量子点免疫层析试纸条同步定量检测血液传染病三种指标的研究

发布时间：2020-07-13 22:16

【摘要】：乙型肝炎、丙型肝炎和艾滋病是三种常见的血液传染病,严重威胁着人类健康,在临床输血和献血过程中,国家卫生部规定医疗和卫生机构必须对这三种传染病进行强制性检测。目前,针对这三种血液传染病的临床诊断方法有很多,但各有缺点:如检测灵敏度较低,且不能同步定量检测;需要特殊检测仪器,且检测耗时较长等。针对这些检测方法的不足之处,本研究将量子点(Quantum dot)技术和免疫层析技术相结合,研制一种量子点免疫层析试纸条,从而实现乙型肝炎、丙型肝炎和艾滋病的同步定量检测。本文以EDC/NHS为反应活化剂,分别制备530nm CdSe/ZnS QD-抗HBsAg单抗、576nm CdSe/ZnS QD-HCV Ag和620nm CdSe/ZnS QD-HIV Ag偶联物,并将三种量子点偶联物喷涂于结合垫上,把抗HBsAg多抗、HCV Ag和HIV Ag包被于NC膜上作为检测线,质控线包被羊抗鼠IgG,然后将样品垫、结合垫、NC膜、吸水垫按顺序组装在PVC底板上,制备成量子点免疫层析试纸条。通过荧光阅读仪阅读量子点试纸条的检测带和质控带的荧光值,根据不同浓度的HBsAg、HCV抗体和HIV抗体的检测带(T)和质控带(C)荧光值的不同,可以得出T/C的比值,此比值对应HBsAg、HCV抗体和HIV抗体浓度做标准曲线,即可实现乙型肝炎、丙型肝炎和艾滋病的同步定量检测。本课题研究结果:(1)量子点免疫层析试纸条和胶体金试纸条以及ELISA法同时检测临床标本58份,其中HBsAg阳性38份,阴性20份,用量子点试纸条和胶体金试纸条以及ELISA法分别检测,比较结果显示:量子点试纸条的符合率为98.1%,灵敏度为100%,特异性为95%,检测下限浓度为2.6ng?ml,检测用时为10分钟。相对ELISA法,大大节省了检测时间,与金标法相比,灵敏度得到提高。(2)量子点试纸条同步检测HBsAg和HIVAb时,HBsAg阴性符合率为94.2%,HIVAb阴性符合率为89.6%;HBsAg阳性符合率为87.2%,HIVAb阳性符合率为83.7%;HBsAg检测灵敏度为95%,HIVAb检测的灵敏度为90.1%;同步检测HBsAg和HIVAb时,HBsAg和HIVAb的变异系数分别为12%和14.5%,均小于15%。(3)量子点免疫层析试纸条同步定量检测HBsAg、HCV Ab和HIV Ab探索实验显示:同步检测HBsAg、HCV Ab和HIV Ab时,对这三种指标的定量检测下限浓度分别为2.6 ng?ml、15 ng?ml和10 ng?ml。(4)量子点免疫层析试纸条在4-30℃保存1个月,其稳定性、特异性和灵敏度基本不变。通过将量子点技术和免疫层析技术相结合,以量子点作为荧光标记物,从而取代胶体金,研制一种量子点免疫层析试纸条,非常适合血液及其他样品的同步定量分析,可以实现乙型表面抗原、丙肝抗体和艾滋病抗体进行同步定量检测,从而使得血液传染病的检测更为简单、快速和经济,并建立一种特异性强、灵敏度高和稳定性好的膜相同步定量检测方法。
【学位授予单位】：电子科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R512.6;R512.91
【图文】：

试纸条,免疫层析

免疫层析试纸条的结构

试纸条,免疫层析,量子点,结构组成

量子点免疫层析试纸条和胶体金层析试纸条的组成基本一样，所不同的是量子点免疫试纸条的结合垫上喷涂的是免疫量子点。其组成结构如图4-1。图3-1 量子点免疫层析试纸条的结构组成

荧光光谱,抗HBsAg,单抗,斑点

子点试纸条与 CGIS 和 ELISA 法检测 HBsAg 临床样品集临床样品 58 份，其中 HBsAg 阳性样本 38 份，HBsAg 阴本课题研制的量子点试纸条、HBsAg 诊断胶体金试纸条和剂盒检测临床样品，三种方法检测临床 HBsAg 样品得出进行统计分析，评估量子点试纸条检测 HBsAg 的各项参数与讨论子点-抗 HBsAg 单抗偶联物的鉴定结果.2 节的实验，我们得到 530nm CdSe/ZnS QD-抗 HBsAg 单斑点和电泳验证试验，结果如图 3-2和图 3-3；荧光光谱和如图 3-4 和图 3-5。

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