蚯蚓抗损伤有效成分对小鼠创伤愈合作用的研究

发布时间：2017-08-02 22:00

  本文关键词：蚯蚓抗损伤有效成分对小鼠创伤愈合作用的研究

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【摘要】：目的：为了探讨蚯蚓抗损伤有效成分(EADEC)促进创伤愈合、抗菌消炎作用及机理,本实验将探索蚯蚓抗损伤有效成分对小鼠机械性损伤模型的治疗作用,为其对创伤愈合的治疗效果及机制提供理论依据,对今后动物源性药物制剂的研发及蚯蚓提取物在药用的延展提供新的思路。内容及方法：1、蚯蚓抗损伤有效成分采用电击蚯蚓、超声波细胞破碎、硫酸铵盐析、超滤管超滤、细菌筛过滤等方式进行提取。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和药敏试验测定其蛋白质分子量范围及抑菌性检测。添加丙二醇、吐温80、蔗糖、Nacl等赋形剂制备成喷剂。2、采用KM小鼠60只,建立小鼠背部创伤模型,平均分为空白对照组、京万红治疗组和蚯蚓抗损伤有效成分组进行喷涂治疗。每日观察临床及局部愈合情况,并在3、7、11、15d后各宰杀四只,采取血液检测WBC、Gran、Lymph并分离血清测定羟脯氨酸(Hyp)、IL-6、TGF-β含量,对创伤皮肤进行组织形态学观察和免疫组化实验。实验所得数据均采用SPSS19.0统计学处理软件,P0.05为差异有统计学意义。结果：1、EADEC的蛋白分子量主要集中在15-35KD、45-55KD以及60-70KD之间；它对大肠杆菌、沙门氏菌、链球菌以及枯草芽孢杆菌抑菌圈范围在6-10mm之间。2、EADEC在对小鼠创面愈合时间为14d,相比京万红组和空白对照组分别提前1d和2.5d; EADEC和京万红在第15d创面愈合率均可以达到100%,相比空白对照组提高3%；EADEC和京万红能使小鼠血液中的WBC、PLT、Gran升高；通过显微镜观察发现,EADEC组及京万红组成纤维细胞、胶原纤维较多且排列整齐,细胞质丰富,稚嫩肉芽组织迅速形成,肉芽组织中毛细血管生长旺盛,与空白对照组差异明显(p0.05); EADEC组中Hyp、IL-6和TGF-β的含量好于其他两组。结论：1.对小鼠局部创伤喷涂EADEC具有明显的促创伤愈合作用,能够促进小鼠创面愈合时间,减少损伤期炎症的发生,进而提高愈合质量。2. EADEC促创伤愈合的机制主要通过加速Hyp、TGF-β的分泌,进而提高胶原蛋白的合成,促进毛细血管和成纤维细胞的增殖；并通过加速IL-6、血液中WBC、PLT、 Gran的生成,加速清除坏死组织及异物,提升机体免疫力,减轻机械性损伤的炎症反应,降低感染几率,加速创面愈合。
【关键词】：蚯蚓抗损伤有效成分 创伤愈合 成纤维细胞 Hyp IL-6 TGF-β1
【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S853.74
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-10
• 一、文献综述10-22
• 1.1 创伤愈合的研究进展10-15
• 1.1.1 创伤愈合的基本过程10-11
• 1.1.1.1 炎症反应期11
• 1.1.1.2 增殖期11
• 1.1.1.3 成熟期11
• 1.1.2 创伤愈合的影响因素11-15
• 1.1.2.1 中性粒细胞12
• 1.1.2.2 巨噬细胞12-13
• 1.1.2.3 成纤维细胞13
• 1.1.2.4 血管内皮细胞13
• 1.1.2.5 淋巴细胞13-14
• 1.1.2.6 转化生长因子β(TGF-β)14
