饲料中谷氨酰胺和核苷酸对半滑舌鳎稚鱼生长、消化酶活力、抗氧化酶活力及基因表达的影响

发布时间：2017-06-25 19:10

  本文关键词：饲料中谷氨酰胺和核苷酸对半滑舌鳎稚鱼生长、消化酶活力、抗氧化酶活力及基因表达的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：以35日龄半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)稚鱼为研究对象,共设计4种谷氨酰胺添加量分别为0.0%、0.5%、1.0%和2.0%的等氮等脂微颗粒饲料(游离谷氨酰胺实测值分别为0.03%、0.46%、0.91%、1.73%),6种核苷酸混合物(Sigma:IMP:AMP:GMP:UMP:CMP=1:1:1:1:1)添加量分别为0.000%、0.018%、0.036%、0.054%、0.072%和0.090%的等氮等脂微颗粒饲料,每天饱食投喂5次,在流水养殖系统中进行为期30 d的摄食生长实验,探究饲料中谷氨酰胺和核苷酸水平对半滑舌鳎稚鱼生长性能、消化酶活力、抗氧化能力的影响,并从分子水平上研究谷氨酰胺和核苷酸的作用机制,主要研究内容和结果如下：1.谷氨酰胺对半滑舌鳎稚鱼生长、消化酶活力和IGF-1mRNA表达的影响。研究结果表明,饲料中添加0.5%-2.0%谷氨酰胺时,半滑舌鳎稚鱼存活率、终末体长、终末体重和特定生长率显著高于未添加组(P0.05)。随着饲料中谷氨酰胺添加量增加,肠段胰蛋白酶活力先显著上升,随后显著下降(P0.05),但胰段胰蛋白酶活力在各处理组间差异不显著(P0.05)。肠段和胰段淀粉酶活力在2.0%谷氨酰胺添加组显著高于未添加组(P0.05)。随着饲料中谷氨酰胺添加量升高,舌鳎稚鱼肠道刷状缘中碱性磷酸酶和亮氨酸氨基肽酶活力呈现先显著上升随后趋于平稳的变化趋势(P0.05)。随着饲料中谷氨酰胺添加量增加,舌鳎稚鱼内脏团IGF-1mRNA表达量显著上升,2.0%添加组表达量最高,显著高于未添加组(P0.05)。综上所述,饲料中添加谷氨酰胺能够显著提高舌鳎稚鱼存活率和生长性能,增强消化酶活力,激活内脏团中促进生长关键基因IGF-1mRNA表达。本实验中,以SGR进行分析,半滑舌鳎稚鱼对饲料中游离谷氨酰胺最适需求量为0.63%。2.谷氨酰胺对半滑舌鳎稚鱼抗氧化能力和抗应激能力的影响。研究结果表明,饲料中添加2.0%谷氨酰胺时半滑舌鳎稚鱼全鱼丙二醛(MDA)含量显著低于未添加组(P0.05)。半滑舌鳎稚鱼全鱼超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)在各处理组之间差异不显著(P0.05)。谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活力在0.5%处理组最高,显著高于2.0%添加组(p0.05)。随着谷氨酰胺添加量增加,舌鳎内脏团中SOD和GPX mRNA表达量先显著上升(P0.05),随后当添加量继续增加时表达量下降,而CAT表达量变化趋势和SOD与GPX表达量变化趋势相反。当饲料中谷氨酰胺添加量为0.5%-1.0%时,半滑舌鳎稚鱼半致死溶氧浓度显著低于未添加组和2.0%添加组(P0.05)。应激后舌鳎稚鱼内脏团热休克蛋白70 (HSP70) mRNA表达量急剧增加,0.5%和2.0%组HSP70 mRNA表达量显著高于未添加组(P0.05)。综上所述,饲料中添加谷氨酰胺能够调控舌鳎稚鱼关键抗氧化酶活力和mRNA表达量,降低鱼体MDA水平,增强舌鳎稚鱼抗低氧应激能力。3.核苷酸对半滑舌鳎稚鱼生长和消化酶活力的影响。实验结果表明,随着饲料中核苷酸添加量从0.000%上升到0.018%,舌鳎稚鱼存活率显著上升,当添加量超过0.018%后存活率显著下降(P0.05)。