N-甲基靛红酸酐标记杠柳新苷P分离粘虫中肠结合蛋白的研究

发布时间：2017-08-19 18:35

  本文关键词：N-甲基靛红酸酐标记杠柳新苷P分离粘虫中肠结合蛋白的研究

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【摘要】：近年来西北农林科技大学农药研究所对杀虫植物杠柳(Periploca sepium Bunge)的活性成分及其杀虫作用进行了比较系统的研究。为了进一步的研究杠柳杀虫活性成分杠柳新苷P的杀虫机理,本文对杠柳新苷P进行修饰标记后通过药物与中肠蛋白离体孵育以及活体饲喂两种不同处理方法,对杠柳新苷P作用于东方粘虫幼虫中肠组织上的结合蛋白进行了初步研究。结果如下:(1)进行了N-甲基靛红酸酐对杠柳新苷P的标记修饰,得到标记产物杠柳新苷P-MIA,其对三龄粘虫幼虫的中毒症状与杠柳新苷P相同,载毒5μg的0.5cm×0.5cm小麦叶片饲喂后48 h死亡率为12.5%,低于相同剂量下杠柳新苷P的活性。(2)将P-MIA活体饲喂粘虫六龄幼虫提取的中肠粗蛋白和P-MIA与粘虫六龄幼虫中肠粗蛋白离体孵育后,在紫外波长350nm下检测,用Q-Sepharose阴离子交换柱层析分别分离4个不同处理组(CK、杠柳新苷P处理组、标记物P-MIA、邻甲氨基苯甲酸甲酯)粗蛋白,对吸收值有差异馏分的蛋白进行SDS-PAGE电泳,对相关蛋白条带进行蛋白质谱分析。鉴定得到以下8种杠柳新苷P结合蛋白:类异翅盘蛋白、二磷酸核苷激酶、乙醇脱氢酶、甲基丙二酸半醛脱氢酶、双特异性磷酸酶、果糖-1,6-二磷酸醛缩酶、Fe2+依赖的加氧酶超家族、过氧化氢酶。(3)将P-MIA活体饲喂粘虫六龄幼虫提取的中肠BBMV和P-MIA与粘虫六龄幼虫中肠BBMV离体孵育后,再用Q-Sepharose阴离子交换柱层析,对BBMV中疑似蛋白条带进行蛋白质谱分析,鉴定得到了以下10种结合蛋白,分别为:类异翅盘蛋白、Fe2+依赖的加氧酶超家族、氨肽酶、过氧化氢酶、双链RNA结合蛋白、NADH泛醌氧化还原酶、二硫键异构酶、苯基贮存蛋白、跨膜蛋白、精氨酸激酶。
【关键词】：东方粘虫 中肠细胞 杠柳新苷P 结合蛋白
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S433.4
【目录】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-11
• 第一章 文献综述11-23
• 1.1 杠柳化合物的相关研究概况11-18
• 1.1.1 杠柳所属植物的相关研究11
• 1.1.2 杠柳化合物的主要成分11-16
• 1.1.3 杠柳新苷类化合物的毒理学研究16-18
• 1.2 蛋白质标记技术的研究概况18-22
• 1.2.1 蛋白质标记技术的种类以及应用18-21
• 1.2.2 N -甲基靛红酸酐的研究21-22
• 1.3 本课题的研究依据、思路22-23
• 第二章 杠柳新苷P标记物的制备23-26
• 2.1 材料与方法23
• 2.1.1 材料23
• 2.1.2 标记物的化学合成23
• 2.1.3 标记物的活性测定23
• 2.2 结果与分析23-25
• 2.2.1 标记产物的鉴定23-25
• 2.2.2 生测实验结果25
• 2.3 小结与讨论25-26
• 第三章 杠柳新苷P结合蛋白的分离鉴定26-44
• 3.1 材料与方法26-32
• 3.1.1 材料26-28
• 3.1.2 活体饲喂法分离粗蛋白中杠柳新苷标记物P-MIA的结合蛋白28-29
• 3.1.3 离体孵育分离粗蛋白中杠柳新苷标记物P-MIA的结合蛋白29-30
• 3.1.4 离体孵育分离中肠BBMV中杠柳新苷标记物P-MIA的结合蛋白30-31
• 3.1.5 活体饲喂法分离中肠BBMV中杠柳新苷P-MIA的结合蛋白31-32
• 3.2 结果与分析32-42
• 3.2.1 粗蛋白中结合蛋白的分离鉴定32-37
• 3.2.2 中肠BBMV中结合蛋白的分离鉴定37-42
• 3.3 小结与讨论42-44
• 第四章 结论44-45
• 参考文献45-50
• 附图50-54
• 致谢54-55
• 作者简介55

【参考文献】

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本文编号：702314