重庆地区耐多药结核分枝杆菌对二线抗结核药物的耐药现状分析及其机制探讨

发布时间：2019-01-26 20:59

【摘要】：目的1.了解重庆地区耐多药结核病(MDR-TB)患者对二线抗结核药物的耐药现状,为制定合理的MDR-TB化疗方案及适合本地区的MDR-TB控制策略提供参考和依据。2.分析重庆市MDR-TB临床菌株二线抗结核药物耐药相关基因gyr A、gyr B、rrs和eis的突变特征及其与二线抗结核药物耐药的关系,为探索二线抗结核药物的耐药机制及适合本地区耐药分子生物学快速检测方法的建立提供科学依据。方法1.依托重庆市MDR-TB防治及可疑者筛查工作,对2015年1月至2016年8月全市39个区(县)结核病防治机构收治的698例可疑MDR-TB患者涂阳痰标本临床分离株,进行噻吩-2-羧酸肼(TCH)和对硝基苯甲酸(PNB)生长试验,以初步鉴定菌种;对初步鉴定为结核分枝杆菌的菌株,应用比例法检测其对一、二线抗结核药物的敏感性,对最终确诊的168例MDR-TB患者的二线抗结核药物耐药状况进行分析。2.对以上168例MDR-TB患者的痰标本临床分离株,用PCR-DNA直接测序技术,分别对氧氟沙星(Ofx)耐药相关基因gyr A、gyr B,卡那霉素(Km)耐药相关基因rrs、eis的突变特征进行分析。结果1.168例MDR-TB患者对6种二线抗结核药物的总耐药率为50.6%(85/168),其中,Ofx任意耐药率最高,为41.7%(70/168),之后分别为Km(16.7%)、对氨基水杨酸(PAS)(14.3%)、阿米卡星(Am)(13.1%)、卷曲霉素(Cm)(8.3%)及丙硫异烟胺(Pto)(7.7%)。168例MDR-TB患者中,发生广泛耐药结核病(XDR-TB)和广泛耐药结核病前期(Pre-XDR-TB)共计77例(45.8%,77/168),其中XDR-TB患者22例(13.1%),Pre-XDR-TB患者55例(32.7%)。各登记分类中复治失败患者的XDR-TB及Pre-XDR-TB总发生率最高,为60.9%(14/23)。2.168株MDR结核分枝杆菌中有70株对Ofx耐药,其中57株(81.4%,57/70)发生gyr A基因突变,突变位点包括74、88、89、90、91和94位密码子,94位突变频率最高,为52.9%(37/70)。gyr A基因主要突变类型为Asp94Gly(17株)、Ala90Val(14株)、Asp94Ala(10株)。另外,57株gyr A基因突变株中有5株为双位点突变。70株Ofx耐药株中,5株发生了gyr B基因突变,突变率为7.1%(5/70),突变类型为Asp461Asn 2株、Gly512Arg 3株。3.168株MDR结核分枝杆菌中有28株对Km耐药,28株Km耐药表型菌株中,19株(67.9%,19/28)发生rrs基因突变,4株(14.3%,4/28)发生eis基因突变。19株rrs基因突变类型为A1401G 18株,G1339A 1株。4株eis基因启动子区突变类型为G(-10)A 3株、C(-14)T1株。4.与传统比例法药敏实验比较,用gyr A基因突变检测Ofx耐药性,其敏感度、特异度分别为81.4%、92.9%,阳性、阴性预测值是89.1%、87.5%;对于gyr B基因,虽然检测Ofx耐药的特异度(94.9%)较高,但敏感度、阳性预测值及阴性预测值分别仅为7.1%、50.0%及58.9%。以rrs基因突变作为Km耐药菌株诊断标记物,其敏感度、特异度分别为67.9%、99.3%,阳性、阴性预测值是95.0%、93.9%;eis基因检测Km耐药的敏感度、特异度、阳性及阴性预测值分别为14.3%、99.3%、80.0%及85.3%。结论1.重庆地区MDR-TB患者对二线抗结核药物尤其是Ofx的耐药状况较为严重,MDR-TB患者中XDR-TB和Pre-XDR-TB发生率较高。应加强对MDR-TB患者的耐药性监测,防止Pre-XDR-TB甚至XDR-TB的产生。2.gyr A基因突变是重庆市MDR结核分枝杆菌对Ofx耐药的主要机制,且以90、91、94位密码子突变为主。gyr A基因是比较理想的检测Ofx耐药的分子标记物,具有较好的诊断Ofx耐药菌株的临床应用价值;gyr B基因与Ofx耐药无明显相关性,对于Ofx耐药性的诊断,gyr B基因并不是一个很好的分子标记物。3.重庆地区Km耐药的主要机制为rrs基因第1401位A→G突变,其次还与eis基因启动子区突变有关。rrs基因应用于本地区Km耐药的分子生物学快速检测是可行的,eis基因是一种较有前途的耐药诊断标记物,可以与rrs基因进行联合检测,以提高本地区Km耐药性快速检测的敏感度和准确度。
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【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R446.5;R52

【参考文献】