不同核苷酸添加水平显著影响了舌鳎稚鱼的生长,添加水平为0.018%-0.054%时舌鳎稚鱼终末体长、终末体重和特定生长率显著高于未添加组(p0.05)。随着饲料中核苷酸添加量增加,胰段和肠段胰蛋白酶活力、肠段淀粉酶活力先显著上升,在0.036%添加组达到最大值,随后显著下降(P0.05),胰段淀粉酶活力变化趋势相似,但在0.054%添加组达到最大值。饲料中添加核苷酸显著提高了舌鳎稚鱼肠道刷状缘中碱性磷酸酶和亮氨酸氨基肽酶活力,各添加组之间差异不显著(P0.05)。综上所述,饲料中添加核苷酸能够显著提高舌鳎稚鱼存活率和生长性能,增强消化酶活力。以SGR为评价指标,本实验中半滑舌鳎稚鱼核苷酸最适宜添加量为0.018%。4.核苷酸对半滑舌鳎稚鱼非特异性免疫相关酶活力、抗氧化能力和抗低氧应激能力的影响。研究结果表明,饲料中核苷酸添加量为0.018%、0.036%和0.072%时,半滑舌鳎稚鱼全鱼MDA含量显著低于未添加组和0.090%添加组(P0.05)。饲料中添加0.018%核苷酸对舌鳎稚鱼全鱼诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活力具有定的提升作用,显著高于0.0.72%添加组。饲料中不同核苷酸添加水平对溶菌酶(LZM)活力的影响不显著(P0.05)。随着饲料中核苷酸含量增加,舌鳎稚鱼全鱼SOD活力先上升随后下降,0.018-0.054%添加组SOD活力显著高于其他处理组。除0.036%添加组CAT活力显著低于未添加组外,其余各组CAT活力无显著差异。0.018%组SODmRNA表达量显著高于未添加组(P0.05),其余各组无显著差异。核苷酸添加量为0.018-0.036%时,GPX表达量显著低于未添加组(P0.05),而0.018%、0.054%、0.072%和0.090%组CATmRNA表达量均显著低于未添加组(P0.05)。饲料中核苷酸添加量为0.018%时,舌鳎稚鱼半致死溶氧浓度显著低于未添加组和0.090%添加组(P0.05),同时,添加核苷酸能够显著增加低氧应激后舌鳎稚鱼内脏团HSP70 mRNA表达量(P0.05)。综上所述,饲料中添加核苷酸能够提高舌鳎稚鱼非特异性免疫力和抗氧化能力,降低鱼体MDA水平,增强舌鳎稚鱼抗低氧应激能力。
【关键词】：半滑舌鳎 谷氨酰胺 核苷酸 仔稚鱼 抗氧化 基因表达
【学位授予单位】：中国海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S965
【目录】：

• 摘要5-8
• Abstract8-15
• 引言15-17
• 第一章 文献综述17-31
• 1. 谷氨酰胺营养生理研究进展17-22
• 1.1 谷氨酰胺的结构和功能17
• 1.2 谷氨酰胺的代谢17-18
• 1.3 谷氨酰胺在鱼类中的研究进展18-22
• 1.3.1 谷氨酰胺对生长性能的影响18-19
• 1.3.2 谷氨酰胺对肠道形态和功能的影响19-20
• 1.3.3 谷氮酰胺对抗氧化能力的影响20
• 1.3.4 谷氨酰胺对免疫的影响20-22
• 2. 核苷酸的营养生理研究进展22-29
• 2.1 核苷酸的概念、组成和分类22
• 2.2 核苷酸的代谢和吸收22-23
• 2.3 核苷酸营养——从“非必需”到“条件必需”的转化23-25
• 2.4 核苷酸在水产动物中的研究进展25-29
• 2.4.1 核苷酸对生长性能的影响25-26
• 2.4.2 核苷酸对脂代谢的影响26
• 2.4.3 核苷酸对肠道形态结构和功能的影响26-27
• 2.4.4 核苷酸对免疫的影响27-29
• 2.4.5 核苷酸对抗应激能力的影响29
• 3. 研究目的和意义29-31
