蓝莓菌根真菌解磷特性及定殖特点分析

发布时间：2017-06-27 04:12

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【摘要】：蓝莓属杜鹃花科越橘属植物,为浅根系植物,没有大的主根,根系纤细且不发达。大部分的杜鹃花科植物根系在自然条件下都能形成一类特殊的内生菌根即杜鹃花类菌根,也称为欧石楠类菌根(Ericoid mycorrhizas, ERM),它对促进植物营养吸收、增强植物抗逆性等方面具有重要作用。基于蓝莓菌根的重要性,本研究对菌根真菌对蓝莓的侵染状态、解磷及促生能力进行了分析,并利用变性梯度凝胶电泳技术分析菌根真菌在蓝莓根际的定殖情况,为进一步开发蓝莓菌根真菌资源奠定基础。主要结果如下：利用锥虫蓝染色压片和冰冻切片技术对自然条件下的蓝莓菌根的侵染特点和显微结构进行观察。实验结果表明：在表皮、皮层、中柱中都有真菌的侵染,其中中柱真菌的侵染最多,而表皮的侵染较少。蓝莓菌根的侵染部位大多出现在颜色略显黄棕色的根段上,靠近根尖部位的根段侵染率较低,而在新长出的幼嫩根段上几乎没有菌丝侵染。大兴安岭地区的野生蓝莓菌根真菌侵染率为54.6%。对获得的蓝莓菌根真菌的解磷能力进行了分析,结果显示7个属的真菌都有不同程度的解磷能力。从其中挑选了两株解磷能力较强的真菌,对它们的解磷机理进行进一步研究。实验结果表明：接种解磷真菌的培养基中,无机磷含量以及菌体中酸性磷酸酶含量增速最快的点都出现在144h,此时菌体分泌了大量酸性磷酸酶来分解培养基中的无机磷。从野生蓝莓组织上选取幼嫩的茎,利用组织培养方法繁育出无菌蓝莓植株,再对蓝莓植株进行菌根真菌回接实验。菌根真菌与蓝莓共培养一段时间后发现大部分菌根真菌对蓝莓幼苗的生长具有促进作用。显微结构观察显示,随着时间的增长,菌根真菌侵染率逐渐增加,共培养三个月后侵染率可达70%。接种菌根真菌的植物叶片中氮、磷含量、超氧化物歧化酶活性和过氧化氢酶活性都要高于未接种的对照组。提取菌根真菌与蓝莓共培养土样的总DNA,利用含有GC夹的引物进行PCR扩增,对PCR产物进行变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析,结果显示菌根真菌已在蓝莓根部定殖；此外,接种的菌根真菌可能已成为土壤中的优势菌群之一
【关键词】：蓝莓茵根 菌根真菌 侵染率 接种效应 定殖情况
【学位授予单位】：东北林业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S663.9;S182
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 1 绪论10-15
• 1.1 植物与真菌的关系10-12
• 1.1.1 菌根的分类10-11
• 1.1.2 杜鹃花类菌根的生态作用11-12
• 1.2 杜鹃花类菌根真菌的物种多样性12
• 1.2.1 菌根真菌的解磷作用12
• 1.3 蓝莓及其相关研究进展12-14
• 1.3.1 蓝莓在我国的分布12-13
• 1.3.2 蓝莓的营养价值13
• 1.3.3 蓝莓引种栽培及繁殖13-14
• 1.4 研究目的与意义14-15
• 2 蓝莓菌根的形态学观察15-20
• 2.1 实验材料15
• 2.1.1 材料采集15
• 2.1.2 实验主要试剂15
• 2.1.3 实验所用器材15
• 2.2 实验方法15-17
• 2.2.1 菌根侵染率检测方法15-16
• 2.2.2 侵染率计算方法16
• 2.2.3 冰冻切片的制作16-17
• 2.3 实验结果与分析17-19
• 2.3.1 菌根染色压片17-18
• 2.3.2 冰冻切片18-19
• 2.3.3 菌根侵染率分析19
• 2.4 本章小结19-20
• 3 菌根真菌解磷能力的分析20-27
• 3.1 实验材料20-21
• 3.1.1 实验样品20
• 3.1.2 实验所用试剂20
• 3.1.3 实验所用仪器20
• 3.1.4 液体培养基的配制20
• 3.1.5 菌株的液体培养方法20-21
• 3.1.6 试剂的配制21
• 3.2 实验方法21-22
• 3.2.1 可溶性磷含量的测定21-22
• 3.2.2 pH值的测定22
• 3.2.3 菌丝体重量的测定22
• 3.2.4 磷酸酶活性的测定22
• 3.3 结果与分析22-26
• 3.3.1 可溶性磷含量测定22-23
• 3.3.2 2株代表菌株可溶性磷的比较23-26
• 3.4 本章小结26-27
• 4 蓝莓菌根真菌的回接技术及其接种效应27-36
• 4.1 实验材料27-28
• 4.1.1 实验样品27
• 4.1.2 实验试剂27
• 4.1.3 实验仪器27
• 4.1.4 试剂的配制27-28
• 4.1.5 培养基的配制28
• 4.2 实验方法28-30
• 4.2.1 组培苗的生根培养以及真菌的共培养28-29
• 4.2.2 菌根侵染率检测29
• 4.2.3 蓝莓叶片氮、磷含量的测定29-30
• 4.2.4 蓝莓叶片过氧化氢酶、超氧化物歧化酶的测定30
• 4.3 实验结果与分析30-35
• 4.3.1 组培苗的生根培养与真菌的共培养30-31
• 4.3.2 菌根侵染率检测31-32
• 4.3.3 蓝莓叶片氮、磷含量的比较32-34
• 4.3.4 蓝莓叶片过氧化氢酶、超氧化物歧化酶的比较34-35
• 4.4 本章小结35-36
• 5 菌根真菌的定殖特点分析36-45
• 5.1 实验材料36-38
• 5.1.1 样品的处理36
• 5.1.2 实验试剂36
• 5.1.3 实验仪器36
• 5.1.4 试剂的配制36-38
• 5.2 实验方法38-41
• 5.2.1 土壤DNA的提取38
• 5.2.2 土壤DNA的纯化38-39
• 5.2.3 土壤DNA的PCR扩增39-40
• 5.2.4 PCR产物的变性梯度凝胶电泳(DGGE)40-41
• 5.3 实验结果与分析41-44
• 5.3.1 土壤DNA的提取41-42
• 5.3.2 土壤DNA的纯化42
• 5.3.3 土壤DNA的PCR扩增42-43
• 5.3.4 PCR产物的变性梯度凝胶电泳(DGGE)43-44
• 5.4 本章小结44-45
• 参考文献45-48
• 攻读学位期间发表的学术论文48-49
• 致谢49-50

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 张春英;尹丽娟;王胤;柯新;戴思兰;;一种简捷的分离杜鹃花类菌根真菌的方法[J];生物技术;2007年06期

中国硕士学位论文全文数据库 前2条

1 高博;龙池地区杜鹃花属6种杜鹃花菌根真菌多样性的研究[D];东北林业大学;2009年

2 杨兵;毛鹃菌根真菌多样性初步研究[D];河南农业大学;2010年

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本文编号：488547