白细胞介素38和β2糖蛋白Ⅰ在乙型肝炎病毒相关性肝病中的表达及功能

发布时间：2018-03-20 14:38

本文选题：白细胞介素38　切入点：天门冬氨酸氨基转移酶　出处：《吉林大学》2016年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景:乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是一个小DNA病毒,属于嗜肝DNA病毒科。HBV感染是一个全球性的健康威胁。全球约1/3人曾感染HBV,3.4-4亿人HBV表面抗原(HBs Ag)呈阳性。HBV是慢性肝炎、肝硬化及原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的首要病因。每年HBV相关终末期肝病及HCC能造成超过50-100万人死亡。慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)治疗的首要目标是通过有效抑制HBV DNA来减少肝硬化及HCC的发生几率。目前,批准治疗CHB的药物有两种,为干扰素和核苷(酸)类似物。现在,大家认同宿主适应性免疫反应,尤其是细胞免疫反应,对HBV感染的最终结果起到至关重要的作用。许多细胞因子也参与了对HBV感染的免疫应答。HCC是世界上第五大常见的癌症,是全球癌症相关死亡的第三大原因。HCC缺乏能够早期诊断的敏感且特异的生物标志物,极大地阻碍了治疗效果。至今为止,只有少许血清标志物可以用来检测HCC,其中最为常见的标志物为甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)。但是AFP的敏感性和特异性达不到一个优秀的肿瘤标志物的要求。因此我们迫切的需要一个新的标志物来提高早期HCC的检测。所以,我们要继续探寻治疗CHB的新方法以阻止其进展;并且寻找一个更好的血清标志物实现对HBV相关性HCC的早期诊断。白细胞介素38(IL-38)是2001年被发现的IL-1家族的新成员。因为IL-38与IL-1Ra拥有41%序列同源性,与IL-36Ra具有43%的序列同源性,推测IL-38可能具有抑制炎症反应的作用。这一推测获得了研究支持,实验表明重组的IL-38能与IL-36受体相连并且在炎症状态下抑制外周血单个核细胞分泌IL-17、IL-22和IL-8,由此推测IL-38可能具有IL-36受体阻滞剂功能。另有研究表明抑制人外周血单个核细胞表达IL-38后,狼疮相关性促炎因子的表达显著增加。基因相关研究表明IL-38与银屑病性关节炎、强直性脊柱炎、类风湿性关节炎等炎症性疾病有关。IL-38在CHB中的表达及其功能尚未有报道。β2糖蛋白Ⅰ(Beta 2-Glycoprotein I,β2GPI),又名为载脂蛋白(apolipoprotein H,APOH),在1961年被发现,主要在肝脏合成。它在抗磷脂抗体综合征的阴离子抗原自身抗体识别过程中起辅助作用,并与凝血调节和复发性流产有关。在各种代谢综合征及疾病状态下的个体β2GPI的表达具有很大的差异性,提示β2GPI可能具有重要的临床价值。研究发现,β2GPI可以与重组的HBs Ag相连接,推测β2GPI可能促进HBV进入肝细胞。并且,β2GPI与HBs Ag的结合活性在HBV复制活跃的病人的血清中增高。我们团队的前期研究也证实了β2GPI与HBs Ag的特异性结合。此外,我们首次证实SMMC-7721 HCC细胞膜上存在能与β2GPI特异性结合的蛋白,这个蛋白经鉴定为annexin II。我们后来发现高表达的β2GPI能促进HBs Ag与细胞表面结合,从而促进病毒颗粒与钠离子牛磺胆酸共转运多肽(sodium-taurocholate co-transporting polypeptide,NTCP)受体的接触,并且β2GPI与膜连蛋白ⅠI(annexin II)的结合作用能促进病毒和细胞膜融合的发生。我们还发现NF-κB通路可以在β2GPI和HBs Ag的共同作用下被激活,从而促进了HBV相关性HCC的发生。然而,β2GPI能否作为HBV相关性HCC的肿瘤标志物以及它在急性乙型肝炎(acute hepatitis B,AHB)和CHB患者中的表达及意义尚不清楚。目标:研究IL-38在CHB患者抗病毒治疗过程中的表达情况及临床意义;β2GPI在HBV相关性HCC、CHB、AHB患者中的表达情况、临床意义及作为HBV相关性HCC标志物的价值研究。方法:乙肝病毒e抗原(HBe Ag)阳性的CHB患者经系统口服替比夫定(Ld T,600mg/天)治疗52周,并每隔12周进行一次体格检查及实验室检查。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测46例CHB患者在替比夫定治疗过程中血清IL-38的动态表达水平和43例健康对照组的血清IL-38的表达水平。ELISA检测43例HBV相关性HCC、54例CHB、10例AHB患者及12例健康人的血浆β2GPI的表达水平。微量样本多指标流式蛋白定量技术(cytometric bead array,CBA)检测血清或血浆中T细胞因子的表达水平。罗氏公司全自动生化分析仪检测ALT、AST的水平;化学发光分析仪检测HBs Ag、HBs Ab、HBe Ag和HBe Ab的表达水平;荧光定量PCR检测HBV DNA载量的变化。结果:(1)治疗前CHB患者血清IL-38的表达水平显著高于健康对照组的血清IL-38表达水平;(2)Ld T抗病毒治疗12周时,CHB患者的血清IL-38表达水平显著下降,达到健康人的水平,并且在此之后保持稳定;(3)治疗前CHB患者的血清IL-38的表达水平和血清AST表达水平具有正相关性;(4)治疗前血清IL-38高表达的患者与血清IL-38低表达的患者相比,在Ld T抗病毒治疗中有更高的几率获得病毒学应答;(5)血清IL-38的表达与抗病毒治疗原发性不应答有关;(6)抗病毒治疗过程中,CHB患者血清IL-38的表达水平与血清IL-6、IL-12的表达水平具有正相关性;(7)HBV相关性HCC及CHB患者的血浆β2GPI表达水平显著高于健康人的血浆表达水平,但AHB患者的血浆β2GPI表达水平与健康人相当;(8)β2GPI联合AFP能增加AFP对HBV相关性HCC的诊断价值;(9)CHB患者血浆β2GPI的表达与HBe Ag的表达有关;(10)AHB患者血浆β2GPI的表达水平与血浆IFN-γ的表达水平呈正相关。结论:(1)IL-38和β2GPI的表达水平对乙型肝炎病毒相关性肝脏疾病在治疗和诊断上具有提示意义;(2)治疗前血清IL-38高表达的CHB患者更容易在Ld T的治疗过程中获得有效的病毒学应答;未经治疗的CHB患者血清中升高的IL-38表达水平反应了肝脏损伤的程度,同时也是宿主自身强力清除HBV感染的间接提示;(3)β2GPI在HBV相关性HCC患者的血浆中表达水平显著增高,提示了β2GPI具有作为HBV相关性HCC临床肿瘤标志物的潜在价值。
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【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R512.62;R575

【参考文献】