• 第二章 饲料中添加谷氨酰胺对半滑舌鳎稚鱼生长、消化酶活力以及IGF-1 mRNA表达的影响31-52
• 1. 前言31-32
• 2. 材料方法32-42
• 2.1 实验饲料32-33
• 2.2 实验动物和养殖过程33
• 2.3 取样和解剖33-34
• 2.4 分析方法34-42
• 2.4.1 饲料成分分析34
• 2.4.2 消化酶活力分析34
• 2.4.3 Insulin-like growth factor Ⅰ(IGF-1)基因的克隆34-38
• 2.4.4 IGF-ImRNA表达量测定38-42
• 2.5 数据计算和统计分析42
• 3. 实验结果42-43
• 3.1 饲料中谷氨酰胺含量对半滑舌鳎稚鱼存活和生长的影响42
• 3.2 饲料中谷氨酰胺含量对半滑舌鳎稚鱼消化酶活力的影响42-43
• 3.3 饲料中谷氨酰胺含量对半滑舌鳎稚鱼内脏团IGF-1mRNA表达量的影响43
• 3.4 半滑舌鳎稚鱼对饲料中游离谷氨酰胺最适需求量分析43
• 4. 讨论43-46
• 附表和图46-52
• 第三章 饲料中添加谷氮酰胺对半滑舌鳎稚鱼抗氧化能力和抗应激能力的影响52-70
• 1. 引言52-54
• 2. 材料方法54-58
• 2.1 实验饲料、实验动物和养殖过程、取样和解剖54
• 2.2 应激实验54
• 2.3 分析方法54-58
• 2.3.1 饲料成分分析54
• 2.3.2 丙二醛以及抗氧化酶活力分析54-55
• 2.3.3 SOD、GPX、CAT、HSP70、HIF-1α因克隆55-58
• 2.3.4 SOD、GPX、CAT、HSP70和HIF-1α mRNA表达量测定58
• 2.4 统计分析58
• 3. 实验结果58-60
• 3.1 抗氧化指标58-59
• 3.1.1 丙二醛(MDA)含量58
• 3.1.2 SOD、GPX和CAT活力58-59
• 3.1.3 SOD、GPX和CAT mRNA的表达59
• 3.2 抗应激指标59-60
• 3.2.1 半致死溶氧浓度59
• 3.2.2 HSP70和HIF-1α mRNA表达59-60
• 4. 讨论60-62
• 附表和图62-70
• 第四章 饲料中添加核苷酸对半滑舌鳎稚鱼生长性能和消化酶活力的影响70-78
• 1. 引言70-71
• 2. 材料方法71
• 2.1 实验饲料71
• 2.2 实验动物和养殖过程、取样和解剖、分析方法和统计71
• 3. 实验结果71-72
• 3.1 核苷酸对舌鳎稚鱼生长性能的影响71-72
• 3.2 核苷酸对舌鳎稚鱼消化酶活力的影响72
• 4. 讨论72-75
• 附表和图75-78
• 第五章 饲料中添加核苷酸对半滑舌鳎稚鱼非特异性免疫相关酶活力、抗氧化能力和抗低氧应激能力的影响78-90
• 1. 引言78-79
• 2. 材料方法79-80
• 2.1 实验饲料79
• 2.2 实验动物和养殖过程、取样和解剖79
• 2.3 应激实验79-80
• 2.4 分析方法和统计80
• 3. 实验结果80-82
• 3.1 核苷酸对舌鳎稚鱼非特异性免疫相关酶活力的影响80
• 3.1.1 iNOS活力80
• 3.1.2 溶菌酶活力80
• 3.2 核苷酸对舌鳎稚鱼抗氧化酶活力及基因表达的影响80-81
• 3.2.1 丙二醛(MDA)含量80-81
• 3.2.2 抗氧化酶活力81
• 3.2.3 抗氧化酶mRNA表达量81
• 3.3 核苷酸对舌鳎稚鱼抗低氧应激能力的影响81-82
• 4. 讨论82-84
• 附表和图84-90
• 第六章 全文总结90-91
• 参考文献91-110
• 致谢110-111
• 个人简历111

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本文编号：483236