兔各器官中TLRs表达谱以及脂多糖对母兔子宫中生殖激素受体表达的影响

发布时间：2017-07-07 21:30

  本文关键词：兔各器官中TLRs表达谱以及脂多糖对母兔子宫中生殖激素受体表达的影响

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【摘要】：脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)作为革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分,能引起与革兰氏阴性菌感染相同的炎症反应。雌性动物的生殖道直接开口于外界环境中,因而更易引发感染,继而引发一些列生殖紊乱,降低家畜繁殖力。下丘脑-垂体-卵巢调节轴构成一个完整的神经内分泌生殖调节体系,其分泌的生殖激素对维持雌性动物正常的生殖机能具有重要的作用。已有研究表明了LPS对生殖激素的影响,而其生物学效应与各自受体密切相关,故本实验首先检测Toll样受体(Toll-like receptors, TLRs)在母兔呼吸、消化器官以及肝、脾、子宫等器官中的表达谱及表达水平,了解母兔各个器官的先天性免疫机制；同时用LPS处理母兔,模拟其在自然状态下革兰氏阴性菌感染,探究LPS引起的炎症反应状态下,子宫中生殖激素受体：孕酮受体(Progesterone receptor, PR)、孕酮受体膜元件(Progesterone receptor membrane component, PGRMC)、促性腺激素释放激素受体(Gonadotropin releasing hormone receptor, GnRHR)、促黄体生成素受体(Luteinizing hormone receptor, LHR)和雌激素受体p亚型(Estrogen Receptor beta-subunit, ER-β)的表达水平,揭示LPS对生殖激素受体的影响,为阐明LPS引起的生殖机能紊乱奠定理论基础。36只5-6月龄生理健康间情期的雌性新西兰白兔。4只(n=4)不做任何处理,作为Oh,16只LPS组耳缘静脉注射LPS (0.5mg/Kg, n=16),16只对照组注射相应体积生理盐水(n=16),分别于注射后1.5、3、6和12h(n=4)宰杀。Oh未处理(n=4)采集肺、气管、小肠、胃、肝、脾、子宫角、子宫体、子宫颈、卵巢、输卵管和下丘脑等组织,用于TLRs表达谱检测和表达水平检测；LPS组和对照组收集子宫角、子宫体和子宫颈组织,用于生殖激素受体的荧光定量PCR检测和免疫组化检测。结果分析表明：(1)以肝为参照,TLR2在气管中表达量高,在肺、小肠、胃、脾、卵巢和下丘脑表达量低(P0.05)；TLR3在小肠和输卵管中表达量高,在胃和下丘脑中表达量低(P0.05)；TLR4在肺中表达量高,在气管、小肠、脾、肝、卵巢、下丘脑和输卵管中表达量低(P0.05)；TLR5在肺、气管和胃中表达量高,在脾中表达量低(P0.05)；TLR6在肺,子宫角和子宫体表达量高,在脾和下丘脑表达量低(P0.05)；TLR8在肺和脾中表达量高,在小肠、胃、子宫角、子宫体、子宫颈、卵巢和输卵管中表达量低(P0.05)；TLR10在气管和脾的表达量高,在小肠、胃、子宫角、子宫体、子宫颈、卵巢、下丘脑和输卵管中表达量低(P0.05)。(2)LPS能显著下调PR在子宫角、子宫体和子宫颈中的mRNA水平(P0.05)：对子宫角、子宫体和子宫颈上皮细胞中PR蛋白表达无影响。LPS可显著下调子宫体和子宫颈中PGRMC mRNA水平的表达量(P0.05);抑制子宫颈上皮细胞中PGRMC蛋白表达(P0.05)。LPS能显著下调GnRHR在子宫角、子宫体和子宫颈中的mRNA水平表达量(P0.05),改变其原有表达模式；对子宫角、子宫体和子宫颈上皮细胞中GnRHR蛋白表达无显著差异(P0.05)。LPS能显著下调LHR在子宫角、子宫体和子宫颈中的mRNA水平表达量(P0.05)；改变LHR蛋白在子宫角、子宫体和子宫颈上皮细胞中的表达模式。LPS能改变ER-β在子宫角、子宫体和子宫颈中的mRNA水平表达模式(P0.05)；上调子宫角上皮细胞中ER-β蛋白表达量(P0.05)。结论：雌兔的肺、气管、肠、胃、肝、脾、子宫角、子宫体、子宫颈、卵巢、输卵管和下丘脑有丰富的TLRs表达。LPS对子宫中PR、GnRHR和LHR的转录水平以及蛋白水平的表达有影响,对PGRMC和ER-β的转录水平表达有影响,可能与LPS诱导炎症反应引起的生殖机能障碍有关。
【关键词】：脂多糖(LPS) TLRs 表达谱 生殖激素受体 子宫
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S829.1
【目录】：

