副猪嗜血杆菌分型血清的制备及四川地区血清流行病学调查

发布时间：2017-09-08 01:44

  本文关键词：副猪嗜血杆菌分型血清的制备及四川地区血清流行病学调查

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【摘要】：副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis, HP S)引起猪的一种接触性细菌性传染病,严重威胁着养猪业的健康发展。长期以来,HPS血清型复杂,分型血清制备较困难,方法不标准,为有利于本病的病原学诊断,本试验采用HPS的15个血清型标准菌株制备免疫原免疫健康雄性家兔,成功制备HPS分型血清,并选用琼脂扩散试验对四川地区HPS田间分离株进行血清型鉴定,旨在从病原学角度对四川地区HPS优势血清型的流行情况以及血清型的分布规律进行调查,为四川地区该病的针对性防控提供科学依据。1.HPS分型血清制备的免疫程序的优化筛选从澳大利亚昆士兰州动物研究所购买HPS的15个血清型的标准菌株,对标准菌株进行复苏与鉴定,进一步证实标准菌株的准确性,为分型血清的制备奠定基础。通过对本实验室原有免疫程序进行优化,优化后的免疫程序提高了菌液免疫次数,缩短了免疫间隔时间,降低了免疫剂量,同时基础免疫之前增加了免疫诱导。采用优化后的免疫程序进行HPS5型分型血清的制备,同时以文献报道的3种不同的免疫程序作为对照组,免疫结束后心脏采血,并分离血清,对血清采用琼脂扩散试验进行特异性检测,采用IHA试剂盒进行抗体效价检测。结果表明：血清特异性良好,试验组与对照组家兔血清通过琼脂扩散试验均能产生明显沉淀线,空白对照组琼脂扩散试验未产生沉淀线,并且试验组血清抗体效价达1：32,均高于3个对照组,因此,优化后的免疫程序可推广用于HPS其它血清型分型血清的制备。2.HPS分型血清的制备及其临床应用利用HPS的15个血清型的标准菌株制备免疫原,采用优化后的免疫程序通过皮下注射与耳缘静脉注射免疫原的方式免疫健康雄性家兔,免疫结束后采集心血并分离血清,对血清进行特异性与抗体效价检测,结果表明血清特异性良好,抗体效价均达到1：8以上,用于HPS田间分离菌株的血清型鉴定取得良好效果。本实验室2013年至2014年,从四川22个市区80个猪场中共采集498份病料,从这些病料中共分离出80株HPS。采用琼脂扩散试验对所有分离株进行血清型鉴定,所分离的80株HPS中血清4型占28.75%(23/80)、5型占35.00%(28/80)、12型占6.25%(5/80)、13型占7.50%(6/80)、15型占1.25%(1/80)、不能分型的菌株占21.25%(17/80),结果表明血清型4、5、12、13为四川地区主要流行的血清型,这一结果为四川地区防控HPS提供了科学依据。
【关键词】：副猪嗜血杆菌 免疫程序 血清制备 流行病学
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S858.28
【目录】：

• 中文摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 符号说明7-12
• 第一章 文献综述12-22
• 1 副猪嗜血杆菌病12
• 2 病原学研究12-16
• 2.1 形态特征12
• 2.2 培养特性研究12-13
• 2.3 副猪嗜血杆菌的分型研究13-14
• 2.3.1 血清学分型13-14
• 2.3.2 基因型分型14
• 2.4 副猪嗜血杆菌的毒力研究14-16
• 2.4.1 清型与毒力的关系14-15
• 2.4.2 主要毒力因子15-16
• 3 流行病学研究16-18
• 3.1 宿主感染情况16
• 3.2 副猪嗜血杆菌的混合感染情况16-17
• 3.3 副猪嗜血杆菌的血清学流行病学17-18
• 3.4 副猪嗜血杆菌的耐药性研究18
• 4 副猪嗜血杆菌病的诊断与防治18-20
• 4.1 临床诊断18-19
• 4.2 病原学诊断19
• 4.3 分子生物学诊断19-20
• 4.4 HPS的血清学诊断20
• 4.5 HPS的防治20
• 5 本研究的目的与意义20-22
• 第二章 HPS分型血清制备的免疫程序的优化筛选22-38
• 1 材料22-23
• 1.1 试验菌株与血清22
• 1.2 试验动物22
• 1.3 主要试剂22-23
• 1.4 主要仪器设备23
• 1.5 主要培养基23
• 2 方法23-28
• 2.1 标准菌株的复苏23-24
• 2.1.1 标准菌株的复苏与培养23-24
• 2.1.2 革兰氏染色观察24
• 2.1.3 PCR鉴定24
• 2.2 免疫程序的筛选24-28
• 2.2.1 免疫原的制备24-25
• 2.2.1.1 HPS5型标准菌株的复苏与培养24-25
• 2.2.1.2 细菌的灭活与检验25
• 2.2.1.3 细菌的浓缩25
• 2.2.1.4 抗原的乳化25
• 2.2.1.5 疫苗的检验25
• 2.2.2 免疫程序25-27
• 2.2.2.1 优化后的免疫程序25-26
• 2.2.2.2 对照组的免疫程序26-27
• 2.2.3 血清抗体琼脂扩散试验阳性时间的检测27-28
• 2.2.4 血清抗体效价的检测28
• 2.2.5 血清特异性的检测28
• 3 结果28-35
• 3.1 标准菌株鉴定结果28-33
• 3.1.1 标准菌株的复苏与培养结果28-29
• 3.1.2 革兰氏染色镜检形态29-32
• 3.1.3 PCR鉴定结果32-33
• 3.2 血清检测结果33-35
• 3.2.1 HPS5型血清琼脂扩散试验阳性时间检测结果33
• 3.2.2 血清抗体效价检测结果33-34
• 3.2.3 血清特异性的检测结果34-35
• 4 讨论35-38
• 第三章 HPS15个血清型分型血清的制备及其临床运用38-48
• 1 材料38-39
• 1.1 主要试剂38
• 1.2 试验动物38
• 1.3 试验菌株38
• 1.4 主要仪器设备38-39
• 2 方法39-42
• 2.1 HPS的分离鉴定39-41
• 2.1.1 病料采集39-40
• 2.1.2 HPS的分离鉴定40-41
• 2.2 HPS分型血清的制备41-42
• 2.2.1 免疫原的制备41
• 2.2.2 免疫程序41
• 2.2.3 血清抗体琼脂扩散试验阳性时间的检测41
• 2.2.4 血清抗体效价的检测41
• 2.2.5 血清特异性的检测41-42
• 2.3 HPS分型血清的临床应用42
• 3 试验结果42-45
• 3.1 HPS分离鉴定结果42-43
• 3.2 血清琼脂扩散试验阳性时间检测结果43
• 3.3 血清抗体效价检测结果43-44
• 3.4 血清特异性的检测结果44
• 3.5 四川地区80株HPS血清型鉴定结果44
• 3.6 四川地区HPS血清型的流行情况及分布规律44-45
• 4 讨论45-48
• 第四章 结论48-49
• 参考文献49-56
• 致谢56

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