医院获得性艰难梭菌感染患者重症化危险因素分析及益生菌防治机制研究

发布时间：2020-11-02 09:15

　　 第一部分医院获得性艰难梭菌感染流行病学特征及重症化危险因素分析艰难梭菌(Clostridium difficile,CD)是一种革兰阳性的严格厌氧芽胞杆菌,属于条件致病菌。艰难梭菌感染(Clostridium difficile infection,CDI)从1978年被证实与长期使用抗生素后引起的伪膜性肠炎有关以来,目前已经成为医院内获得性腹泻的最常见病因。在欧美等西方发达国家,艰难梭菌已超越耐甲氧西林金黄色葡萄球菌成为最常见的医院相关性感染病原体。随着近年来抗生素尤其是广谱抗生素的大量应用,以及欧洲和北美地区高毒力菌株的暴发流行,在全球范围内CDI的发病率,复发率以及病死率显著增加。而在我国,仅少部分医院逐渐开展了CDI的临床监测,但临床工作中对CDI的漏诊及误诊发生率仍相对较高,对医院获得性CDI重症化危险因素及不同类型艰难梭菌对患者预后的影响分析可借鉴资料相对较少。本研究在2009年9月至2016年9月期间监测我国一家综合性教学医院成人医院获得性CDI发生情况,进行艰难梭菌分离鉴定,毒素基因及MLST分型检测,分析成人医院获得性CDI患者的临床特征,利用Logistic回归和Cox回归分别筛选重症化危险因素和死亡危险因素,并利用Cox回归模型构建感染不同毒素分型和ST型艰难梭菌患者的生存曲线。最终从4199例住院腹泻患者粪便标本中筛选得到307例成人医院获得性CDI患者,其中A+B+CDT-型艰难梭菌占72.3%(222/307),A-B+CDT-型占23.5%(72/307),A+B+CDT+型菌株占4.2%(13/307)。307株产毒型艰难梭菌共分为33个ST型,ST-54,ST-35和ST-37型为本研究中的优势菌株,其中ST-54型占 18.2%(56/307),ST-35型占 16.5%(41/307),ST-37型占 15.0%(46/307)。根据CDI诊断标准,307例患者分为重症组66例以及非重症组241例;根据CDI确诊后30天内是否发生死亡,307例患者分为死亡组32例和存活组275例。多因素Logistic回归分析显示CDI合并血流感染,肺部感染和C反应蛋白≥ 100mg/L为成人医院获得性CDI重症化独立危险因素。多因素Cox回归显示患者年龄≥65岁,CDI合并血流感染,体温≥38.5℃,机械通气,结缔组织疾病,大环内酯类抗生素使用史,以及血浆白蛋白水平≤2.5mg/dL为CDI 30天全因死亡独立危险因素。此外,本研究中发现患者的预后与艰难梭菌不同毒素分型和ST型存在着密切的相关性。本研究可以为临床医务工作人员及时发现医院获得性CDI高危患者,提高CDI的早期诊断率以及感染防控提供强有力的支持,从而制定有效的CDI预防和治疗策略。第二部分戊糖片球菌LI05防治艰难梭菌感染的机制研究抗生素等药物的使用可以破坏肠道微生态平衡,减少肠道菌群的丰度和物种多样性,从而引起艰难梭菌相关性腹泻(Clostridium difficile-associated disease,CDAD)。目前临床上对CDI的治疗主要是使用甲硝唑和万古霉素,然而有超过20%的CDI患者在接受正规抗生素治疗后会出现复发,仅在美国每年因CDI而导致的额外医疗费用就高达15亿美元。近年来越来越多的研究发现益生菌的使用可能有助于修复因CDI造成的肠道菌群紊乱,在防治CDI中起到积极的作用。本研究中,我们通过在CDI小鼠模型中预防性使用益生菌戊糖片球菌LI05,通过观察小鼠一般情况及体重变化情况,检测粪便中艰难梭菌毒素水平,血清和肠道中细胞因子的表达水平,肠道组织病理变化,肠道屏障功能变化,肠道菌群和肠道代谢产物的变化,从而评估戊糖片球菌LI05在防治CDI中的疗效并探索其作用机制。研究结果显示CDI组小鼠具有典型的CDI肠道病理特征,肠道及血清中细胞因子表达水平明显升高,肠道屏障功能被破坏,肠道菌群结构发生紊乱,有益菌和正常定植菌丰度明显减少,条件致病菌丰度明显增加,肠道代谢产物中氨基酸代谢、醇类代谢和糖类代谢与正常组存在着明显的差异。在预防性使用戊糖片球菌LI05后,可以明显减少CDI小鼠体重丢失,降低粪便中艰难梭菌毒素水平,降低CDI小鼠死亡率。戊糖片球菌LI05可以调节肠道菌群结构,增加肠道菌群如Rikenellaceae、Porphyromonadaceae、Deferribacteraceae等细菌的丰度,抑制条件致病菌如Escherichia/Shigella的过度繁殖,改善肠道屏障功能,增加紧密连接蛋白ZO-1,occluding,claudin-1的表达,调节肠道代谢产物,抑制血清和肠道中促炎因子和趋化因子的过度表达,最终减轻因CDI而引起的局部及全身炎症反应。综上所述,本研究为用于防治CDI的微生态制剂的研究筛选出了一株具有潜在临床应用价值的益生菌,戊糖片球菌LI05可以通过调节肠道菌群及代谢产物,改善肠道屏障功能和调节血清及肠道细胞因子表达从而减轻CDI引起的炎症反应。
【学位单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R516
【部分图文】：

在２００９年９月至２０１６年９月期间于浙江大学医学院附属第一医院收集住院腹泻??患者的新鲜粪便标本，排除重复标本后共计４１９９份。对所有标本培养４８小时并进??行鉴定，如图１－１所示，艰难梭菌菌落肉眼下表现为灰白色，扁平略凸起，边缘不??整齐，毛破璃样菌落，无溶血，有马粪味。如图１－２所示，光镜下可见艰难梭菌呈??革兰阳性粗长芽胞杆菌，芽孢卵圆形，位于菌体次极端。纯化后的可疑菌落进行??ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ?ＭＳ质谱进行鉴定，鉴定分值２．０以上，则认为是艰难梭菌（图１－３）。??一、，ｇ?ｏ?、??图１－１艰难梭菌菌落肉眼形态?图１－２艰难梭菌革兰染色图??１?＆?■???，?■?－?■?■?｜?■?—．?．?■—?■?■■■?￣??１０?－－?，??〇?０?－?丨?Ｉ?Ｉ?｜??ｆ。。?十—＋｜卜……奢Ｉ?‘？???－１．０?－－??－１．５?．?．?—????１???????１?????????１?????????？１??Ｏ?５?１０?１５?２０??ｆｎｉｋ??图１－３艰难梭菌ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ?ＭＳ质谱鉴定图??

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本文编号：2866847