• 摘要8-10
• Abstract10-13
• 1. 文献综述13-20
• 1.1 脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)介导炎性反应13
• 1.2 Toll样受体家族(Toll-like receptors,TLRs)概述13-14
• 1.2.1 TLRs家族13-14
• 1.2.2 TLRs和其配体14
• 1.3 激素受体与繁殖机能14-18
• 1.3.1 下丘脑-垂体-卵巢调节轴14-15
• 1.3.2 调节轴中激素、激素受体的重要作用15-18
• 1.3.3 子宫上生殖激素受体的表达研究进展18
• 1.4. 炎症与生殖机能紊乱的关联性18-19
• 1.5 本研究的目的和意义19-20
• 2. 材料与方法20-26
• 2.1 实验材料20-22
• 2.1.1 实验动物20
• 2.1.2 主要试剂20-21
• 2.1.3 主要溶液配制21
• 2.1.4 主要设备21-22
• 2.2 实验方法22-25
• 2.2.1 总RNA的提取22
• 2.2.2 cDNA的合成22-23
• 2.2.3 引物设计23-24
• 2.2.4 引物检测24
• 2.2.5 荧光定量PCR24-25
• 2.2.6 免疫组织化学25
• 2.2.7 免疫组织化学图像分析25
• 2.3 统计分析25-26
• 3. 结果与分析26-43
• 3.1 总RNA提取和常规PCR扩增结果26-27
• 3.2 荧光定量PCR扩增的特异性27-28
• 3.3 TLRs在雌兔各器官的表达谱28-31
• 3.4 LPS对子宫中生殖激素受体mRNA表达水平的影响31-37
• 3.4.1 LPS对子宫中PR mRNA表达水平的影响31-32
• 3.4.2 LPS对子宫中PGRMC mRNA表达水平的影响32-33
• 3.4.3 LPS对子宫中GnRHR mRNA表达水平的影响33-34
• 3.4.4 LPS对子宫中LHR mRNA表达水平的影响34-36
• 3.4.5 LPS对子宫中ER-β mRNA表达水平的影响36-37
• 3.5 子宫中生殖激素受体的定位37-38
• 3.6 LPS对子宫中生殖激素受体蛋白表达水平的影响38-43
• 3.6.1 LPS对子宫中PR蛋白表达水平的影响38-39
• 3.6.2 LPS对子宫中PGRMC蛋白表达水平的影响39-40
• 3.6.3 LPS对子宫中GnRHR蛋白表达水平的影响40-41
• 3.6.4 LPS对子宫中LHR蛋白表达水平的影响41-42
• 3.6.5 LPS对子宫中ER-β蛋白表达水平的影响42-43
• 4. 讨论43-49
• 4.1 TLRs在雌兔下丘脑,生殖、呼吸、消化中的表达和影响43-45
• 4.2 LPS对PR和PGRMC表达的影响45-46
• 4.3 LPS对GnRHR表达影响46-47
• 4.4 LPS对LHR表达的影响47-48
• 4.5 LPS对ER-β表达的影响48-49
• 5. 结论49-50
• 参考文献50-56
• 致谢56-57
• 攻读学位期间发表的学术论文和参加的学术会议57

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本文编号：531942