pks12敲除对结核分枝杆菌存活影响及机制研究

发布时间：2020-05-25 23:44

【摘要】：目的:探讨结核分枝杆菌pks12(Rv2048c)基因对结核分枝杆菌在巨噬细胞内存活的影响及其机制。方法:利用噬菌体介导的结核分枝杆菌基因敲除技术敲除实验室标准菌株H37Rv pks12基因。通过抗酸染色及固体培养观察敲除菌株的形态变化以及通过测定生长曲线观察敲除株的生长情况,比较敲除株H37RvΔRv2048c及H37Rv-WT株(野生型)感染巨噬细胞后结核分枝杆菌的存活能力,通过Real-time PCR及Elisa技术从m RNA及蛋白质水平了解pks12对受感染的巨噬细胞炎症细胞因子表达水平的影响,通过Western blot进一步了解调节炎症细胞因子表达的相关炎症信号通路,进一步探讨结核病的发病机制。结果:成功敲除H37Rv基因组中pks12基因;pks12基因敲除使结核分枝杆菌生长速率减慢,菌落由R型转变为S型;H37RvΔRv2048c菌株在巨噬细胞内的存活能力明显低于H37Rv-WT;m RNA水平及蛋白质水平检测结果显示,H37RvΔRv2048c促进结核分枝杆菌感染巨噬细胞TNF-α和IL-6表达量显著增加,差异具有统计学意义,且促进NF-κB信号通路中p65蛋白及IκBα的磷酸化水平显著上调。结论:pks12缺失可促进细胞因子TNF-α与IL-6的分泌,有利于宿主细胞清除结核分枝杆菌,不利于结核分枝杆菌逃逸宿主细胞的免疫攻击,抑制结核分枝杆菌在感染巨噬细胞中的存活,其可能机制是pks12通过NF-κB信号通路调节巨噬细胞炎症细胞因子的表达。本研究进一步了解了结核病的发病机制并为药物的研究提供了新靶点。
【图文】：

NAMini 柱装入 2 mL 收集管中。将步骤 8 中移到色谱柱中。10000 rpm 离心 1 min 后丢第二个 2mL 收集管中，加入 500μLBuffer，将吸附柱再次放入收集管中。入 700μL 用乙醇稀释的 DNA 洗涤缓冲液洗。心 2 min 以干燥吸附柱。 1.5 mLEP 管（去酶）中，，向吸附膜中央悬冲液，室温下孵育 3~5 min，12000 rpm 离心脱液被再次滴入吸附柱中，室温静置 2 min基因组 DNA。构建（如图 1 所示）

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【学位授予单位】：遵义医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R52

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1 王鸿;pks12敲除对结核分枝杆菌存活影响及机制研究[D];遵义医科大学;2019年

本文编号：2680924