜活性物抑菌活性影响差异较大,其中振荡提取效果最好,抑制率为38.73%,其他2种提取方式仅有26.35%和27.14%。；无水乙醇、醇水混合(1：5)以及蒸馏水3种溶媒24h的抑制率相差不大,依次为49.3%、45.9%和51.4%；但蒸馏水的抑菌持效性更久,72h后还有41.2%,好于其他2种溶媒的27.2%和40.2%。4不同干燥方式中,经过阳光曝晒和鼓风机烘干的苋菜抑菌活要优于自然阴干的苋菜,抑制率大小为71.69%63.50%57.14%；不同生长期苋菜抑菌活性不一致,生长期的苋菜抑菌活性最强,抑制率为63.49%；幼嫩期和衰老期苋菜抑菌活性较弱,抑制率分别仅有38.62%和30.05%。5单因素实验确定苋菜活性物提取最佳条件：料液比1：20、温度30℃、提取次数2次、提取时间24h。L9(34)正交试验探究苋菜活性物提取最佳条件：料液比1：5、温度30℃、提取时间24h,在此条件下对柑橘溃疡病菌抑制率为73.81%。6苋菜活性物对水稻细菌性条斑病菌和柑橘溃疡病菌EC50最小分别为19.87mg/mL和26.81mg/mL;其次是烟草青枯病菌和白菜软腐病菌,EC50在100mg/mL以下,分别为81.72mg/mL和93.84mg/mL;然后是西瓜细菌性果斑病菌,EC50为141.1mg/mL;大肠杆菌的EC50最大,EC50值达到了265.46mg/mL。7不同极性有机溶剂对苋菜活性物萃取抑菌能力依次为乙酸乙酯萃取物(64.29%)水相萃取物(42.86%)氯仿萃取物(20.37%)石油醚萃取物。②TLC筛选柱层析最佳洗脱剂为石油醚：丙酮=3：2；柱层析分离合并到7个馏分,紫外分析仪全波段扫描波长依次为Ⅰ号211nm、Ⅱ号271nm、Ⅲ号291nm、Ⅳ号319nm、Ⅴ号405nm、Ⅵ号504nm、 Ⅶ号669nm,其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和V号具有抑菌活性,对柑橘溃疡病菌抑制率依次为Ⅲ号(57.04%)V号(26.88%)Ⅱ号(26.08%)Ⅰ号(24.6%)。上述试验结果表明苋菜活性物对常见植物病原菌均有较强的抑制作用,具有开发成植物源生防制剂的巨大潜力,为开发新型、安全、环保的植物源农药提供了新思路。
【关键词】：苋菜 提取工艺 抑制作用 分离纯化 结构
【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S482.292
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 1 绪论11-22
• 1.1 苋菜概述11-14
• 1.2 植物活性成分提取分离技术14-18
• 1.3 植物活性成分应用研究进展18-21
• 1.4 研究目的与意义21-22
• 2 材料与方法22-31
• 2.1 试验材料22-23
• 2.1.1 供试植物22
• 2.1.2 供试菌种22
• 2.1.3 供试培养基22-23
• 2.2 主要试剂与仪器23-24
• 2.2.1 供试试剂23
• 2.2.2 主要仪器与设备23-24
• 2.3 试验方法24-31
• 2.3.1 菌种活化与活性测定24
• 2.3.2 苋菜活性物提取24-26
• 2.3.3 苋菜活性物提取工艺及抑菌能力26-27
• 2.3.4 苋菜活性物分离纯化与鉴定27-30
• 2.3.5 数据处理与分析30-31
• 3 结果与分析31-47
• 3.1 苋菜活性物提取31-37
• 3.1.1 苋菜活性物抑菌谱测定31-32
• 3.1.2 苋菜不同部位抑菌活性物含量32
• 3.1.3 不同浸提溶剂对苋菜活性物提取效果32-33
• 3.1.4 苋菜活性物最佳溶媒选择33-34
• 3.1.5 不同浸提方法对苋菜活性物提取效果34-35
• 3.1.6 不同干燥方式苋菜抑菌活性物含量35-36
• 3.1.7 不同生长期苋菜抑菌活性物含量36-37
• 3.2 苋菜活性物提取工艺及抑菌能力37-44
• 3.2.1 料液比对苋菜活性物浸提效果影响37-38
• 3.2.2 提取温度对苋菜活性物浸提效果影响38-39
• 3.2.3 提取次数对苋菜活性物浸提效果影响39
• 3.2.4 提取时间对苋菜活性物浸提效果影响39-40
• 3.2.5 正交试验40-42
• 3.2.6 苋菜活性物对6种植物病原细菌最小抑菌浓度(MIC)42-43
• 3.2.7 苋菜活性物对6种植物病原细菌室内毒力测定43-44
• 3.3 苋菜活性物分离纯化与鉴定44-47
• 3.3.1 不同溶剂萃取物对柑橘溃疡病菌抑菌活性44
• 3.3.2 硅胶柱层析洗脱剂选择44-45
• 3.3.3 柱层析洗脱分离45
• 3.3.4 柱层析合并馏分溶解性及抑菌活性45-47
• 4 结论与讨论47-49
• 4.1 结论47
• 4.2 讨论47-49
• 5 论文创新点49-50
• 参考文献50-60
• 附录60-63
• 致谢63-64
• 作者简介64

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