囊型肝包虫病自然病程的体外基础实验研究

发布时间：2020-06-19 21:40

【摘要】：目的:本实验以羊源细粒棘球蚴原头蚴为实验材料,通过体外长期培养建立稳定的细粒棘球蚴原头蚴体外成囊培养模型,观察胆汁及大肠杆菌对细粒棘球蚴原头蚴及囊泡生长发育的作用,并进一步探讨胆瘘及感染因素对囊型肝包虫病自然病程的影响。方法:(1)从感染囊型包虫病的羊肝脏病灶中提取新鲜的细粒棘球蚴原头蚴,消化处理后伊红染色检测原头蚴活力,计算总数确定培养密度,在37℃、5%CO_2的恒温培养箱中培养于含20%血清的以RPMI-1640为主的培养基中。在体外连续培养的过程中,随机取适量样品于倒置显微镜下观察,拍照记录原头蚴随培养时间的形态学变化,观察总结原头蚴体外培养生长发育规律。(2)分别将低浓度的胆汁及大肠杆菌菌液作用于体外培养的细粒棘球蚴原头蚴及其囊泡,光学显微镜下观察原头蚴及囊泡在作用的不同时间点的形态学变化;在电子显微镜下观察原头蚴及其囊泡的微观结构改变,并进行HE染色观察其组织病理学改变。结果:(1)体外培养原头蚴在第1周开始形成蒂端发泡,在体外培养的前6周,原头蚴的形态学以蒂端发泡为主要变化特征,其数量逐渐增加,体积逐渐增大。在第6周可观察到原头蚴外周形成一层角质层,其开始向成囊方向发育;原头蚴的体积随培养时间的延长逐渐增大,观察到最大囊的直径约为:1.2mm,在体外培养的第17周部分原头蚴囊外周的角质层开始变得毛糙,囊的体积缩小,其内部结构变得模糊不清,浓缩聚集成团,与外周的角质层有明显的界限,培养至7个月时,90%以上的囊泡出现上述形态学改变;原头蚴的最大成囊率约为11%。(2)低浓度胆汁作用原头蚴后,胆汁并没有直接在短时间内将原头蚴杀灭,此时原头蚴的活动度增加,外翻,随着培养时间的延长其周围也逐渐形成一层折光率较高的角质层,但其生长发育的速度明显低于同期对照组中的原头蚴,随作用时间的延长,胆汁作用组中的原头蚴的生长逐渐停滞,内部结构模糊不清,逐渐走向死亡。大肠杆菌作用原头蚴后,在作用48h时,几乎所有的原头蚴都失去正常形态,头钩散落,体积缩小;伊红染色也证实所有原头蚴都已失去活性,出现了快速死亡。胆汁及大肠杆菌作用于原头蚴囊泡的实验中观察到两组囊泡的形态结构较对照组出现了明显的变化,大部分囊泡出现了不同程度的皱缩,其外周角质层损害严重,内部结构固缩,出现角质层与生发层分离的现象,作用后囊泡的透射电镜结果和HE染色也证实了囊泡的膜结构发生了明显的破坏。结论:1成功建立体外培养细粒棘球蚴原头蚴成囊模型,体外培养原头蚴的体积随培养时间的延长存在从小到大再逐渐缩小的变化规律。2胆汁对原头蚴的生长发育具有抑制作用,大肠杆菌可使原头蚴及其囊泡快速死亡,且二者均能使囊泡膜结构的完整性被破坏,促进了包虫的老化死亡。3胆瘘和细菌感染是囊型肝包虫自然病程发生改变的重要影响因素,促进了包虫囊肿的死亡。
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R532.32
【图文】：

发泡,体外培养,变化规律,形成率

图 1-1.体外培养原头蚴随时间其形态学变化规律（5×10）。a、b、c、d、e、f、g、h 分别为体外培原头蚴第 0 天、1 个月、2 个月、3 个月、4 个月、5 个月、6 个月、7 个月时的形态学变化。Fig 1-1 The morphological changes of protoscolex cultured in vitro over time （5×10）. a, b, c d, e, f, g, hrepresent the morphological changes of protoscolex at the first day, the first month, the second month, thethird month, the fourth month, the fifth month, the sixth month and the seventh month respectively.3.2 体外培养原头蚴蒂端发泡的形成在体外培养的前六周，原头蚴的形态主要以蒂端发泡的形成及其体积的增大为主要变化特征（见图1-2），可见原头蚴随培养时间的延长蒂端发泡的形成逐渐增加，同时蒂端发泡的体积也随培养时间的延长逐渐增大，蒂端发泡的体积可超过原头蚴本身的体积数倍。此时原头蚴的活动度和外翻原头蚴的数量增加。从培养的第五周开始可见原头蚴的体积逐渐增大，且其进一步变得透明，体内的钙颗粒消失，外周形成折光率较高的角质层。细粒棘球蚴原头蚴体外培养蒂端发泡形成率随培养时间的延长逐渐增加，在体外培养的第5周蒂端发泡的形成率达95%，其后未见增加，后期随着培养时间的延长蒂端发泡形成率逐渐减少，原头蚴的蒂端发泡逐渐消失，原头蚴开始向成囊方向发育（如图1-3所示）。

形成率,体外培养,发泡,规律

1-3. 体外培养原头蚴前期蒂端发泡形成率随时间变化规ity of the formation rate of the vesicle at pedicle end of protoscover time in the first six weeks头蚴发育成囊过程中几种不同的形态过程中观察到原头蚴在向成囊方向发育的过程中可过自身不断膨大，然后周围形成一层角质层，体积有部分原头蚴是尾部膨大而头部未见增大，或者是如图1-4 c,d箭头所示）。还有部分原头蚴蒂端发泡其体积是原头蚴体积的数倍（见图1-4b,e），后逐g,h)，此种形态在原头蚴体外培养的早期较常见。

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