抗疫霉放线菌株的分离筛选与抗菌活性成分的初步研究

发布时间：2017-07-02 02:11

  本文关键词：抗疫霉放线菌株的分离筛选与抗菌活性成分的初步研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：近些年来,通过利用拮抗微生物进行生物防治已经逐步成为植物病害防治研究的一大趋势。放线菌是一类产生拮抗活性物质最多的微生物,在植物病害防治中有着巨大应用潜力以及广阔的前景。为了改进和提高生物防治对疫霉属致病菌的效果,找出高效的生防拮抗菌株,本论文从湖南浏阳烟田土壤中筛选获得一株拮抗放线菌L24,并以其为研究对象系统地研究了其对疫霉属致病菌的抗菌活性。主要研究结果如下：1.放线菌的分离筛选：从湖南浏阳烟田采集的土样中,通过稀释分离法得到放线菌。经过平板对峙法和发酵滤液体外抑菌试验,得到一个针对疫霉属致病菌拮抗效果良好的放线菌株L24,其发酵液经5倍稀释后对疫霉属病菌效果良好,例如对黄瓜疫霉病菌,辣椒疫霉病菌,烟草黑胫病菌和马铃薯晚疫病菌的菌丝的抑制率分别达到97.3%,86.5%,95.4%和100%。2.放线菌L24菌株鉴定：通过形态特征,培养特征,生理生化特性的观察及16S rDNA测序初步将其鉴定为湿链霉菌(Streptomyces humidus)。3.放线菌L24菌株发酵培养基的优化：以高氏培养基为基础,对其中的碳源种类,氮源种类及碳氮比采取单因素变化优化。优化后配方为：大米为40g/L,酵母粉为1.35g/L,K2HPO4为0.5 g/L,NaCl为0.5 g/L,KNO3为1 g/L,MgSO4·7H2O为0.5 g/L, FeSO4为0.01g/L。4.分别测定了不同温度处理,不同pH环境以及不同时长紫外照射对放线菌L24菌株发酵液稳定性的影响。试验结果表明：L24菌株发酵液在高温,酸性条件和紫外光下拮抗效果稳定,在碱性条件下拮抗效果不稳定。5.拮抗物质的分离,收集：收集L24菌株菌体,通过超声波破壁,甲醇浸取方法,发现拮抗物质主要在菌体内。收集放线菌株L24拮抗粗提浓缩液体400mL。6.抑菌活性物质萃取剂的选择：选取四种极性由低到高的有机试剂：石油醚,氯仿,乙酸乙酯,正丁醇,分别萃取L24菌株发酵液,进行平板抑菌试验。试验结果表明：用高极性溶剂正丁醇萃取的发酵液粗提物抑制黄瓜疫霉病菌效果最明显,推测L24发酵液中抑菌活性成分极性大。7.L24菌株防治黄瓜疫病生物学测试：采用菌丝块无伤法分别对离体黄瓜果实及活体黄瓜苗进行接种,测定L24菌株分泌的拮抗物质对黄瓜疫霉病的防治效果。试验结果表明：在离体果实接种试验中,该菌分泌产生拮抗物质的粗提物稀释液对黄瓜疫霉病菌的侵入及病情发展有较好的抑制作用,实验组的发病率仅为37.5%；在活体盆栽接种试验中,用稀释2倍的发酵液灌根处理对黄瓜疫霉病的防治效果较好,发病率仅有22.2%。8.放线菌L24菌株对疫霉属致病菌作用机理的初步研究：光学显微镜观察用发酵液处理后的黄瓜疫霉病菌的菌体形态变化,结果表明处理过的菌丝与对照比较有明显不同,存在菌丝溢缩断裂畸形的现象。
【关键词】：放线菌 疫霉属致病菌 抑菌活性物质 生物防治
【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S476
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 前言11-19
• 1.1 疫霉菌和疫病的研究进展11-15
• 1.1.1 疫霉菌的分类地位11-12
• 1.1.2 疫霉菌的多样性12-13
• 1.1.3 疫病的症状13-14
• 1.1.4 疫病现有防治措施14-15
• 1.2 放线菌生物防治研究进展15-18
• 1.2.1 放线菌的分类研究进展15-16
• 1.2.2 放线菌在生物防治植物病害中的拮抗机制16-17
• 1.2.3 放线菌生防应用及其问题17-18
• 1.3 研究目的与意义18-19
• 第二章 放线菌的土壤分离筛选与拮抗菌株L24种类鉴定19-37
• 1 材料与方法19-27
• 1.1 土壤放线菌分离筛选19-22
• 1.2 放线菌株的鉴定22-27
• 2 实验结果27-35
• 2.1 土壤放线菌分离筛选结果27-31
• 2.2 放线菌株的鉴定结果31-35
• 3 小结与讨论35-37
• 3.1 土壤放线菌分离筛选35
• 3.2 放线菌株的鉴定35-37
• 第三章 L24菌株摇瓶发酵培养基的优化及拮抗活性成分基础研究37-49
• 1 材料与方法37-41
• 1.1 L24菌株摇瓶发酵培养基的优化37-40
• 1.2 L24菌株拮抗活性成分基础研究40-41
• 2 结果与分析41-47
• 2.1 L24菌株摇瓶发酵培养基的优化41-45
• 2.1.1 碳源,氮源对菌株L24产生活性物质的影响41-42
• 2.1.2 碳氮比对菌株L24产生活性物质的影响42-43
• 2.1.3 工业生产中发酵时间对菌株L24产生活性物质的影响43
• 2.1.4 菌株L24代谢产物稳定性测定结果43-45
• 2.2 L24菌株拮抗活性成分前期研究45-47
• 2.2.1 发酵液萃取剂的选择45-47
• 2.2.2 放线菌株L24的拮抗活性物质所产位置47
• 3 小结与讨论47-49
• 3.1 L24菌株摇瓶发酵培养基的优化47-48
• 3.2 L24菌株拮抗活性成分前期研究48-49
• 第四章 L24菌株抗菌物质防治黄瓜疫霉病的生物学测试及作用机理初步研究49-55
• 1 材料与方法49-51
• 1.1 材料49-50
• 1.2 方法50-51
• 1.2.1 菌株L24拮抗活性物质的生物学测试50-51
• 1.2.2 活性物质处理的黄瓜疫霉病菌菌丝的制备51
• 1.2.3 光学显微镜下活性物质对黄瓜疫霉病菌菌丝作用的形态观察51
• 2 结果与分析51-54
• 2.1 菌株L24拮抗活性物质的生物学测试51-53
• 2.2 光学显微镜下活性物质对疫霉病菌菌丝作用的形态观察53-54
• 3 小结与讨论54-55
• 第五章 全文总结、创新点与展望55-58
• 1 全文总结55-56
• 2 创新点56
• 3 展望56-58
• 参考文献58-65
• 致谢65-66
• 附页66

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