Bt蛋白在褐飞虱体内的分布及对体内相关酶活性的影响

发布时间：2017-07-07 09:23

  本文关键词：Bt蛋白在褐飞虱体内的分布及对体内相关酶活性的影响

  更多相关文章： 褐飞虱 CrylAb蛋白 SOD酶 AchE酶 GSH酶 CAT酶 POD酶 FE酶 CES酶 酶活性

【摘要】：本研究通过对Bt蛋白胁迫下褐飞虱(Brownriceplanthopper)体内相关酶,如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、乙酰胆碱酯酶(AchE)、FE酯酶、羧酸酯酶(CES)活性及不同部位酶活变化的研究和探讨,为Bt水稻对非靶标生物的安全性评价提供依据；利用室内建立以转CrylAb基因水稻(汕优63)饲养褐飞虱,不同时间段取样测定其体内各个部位酶活力及酶总活力,通过酶联免疫法(ELISA)检测转CrylAb基因水稻饲养的褐飞虱,利用差速离心法获取褐飞虱的各个细胞结构,运用分光光度计法和酶标仪法对褐飞虱体内及细胞碎片、线粒体及亚细胞器等结构的酶活力情况进行检测。结果表明：1.室内种植的转CrylAb基因水稻(汕优63)中,通过CrylAb蛋白检测试剂盒检测,含有CrylAb蛋白12.8385 ng/L2.取食转CrylAb基因水稻后,褐飞虱体内CrylAb蛋白在细胞碎片、线粒体和亚细胞器中内均有分布,不同细胞部位,Bt蛋白的含量：亚细胞器线粒体细胞碎片,且1d-15d内褐飞虱体内中3个部位都能检测到CrylAb蛋白。3.在CrylAb蛋白胁迫下,褐飞虱体内,0d-15d中,褐飞虱体内总CAT酶活性先降低,后增加,10d降到最低值,15d又出现快速增加恢复；GST酶活性,也是先降低,后逐渐增加,进食第5d降到最低值,之后一直增大；POD酶活性则是先增加,后降低,随着取食时间的延长恢复到饲养Bt水稻前的酶活性水平；褐飞虱体内SOD酶活性,则随取食时间的延长,褐飞虱体内的SOD酶活性略有增加；褐飞虱体内酯酶总活性,随取食时间的变化,CES酶活性逐渐降低,AchE酶活性先增加,后降低,恢复到未饲养Bt蛋白水稻前的酶总活力水平,然而FE酶活性,随取食时间的延长,褐飞虱体内的FE酶活性一直降低。4.综合分析在取食CrylAb蛋白水稻后,褐飞虱体内及不同部位的POD、GST、CAT、 SOD、CES、AchE、FE等酶活性变化,在受到外来蛋白(或活性物质)刺激作用下,会出现一个相应的生化反应的过程,造成不同功能酶的活性变化,甚至与对照组相比有显著性差异变化。但随着取食时间的延长,这种酶活性的变化又逐渐恢复到初始水平。其原因可能是生物自身免疫系统对外来物做出的一种自我保护的生理反应；也可能是CrylAb蛋白随着食物链进入生物体后,对生物活体某些机能有一定的毒性作用,造成生物体做出应激性的生理保护反应,来中和或减缓其对机体的毒害作用。
【关键词】：褐飞虱 CrylAb蛋白 SOD酶 AchE酶 GSH酶 CAT酶 POD酶 FE酶 CES酶 酶活性
【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S435.112.3
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 第一部分 文献综述11-18
• 1.1 BT、BT蛋白的简介及应用11
• 1.2 转基因的研究现状11-16
• 1.2.1 转基因技术的概念及技术11-12
• 1.2.2 转基因作物的研究12-15
• 1.2.3 转基因动物的研究15-16
• 1.3 转BT基因对靶标生物的研究16
• 1.4 BT基因对非靶标生物的研究16-17
• 1.5 转BT基因的安全性评价的现状17-18
• 第二部分 CRY1AB蛋白在褐飞虱体内随时间的传递情况及其在体内各分区的分布18-26
• 2.1 实验材料19-20
• 2.1.1 供试水稻19
• 2.1.2 虫源及处理19
• 2.1.3 供试水稻处理、及褐飞虱试验处理流程19-20
• 2.2 主要试剂和仪器20
• 2.3 实验方法20-21
• 2.3.1 水稻中Bt蛋白含量的测定20
• 2.3.2 褐飞虱体内可溶性总蛋白测定方法20
• 2.3.3 褐飞虱体内Bt蛋白含量的测定方法20-21
• 2.3.4 数据分析21
• 2.4 结果与分析21-24
• 2.4.1 水稻中Cry1Ab蛋白含量测定结果21
• 2.4.2 褐飞虱不同部位Cry1Ab蛋白含量、可溶性总蛋白含量及不同部位Cry1Ab蛋白含量/可溶性蛋白结果21-23
• 2.4.3 不同饲养时间褐飞虱体内Cry1Ab蛋白总含量变化结果23-24
• 2.5 结果讨论24-25
• 2.6 结论25-26
• 第三部分 取食BT水稻对褐飞虱体内各种酶活性影响26-39
• 3.1 实验材料27
• 3.1.1 供试水稻27
• 3.1.2 供试褐飞虱饲养及样品处理方法27
• 3.2 主要试剂和仪器27-28
• 3.3 实验方法28-29
• 3.3.1 褐飞虱体内CES酶活力的测定方法28
• 3.3.2 褐飞虱体内POD酶活力的测定方法28
• 3.3.3 褐飞虱体内GST酶活力的测定方法28
• 3.3.4 褐飞虱体内SOD酶活力的测定方法28
• 3.3.5 褐飞虱体内AchE酶活力的测定方法28-29
• 3.3.6 褐飞虱体内CAT酶活力的测定方法29
• 3.3.7 褐飞虱体内FE酶活力的测定方法29
• 3.3.8 数据分析29
• 3.4 结果与分析29-35
• 3.4.1 褐飞虱体内CES酶活力的分布情况29-30
• 3.4.2 褐飞虱体内POD酶活力的分布情况30-31
• 3.4.3 褐飞虱体内GST酶活力的分布情况31-32
• 3.4.4 褐飞虱体内SOD酶活力的分布情况32-33
• 3.4.5 褐飞虱体内AchE酶活力的分布情况33-34
• 3.4.6 褐飞虱体内CAT酶活力的分布情况34
• 3.4.7 褐飞虱体内FE酶活力的分布情况34-35
• 3.5 褐飞虱体内总酶活性的测定结果35
• 3.6 讨论35-38
• 3.6.1 褐飞虱取食含Cry1Ab蛋白水稻对酯酶活性的影响35-36
• 3.6.2 褐飞虱取食含Cry1Ab蛋白水稻对氧化还原性酶活性的影响36
• 3.6.3 取食含Bt蛋白水稻后褐飞虱体内及各部位之间的酯酶和氧化还原酶的影响36-38
• 3.7 结论38-39
• 参考文献39-45
• 致谢45-46
• 个人简历46

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本文编号：529653