人类正常精浆蛋白液化过程的二维电泳研究

发布时间：2021-08-24 14:03

　　研究目的：在本所建立和优化人类精浆蛋白提取方法，建立较窄pH梯度（pH4-7）二维电泳图谱和液化各个时间点宽pH梯度（pH3-10）二维电泳图谱。利用差异蛋白质组学的方法分析精浆蛋白在液化过程中各种蛋白的变化规律，初步探讨其在精液液化和男性生殖中的作用。材料：随机选取13名身体健康并排除遗传病史，年龄在20—30岁之间，且精液确定已使AID病人受孕并分娩了正常的婴儿的供精者，所有供精者都签署了供精知情同意书。所有供精者在标本采集前后微生物感染检查均为阴性。收集正常男性精浆标本，取不液化、液化10min、30min、60min以及镜下精液液化时等几个时间点的精浆蛋白。方法：1．比较TCA/丙酮沉淀蛋白抽提法和超滤/变性蛋白抽提法提取蛋白的优劣，选取和优化提取效率较高的蛋白抽提法提取蛋白。2．二维电泳技术分离蛋白点并利用差异蛋白质组学方法比较不同液化时间的精浆蛋白进行差异分析。3．比较临床检测镜下水平液化时的精浆蛋白二维电泳图谱与各时段精浆蛋白二维电泳图谱。4．MALDI-TOF质谱鉴定所获得的发生变化的蛋白点进行生物信息学分析。结果：1．比较了两种二维电泳蛋白提取方法，结果显示TCA/丙... 

【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：46 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

精液液化速率测定装置

之内;(4)每管加入500pl沉淀液(preeipitant)，并短暂振荡，室温下孵育3分钟;(5)每管加入500pl共沉淀液(eo一preeipitant)，并短暂振荡混匀;(6)100009离心10分钟，以沉淀蛋白质;(7)小心倒去管中的液体，避免将沉淀的蛋白质打散;(8)再次短暂离心各管，将管壁上的残余液体离心至管底，用移液器吸去底的液体，使没有可见的液体残留;(9)每管加入100pl铜离子溶液(coppersolution)和400pl纯水，速振荡，使沉淀的蛋白质重新溶解;(10)每管加入lml显色工作液，立即颠倒混匀;(11)在室温下孵育20分钟;(12)每管吸取200pl至96孔板中，以纯水为对照，在波长490nm处读吸光值。该步骤应在加入显色工作液后40分钟内完成;(13)绘制标准曲线，计算直线回归方程，算出待测样品的蛋白浓度。

图3TCA抽提超滤/变性抽提Marker图32.使用精液液化速率测定装置测定所几个时间段的精液液化率液为凝固状态，无法通过滤过膜;其平均液化水瓶盖在10分为50士5%，30分钟时精液的液化率达到92%以上，还有少量过。}精液液化率一时间图}

【参考文献】：
期刊论文
[1]人精液液化速率的简易定量测定术及其方法学评价[J]. 张智广,韩咪莎,林芸秀,江一平.  福建医科大学学报. 2006(06)
[2]利用H4和SAX-2蛋白质芯片技术筛查少精子症患者精浆标志物[J]. 杨欢,张杰,张炜,龙文,张孝斌.  中华男科学杂志. 2006(01)



本文编号：3360124