• 1.1.2.7 血小板衍生生长因子(PDGF)14
• 1.1.2.8 白细胞介素(IL)14-15
• 1.1.2.9 羟脯氨酸(Hyp)15
• 1.2 蚯蚓有效成分的研究进展15-20
• 1.2.1 蚯蚓创伤愈合的有效成分及分离15-17
• 1.2.1.1 抗菌肽15-16
• 1.2.1.2 抗氧化系成分16-17
• 1.2.1.3 纤溶酶17
• 1.2.1.4 镇痛有效成分17
• 1.2.2 蚯蚓提取物对创伤愈合的作用及机理17-19
• 1.2.2.1 止血及解热镇痛作用17-18
• 1.2.2.2 抗菌消炎及抗氧化作用18-19
• 1.2.2.3 促进创伤愈合作用19
• 1.2.3 蚯蚓提取物对动物创伤的临床应用19-20
• 1.3 研究目的及意义20-22
• 二、实验材料与研究方法22-30
• 2.1 实验动物22
• 2.1.1 蚯蚓22
• 2.1.2 小鼠22
• 2.2 实验材料22-24
• 2.2.1 实验仪器22-23
• 2.2.2 耗材、药品、试剂23-24
• 2.2.3 试剂盒24
• 2.3 实验方法24-30
• 2.3.1 蚯蚓抗损伤有效成分的技术路线24-25
• 2.3.2 蚯蚓抗损伤有效成分的提取工艺25-26
• 2.3.2.1 蚯蚓粗样品的制备25
• 2.3.2.2 硫酸铵盐析、超滤25-26
• 2.3.3 蚯蚓抗损伤有效成分蛋白分子量测定及抑菌性实验26
• 2.3.3.1 蚯蚓抗损伤有效成分蛋白分子量测定26
• 2.3.3.2 蚯蚓抗损伤有效成分抑菌性实验26
• 2.3.4 蚯蚓抗损伤制剂的制备26-27
• 2.3.5 动物实验27-28
• 2.3.5.1 实验动物及分组27
• 2.3.5.2 动物机械性损伤模型的制作27-28
• 2.3.5.3 给药方式28
• 2.3.6 实验观察指标与检测方法28-30
• 2.3.6.1 临床观察28
• 2.3.6.2 局部观察28
• 2.3.6.3 组织学观察28-29
• 2.3.6.4 相关免疫学指标测定29-30
• 2.3.7 数据处理与统计学检查30
• 三、实验结果与分析30-44
• 3.1 蚯蚓抗损伤有效成分蛋白分子量及抑菌性测定30-32
• 3.1.1 蛋白分子量测定30-31
• 3.1.2 蚯蚓抗损伤制剂对常见细菌的抑菌性31-32
• 3.2 临床观察32-34
• 3.3 创面愈合率和愈合时间比较34-35
• 3.4 血液学测定结果35-36
• 3.5 组织病理学观察36-39
• 3.6 ki-67蛋白在小鼠皮肤中免疫组化的表达39-42
• 3.7 血清相关指标的测定结果42-44
• 3.7.1 血清中羟脯氨酸含量的测定结果42-43
• 3.7.2 血清中IL-6含量的测定结果43
• 3.7.3 血清中TGF-β含量的测定结果43-44
• 四、讨论44-50
• 4.1 蚯蚓抗损伤有效成分的分离工艺44-45
• 4.2 蚯蚓抗损伤有效成分制剂的筛选45-46
• 4.3 蚯蚓抗损伤有效成分促进小鼠创伤愈合作用46-48
• 4.3.1 调节血细胞及毛细血管作用46-47
• 4.3.2 促进创伤组织生长47-48
• 4.3.3 调节羟脯氨酸(Hyp)含量的作用48
• 4.4 蚯蚓抗损伤有效成分对细胞因子的影响48-50
• 五、全文总结50-52
• 参考文献52-59
• 中英文缩词表59-60
• 致谢60-61
• 个人简介61

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本文编号：611365