Nlrp9b在小鼠早期胚胎发育中的表达、定位及功能

发布时间：2017-09-06 19:07

  本文关键词：Nlrp9b在小鼠早期胚胎发育中的表达、定位及功能

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【摘要】：实验以小鼠卵母细胞和早期胚胎为研究对象,采用免疫组化、qRT-PCR、 Western blot、免疫荧光和RNA干扰等方法研究Nlrp9b在小鼠卵子发生和早期胚胎发育过程中的表达、定位和功能,利用多种生物信息学软件对小鼠Nlrp9b基因编码的氨基酸序列进行分析,并通过同源建模对翻译的蛋白质的三维结构进行预测。结果如下：(1)利用RT-PCR和免疫印迹方法分析Nlrp9b在小鼠多个组织中的表达,结果表明Nlrp9b的转录物仅在小鼠的卵巢和小肠中存在,NLRP9B蛋白的表达被限制在不同卵泡的卵母细胞中而且随着小鼠年龄的增加而下降。免疫荧光结合激光共聚焦显微镜的分析表明NLRP9B蛋白主要定位在附植前胚胎的胞质中。(2)在GV期卵母细胞中沉默Nlrp9b并不影响小鼠卵母细胞的成熟率,将这些Nlrp9b沉默的成熟卵母细胞进行孤雌激活和体外培养,结果显示这些孤雌胚胎在体外能够正常发育；同样合子中沉默Nlrp9b后,NLRP9B蛋白显著降低但胚胎发育没有被阻滞,与对照组相比,沉默组的囊胚形成率也无差异,结果表明小鼠卵母细胞的成熟和早期胚胎发育不需要Nlrp9b的参与。(3)用生物信息学软件分析表明Nlrp9b基因的进化与Nlrp9a和Nlrp9c的关系较远,同时分析了NLRP9B蛋白的全长1003aa,等电点为7.82,分子质量114802.16,极性氨基酸占41.3%,二级结构的螺旋部分占将近一半49.05%,具有两个核苷酸结构域DAPIN和NACHT,7个亮氨酸重复结构,NLRP9B不含有信号肽位点。
【关键词】：Nlrp9b RNA干扰 功能 生物信息学
【学位授予单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S814.6
【目录】：

• 摘要7-8
• Abstract8-10
• 文献综述10-21
• 第一章 Nlrp基因家族研究进展10-14
• 1.1 Nlrp基因家族概述10-11
• 1.2 Nlrp基因家族与生殖特异性有关的基因11-12
• 1.3 Nlrp9基因的发现与结构特征12
• 1.4 Nlrp9的研究现状12-14
• 第二章 小鼠早期胚胎发育的研究进展14-21
• 2.1 小鼠早期胚胎发育特点的研究进展14-18
• 2.1.1 生殖细胞起源与生长14-15
• 2.1.2 合子的卵裂15
• 2.1.3 胚胎基因组的激活15-16
• 2.1.4 桑椹胚致密化16-17
• 2.1.5 囊胚的形成17-18
• 2.2 小鼠胚胎发育的影响因素研究进展18-21
• 2.2.1 母源效应基因对早期胚胎发育的影响18-19
• 2.2.2 基因组印迹对早期胚胎发育的影响19
• 2.2.3 环境因素影响早期胚胎发育19-21
• 实验研究21-43
• 第三章 Nlrp9b在小鼠早期胚胎上的表达与定位21-29
• 3.1 实验材料与方法21-24
• 3.1.1 实验材料21
• 3.1.2 实验方法21-24
• 3.2 实验结果24-27
• 3.2.1 Nlrp9b在小鼠不同组织中的表达24-25
• 3.2.2 NLRP9B蛋白在小鼠卵巢组织中的表达25
• 3.2.3 NLRP9B蛋白在小鼠附植前胚胎中的表达和定位25-27
• 3.3 讨论27
• 3.4 小结27-29
• 第四章 Nlrp9b在小鼠早期胚胎发育中的功能29-37
• 4.1 材料与方法29-30
• 4.1.1 材料29
• 4.1.2 实验方法29-30
• 4.2 结果30-35
• 4.2.1 沉默Nlrp9b对小鼠卵母细胞成熟的影响30-32
• 4.2.2 卵母细胞中Nlrp9b的沉默对孤雌激活后胚胎发育的影响32-33
• 4.2.3 合子中沉默Nlrp9b对附植前胚胎发育的影响33-35
• 4.3 讨论35-36
• 4.4 小结36-37
• 第五章 生物信息学分析37-43
• 5.1 材料与方法37
• 5.1.1 材料37
• 5.1.2 方法37
• 5.2 结果与分析37-42
• 5.2.1 构建系统发生树37-38
• 5.2.2 NLRP9B蛋白质一级结构组成分析38-39
• 5.2.3 二级结构组成分析与三级结构构建39-41
• 5.2.4 NLRP9B蛋白信号肽分析41
• 5.2.5 NLRP9B的跨膜分析41-42
• 5.3 小结42-43
• 全文结论43-44
• 参考文献44-50
• 缩略词50-51

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